La tesis evalúa la estabilidad de la provitamina A en la pulpa liofilizada de tres morfotipos de aguaje (Mauritia flexuosa L.f). Mara Lujan Navarro presenta la tesis para obtener el título de Ingeniero Químico de la Universidad Nacional de la Amazonía Peruana. El documento describe los objetivos, materiales y métodos para determinar la cantidad de provitamina A en las muestras de pulpa liofilizada de tres morfotipos de aguaje a lo largo del tiempo.
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA
FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA
TESIS : EVALUAR LA ESTABILIDAD DE LA PRO VITAMINA A EN LA PULPA LIOFILIZADA DE TRES MORFOTIPOS DE AGUAJE (Mauritia flexuosa L.f)
PRESENTADO POR : MARA LUJAN NAVARRO
PARA OPTAR EL TITULO DE INGENIERO QUIMICO
ASESORES : Dra. MARITZA GRANDEZ RUIZ Dr. VICTOR E. SOTERO SOLIS
IQUITOS PER
2010 UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA
FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA
TESIS: EVALUAR LA ESTABILIDAD DE LA PRO VITAMINA A EN LA PULPA LIOFILIZADA DE TRES MORFOTIPOS DE AGUAJE (Mauritia flexuosa L.f)
PRESENTADO POR: MARA LUJAN NAVARRO
PARA OPTAR EL TITULO DE INGENIERO QUIMICO
JURADOS
Dr.Cesar saenz Presidente
. Ing. Luis Gmez Tuesta Ing. Armando Cabrera Miembro Miembro
D E D I C A T O R I A
Quien me Dio toda las fuerzas para continuar adelante y seguir Firme en mis decisiones Dios, El que siempre estuvo a mi lado y me sostuvo de mi mano derecha para no desmayar ante las aflicciones de la vida.
A mis padres Daniel y Azalia por La pacincia y La perseverencia en impulsarme siempre hacia adelante con humildad y optimismo para alcanzar los retos de La vida.
A mis hermanos Alan y David por sus incanzables bromas y sus sarcasmos contnuos y a mi gran tesoro mi hijo Diego Alonso mi mayor inspiracin
A G R A D E C I M I E N T O
Al Instituto de Investigaciones de la Amazona Peruana por la oportunidad de haber brindado las condiciones e instalaciones necesarias para poder realizar la ejecucin del presente estudio.
Al Instituto de Medicina Tradicional (IMET) en especial al Dr. Ernesto Nina Chora por el asesoramiento incondicional y la facilidad de brindar la informacin pendiente en la culminacin del presente estudio
A la Facultad de Ingeniera Qumica; Laboratorio de Qumica Analtica por facilitar la enseanza en las ejecuciones de anlisis pendientes en la realizacin del presente estudio
A la Ing. Flor de Mara Colome por su enseanza en la utilizacin de las isotermas de adsorcin.
A la biblioteca especializada de la Facultad de Ingeniera Qumica por brindarme el acceso para obtener informacin sobre el presente trabajo
A todas las personas que colaboraron directa o indirectamente para la realizacin y culminacin del presente trabajo
El presente estudio se realizo con el apoyo financiero de INCAGRO con el proyecto Mejoramiento gentico, caracterizacin molecular y tecnologas de alto valor agregado del aguaje (Mauritia flexuosa L.f) de la Amazona convenio que se dio con el IIAP.
INDICE
Agradecimientos ............................................................................................................ vii Resumen .. 1 Introduccin .. 2 Objetivos .. 6 Capitulo I Generalidades sobre la materia prima 7 1.1 Identificacin .. 7 1.2 Distribucin, Ecologa y edafologa .................................................................................... 8 1.3 Descripcin . 9 1.4 Utilizacin . 10 1.5 Produccin y cosecha . 11 1.6 Conservacin y valor nutritivo . 11 1.7 Minerales y micronutrientes que se encuentran presentes en el fruto 13
Capitulo II Descripciones que se determinaran en la materia prima . 15 2.1 Pro vitamina 15 2.1.1 Diferencia entre vitamina y pro vitamina . 15 2.1.2 Distribucin y estado natural . 15 2.1.3 Los retinoides y los carotenoides tienen actividad de vitamina A.. 16 2.1.4 Conversin de |-caroteno en vitamina A . 17 2.1.5 El |-caroteno 18 2.1.6 Actividad biolgica . 19 2.1.7 Importancia . 21 2.2 Cpsulas 22 2.2.1 Cpsulas amilceas .. 24 2.2.2 Cpsulas gelatinosas .. 25 2.3 Estabilidad ........................................................................................................... 26 2.4 Secado o deshidratacin . 33 2.5 Liofilizacin 35 2.5.1 Operaciones unitarias en la liofilizacin . 34 2.5.2 Ciclo de la liofilizacin . 36 2.5.3 Congelacin del producto. 36 2.5.4 Transferencia de masa y de calor en la liofilizacin 37 2.6 Isotermas de adsorcin 39 2.6.1 Descripciones de isotermas de adsorcin en fisicoqumica 40 2.6.2 Modelos de equilibrio higroscpico 41 2.6.3 Actividad de agua 42 2.6.4 Formas de manejar la actividad de agua 44 2.6.5 Medicin de la actividad de agua 45 2.6.6 Relacin entre la actividad de agua y la humedad relativa en equilibrio 46 2.6.7 Relacin entre la actividad de agua y el contenido de agua .. 46 2.6.8 Relacin entre la actividad de agua y la temperatura .. 47 2.7 Actividad antioxidante . 48 2.7.1 Antioxidantes . .. 48 2.7.2 Las vitaminas y los antioxidantes esenciales .. 49
Capitulo III Materiales y mtodos .. 51 3.1 Localizacin de la materia prima .. 50 3.2 Preparacin del material 50 3.3 Materiales de laboratorio 51 3.4 Equipos, instrumentos y otros .. 52 3.5 Reactivos y disolventes .. 52 3.6 Metodologa .. 52 Capitulo IV Resultados y discusiones 59 4.1 Evaluacin qumica antes del liofilizado 59 4.2 Determinacin del peso del fruto por liofilizacin 60 4.3 Humedad de equilibrio experimental . 61 4.4 Estabilidad ... 67 4.5 Pro vitamina 71 4.6 Micronutrientes y minerales .. 73 4.7 Actividad antioxidante .. 75
FIGURAS Figura 1: Color de los morfotipos de aguaje . 3 Figura 2: Planta de aguaje . 7 Figura 3: Diferentes tamaos y formas de los morfotipos . 9 Figura 4: Frutos de aguaje ............... 9 Figura 5: Representacin estructural del |-caroteno en vitamina A . 17 Figura 6: El |-caroteno y su divisin a retinaldehdo, reduccin a retinol y la oxidacin a cido retinoico 19 Figura 7: Absorcin de vitamina A preformada y pro vitamina A del intestino delgado.. 20 Figura 8: Cpsulas de aguaje liofilizado . 23 Figura 9: Conversin de carotenoide 5,6-epxidos en 5,8-furanoides 31 Figura 10: Procesos / operaciones que se dan en la liofilizacin 35 Figura 11: Ciclo que presenta un producto en la liofilizacin 36 Figura 12: Balance de masa y de calor que se ejecuta en la liofilizacin 38 Figura 13: Isoterma de desorcin de agua en la que se muestra la histresis 45 Figura 14: Racimo de aguaje despus de la recoleccin . 50 Figura 15: Tratamiento de maduracin de frutos de aguaje .. 51 Figura 16: Estructura de la Pro vitamina A ( caroteno) .. 56 Figura 17: Estructura de la Vitamina A (Retinol) .. 56 Figura 18: Ajuste de los valores experimentales de morfotipo amarillo ecuacin BET .64 Figura 19: Ajuste de los valores experimentales de morfotipo color ecuacin BET .. 64 Figura 20: Ajuste de los valores experimentales de morfotipo Shambo ecuacin BET 65 Figura 21: Ajuste de los valores experimentales de morfotipo Amarillo ecuacin GAB .. 65 Figura 22: Ajuste de los valores experimentales de morfotipo color ecuacin GAB.. 66 Figura 23: Ajuste de los valores experimentales de morfotipo shambo ecuacin GAB 66
CUADROS
Cuadro 1: Concentracin de |-caroteno y o-tocoferol de los morfotipos color, amarillo y shambo..... 12 Cuadro 2: Valor nutricional de minerales encontrados en tres morfotipos de la pulpa fresca de aguaje (Mauritia flexuosa L.f)..................................................................................................14
TABLAS
Tabla 1: Evaluacin qumica de pulpa de aguaje fresca antes de liofilizar 60
Tabla 2: Peso de aguaje de pulpa fresca y liofilizada 61
Tabla 3: Comportamiento qumico de muestras liofilizadas de aguaje, para los Morfotipos Amarillo, Color y Shambo .. .. 69
Tabla 4: Determinacin de anlisis microbiolgicos 71
Tabla 5: Estabilidad del -caroteno (mg/100g) en cpsulas de gelatina conteniendo pulpa liofilizada de aguaje de tres morfotipos almacenadas a 30C, por espectrofotometra a luz visible de 450nm . 74
Tabla 6: Datos experimentales de metales obtenidos en el aguaje Liofilizado de tres morfotipos . 75
Tabla 7: Evaluacin de la actividad antioxidante, como porcentaje de inhibicin del radical DPPH por la pulpa liofilizada de tres morfotipos de aguaje 76
Tabla 8. Evaluacin de la actividad antioxidante por secuestro del radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) y determinacin del IC 50 en extracto metanlico de camu camu .. 77
Tabla 9: Evaluacin de la actividad antioxidante por secuestro del radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) y determinacin del IC 50 en extracto metanlico de Anona, Chope, Huasa, Huito, Uvilla y Castaa 78
CONCLUSIONES RECOMENDACIONES BIBLIOGRAFA RESUMEN
El objetivo del presente estudio, se orienta en determinar la estabilidad de la pro vitamina A de tres morfotipos de aguaje: Amarillo, Color, Shambo. Extrayendo la pulpa fresca de estos frutos, se procedi a liofilizarlos, sometidas a deshidratacin a -50 C.
Se evalu la estabilidad de la pro vitamina A, que se encuentra presente en la pulpa liofilizada de aguaje, evaluando su comportamiento en cpsulas de gelatina, sometida hermticamente en una estufa, a temperatura 30C denotando la presencia de la misma, mediante el mtodo de espectrofotometra, que indica la presencia de -caroteno. Tambin se realiz anlisis bromatolgicos, para determinar el tiempo de vida til de la muestra dentro de su envoltura, lo cual indica que al pasar el tiempo, la prdida en la firmeza del producto, normalmente es el resultado de un cambio qumico, que puede ocurrir a travs de la interaccin entre los ingredientes dentro de un producto, o raramente entre el producto y recipiente. Su comportamiento microbiolgico antes de que las muestras sean encapsuladas, indica la presencia de Bacterias Heterotrficas y Mohos con una posible contaminacin de la muestra, siendo el lmite 10 3 UFC/mL para mohos y levaduras; donde se observa, que despus de seis meses de almacenamiento se pierden a un rango inferior a10.
Para determinar, si la pulpa de aguaje liofilizada es propensa a ganar humedad fcilmente del ambiente en que se encuentra, se ejecut el anlisis de humedad de equilibrio para cada morfotipo utilizando el mtodo de las isotermas de adsorcin y as determinar si la muestra analizada es higroscpica o no. As mismo, se analiz la actividad antioxidante para cada morfotipo, con concentraciones de dilucin de 10000 g/mL, 3000 g/mL, 1000 g/mL y 300 g/mL en metanol, antes de que las muestras fueran encapsuladas.
INTRODUCCIN
El aguaje (Mauritia flexuosa L.f.), es una de las especies representativas de la selva baja peruana y su fruto es muy apreciado por los pobladores de esta regin, en contraste con otros pases amaznicos, es en el Per donde se aprecia el consumo de su pulpa, ya sea en forma directa o en refrescos, helados, yogures, mermeladas entre otros usos se trata de una palmera nativa de la amazona, se considera originaria de las cuencas de los ros Huallaga, Maran y Ucayali en el Per. Tiene amplia distribucin en la cuenca amaznica de Bolivia, Brasil, Colombia, Ecuador, Venezuela y Guyana. Prospera en terrenos temporales o permanentemente inundados, preferentemente en reas pantanosas o con mal drenaje de histosoles cidos (FLORES, 1997).
El aguaje, desempea un papel importante en la compleja cadena alimentara del bosque tropical, debido a que su fruto es alimento importante de especies como el majaz, sajino, huangana, sachavaca, entre otras especies de aves y peces.
An despus de muerto, el aguaje sigue siendo til, puesto que en los troncos cados se cran larvas de colepteros de la familia Curculionidae (Suris), los cuales constituyen un complemento a la dieta proteica y son muy apetecidos por su sabor y alto contenido de grasa. De esta manera, el aguaje juega un papel importante en algunas comunidades indgenas; encontrndose, adems, ligada al origen, historia y mitologa de nuestra cultura (URREGO, 1987).
Publicaciones recientes nos indican que su alto contenido de vitamina A, convierte al fruto del aguaje, en un recurso inigualable para la dieta de nios y madres gestantes, pues ayuda a la formacin y el mantenimiento de dientes sanos, tejidos blandos y seos, membranas mucosas y la piel. Esta vitamina contribuye a mejorar la visin, especialmente ante la luz tenue y tambin, es necesaria durante la reproduccin y la lactancia (IIAP, 2006).
La estabilidad es la capacidad de mantener un principio activo de un producto que aseguren sus propiedades fsicas, qumicas y microbiolgicas dentro de lmites especificados (ISPC ,1995).
Los carotenoides, son los pigmentos responsables de la mayora de los colores amarillos, anaranjados y rojos de frutos y verduras, debido a la presencia en su molcula de un cromforo consistente, total o principalmente en una cadena de dobles enlaces conjugados. Estn presentes en todos los tejidos fotosintticos, junto con las clorofilas, as como, en tejidos vegetales no fotosintticos, como componentes de cromoplastos, que pueden ser considerados cloroplastos degenerados. (HARPER, 2002)
Los diferentes morfotipos de frutos encontrados del aguaje se caracterizaron basndose en la clasificacin propuesta por (VILLACHICA, 1996) morfotipo amarillo o ponguete, con mesocarpio amarillo; morfotipo color, parte superficial del mesocarpio rojo y parte interna amarillo; y el morfotipo shambo, con mesocarpio totalmente rojo (Figura 1).
Figura 1. Color de pulpa del fruto maduro de aguaje de los morfotipos amarillo (A), color (B) y shambo (C).
A B C
Qumicamente, los carotenoides son terpenoides, formados bsicamente, por ocho unidades de isopreno, de tal forma, que la unin de cada unidad se invierte en el centro de la molcula. En los carotenoides naturales slo se encuentran tres elementos: C, H y O. El oxgeno, puede estar presente como grupo hidroxilo, metoxilo, epoxi, carboxilo o carbonilo. Dentro de los carotenoides podemos distinguir dos grupos: los carotenos, que son hidrocarburos, y las xantofilas, que poseen oxgeno en su molcula (RODRIGUEZ-AMAYA, 1992)
El National Cancer Institute (NCI), Washington, Estados Unidos, sealan que el -caroteno natural puede proteger a seres humanos y animales de varios tipos de cncer. De hecho, los carotenoides naturales, junto con la vitamina E, pueden ser los anticancergenos ms importantes presentes en los alimentos (CALVO, 2000).
Actualmente es posible obtener pulpa congelada, concentrada, deshidratada, atomizada de pulpa de camu camu, lo cual se predice que puede obtenerse pulpa refinada, liofilizada, atomizada y productos con alto valor agregado como sachets, polvos hidrolizables, complementos vitamnicos, entre otros. (VSQUEZ, 2000).
Uno de los procesos ms adecuados, es la liofilizacin, que genera la deshidratacin por congelacin y sublimacin, bajo condiciones cuidadosamente controladas de presin y temperatura, para dejar una estructura que revierta el estado previo, por adicin de agua (AMOS, 1986). Estos procesos son muy importantes para incrementar el contenido vitamnico de la pulpa del aguaje, as como, para conservar la pro vitamina A, por el mayor tiempo posible sin sufrir mayor disminucin, ya que es considerada la ms sensible y lbil, susceptible de deteriorarse fcilmente por oxidacin, cambios de pH, temperatura y accin de la luz, entre otros (BELITZ, 1982).
Los anlisis bromatolgicos, muestran una buena concentracin de aceite que posee la pulpa del aguaje (Mauritia flexuosa L.f). As como la presencia de pro vitamina A ( caroteno) o tambin conocida como vitamina A que es el nombre genrico utilizado para describir al retinol, sus steres y los correspondientes ismeros. Slo est presente, como tal, en los alimentos de origen animal, que son los mamferos y peces marinos, aunque en los vegetales se encuentra como pro vitamina A en forma de carotenos.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Realizar la evaluacin de la estabilidad de la pro vitamina A, en la pulpa liofilizada de tres morfotipos de aguaje (Mauritia flexuosa L.f.).
OBJETIVOS ESPECFICOS
Realizar los anlisis qumicos bromatolgicos, de la pulpa de tres morfotipos de aguaje en estudio antes y despus de la liofilizacin
Anlisis de la pro vitamina A y su comportamiento en las pulpas liofilizadas
Determinar las curvas de adsorcin de la pulpa de aguaje liofilizado y su comportamiento a diferentes concentraciones de actividad de agua, para predecir sus equilibrios de saturacin y clasificarlos de acuerdo a su comportamiento.
Evaluar la actividad antioxidante de las pulpas liofilizadas
Evaluar la estabilidad de las muestras liofilizadas a temperatura ambiente y encapsulada durante seis meses de almacenamiento.
CAPTULO I
GENERALIDADES SOBRE LA MATERIA PRIMA
1.1 IDENTIFICACIN
Taxonoma de la planta
CARLOS LINNEO, 1781; clasifica su taxonoma del Aguaje (Mauritia flexuosa) de la siguiente manera:
Reino : Vegetal Divisin : Magnoliophyta Clase : Liliopsida Orden : Arecales Familia : Arecaceae Sub Familia : Calamaoideae Tribu : Lepidocaryeae Gnero : Mauritia Especie : Mauritia flexuosa L.f. Nombre cientfico : Mauritia flexuosa L. F. Nombre Comn : Aguaje, achual (Per); Caranday-guazu, ideu (Bolivia); Buriti, burit-do-brejo, miriti, buritirana (Brasil); Canangucha, moriche, aguaje, mirit (Colombia); Moriche (Venezuela).
Sinnimos errneos : Mauritia vinfera Mart.
1.2 DISTRIBUCIN, ECOLOGA Y EDAFOLOGA
El Aguaje (Mauritia flexuosa L.f), es una de las palmeras ms abundantes en Sudamrica; se distribuye en el occidente por Colombia, Ecuador, Per y Bolivia; y hacia el oriente a travs de las cuencas del Amazonas y del Orinoco por Venezuela, las Guyanas, Trinidad y los estados brasileos de Baha, Gois, Mato Grosso, Minas Gerais y Sao Paulo.
En la selva peruana, se cultiva y explotan poblaciones naturales en los departamentos de Loreto, Ucayali, Hunuco y San Martn. Aunque, crece a baja altitud, puede ser encontrado ocasionalmente en las faldas de los andes orientales, hasta los mil metros de altitud (Figura 2) (CALZADA ,1980).
El aguaje, tambin llamado buriti, en Brasil y morich, en Colombia y Venezuela, fue la primera palmera amaznica descrita por la ciencia, (ACERO 1979). Actualmente, es considerada como una planta promisoria, que puede mejorar la calidad de vida de los hombres y mujeres que viven en la Amazona.
El hbitat natural del aguaje, est formado por pantanos y zonas de drenaje pobre, donde predominan los suelos permanente o temporalmente inundados. (CASTRO, 1993). En estas agrupaciones, denominadas aguajales, los pobladores nativos distinguen dos tipos de ecosistemas: una formacin mixta de aguaje con ungurahui y otras especies llamada sacha aguajal, y una formacin casi pura, llamada aguajal.
Figura 2. Planta de aguaje 1.3 DESCRIPCIN
La fructificacin se inicia entre los 7-8 aos de plantado, cuando logran una altura de 6-7m. La fructificacin es todo el ao, con mayores concentraciones entre los meses de febrero-agosto y relativa escasez los meses de setiembre- noviembre. El momento ptimo de cosecha es cuando los frutos tienen un color marrn intenso y los frutos se desgajan fcilmente. El aguaje produce en promedio ocho racimos por palmera, y cada racimo produce aproximadamente 725 frutos, por lo que la media estimada es de 290 kilos por palmera. El fruto es una drupa, subglobosa o elptica, mide 5-7 cm. de longitud y 4-5 cm. de dimetro, el peso vara 40-85 g.; el epicarpo es escamoso de color pardo a rojo oscuro; el mesocarpo suave, amilceo, de color amarillo, anaranjado o anaranjado rojizo, tiene un espesor de 4-6 mm y constituye entre el 10-21% del fruto; el endocarpo es una lmina delgada de color blanco. La semilla, 1-2 por fruto, es subglobosa, slida y con albumen blanco; constituye el 40-44,5% del fruto (GEILFUS, 1994). En cuanto a su gran variabilidad morfolgica y tamao, existen diversas formas y cantidad de pulpa de los frutos independiente del color de mesocarpio. El tamao de los frutos vara entre 3.66 a 6.78 cm de longitud y de 2.13 a 4.28 cm de dimetro (Figura 3), mientras que la forma puede ser ovoidea o elptica. La variabilidad observada en estas caractersticas fue independiente entre y dentro de los morfotipos. (OCHOA, 2009)
Figura 3. Diferentes tamaos y formas de los morfotipos de frutos estudiados del aguaje (Mauritia flexuosa L. f.) 1.4 UTILIZACIN
Fruto
El uso principal del fruto es en alimentacin directa humana. El fruto maduro se ablanda en agua limpia a una temperatura de 60C durante un lapso de 4 a 6 horas aproximadamente, las escamas se eliminan y se extrae el mesocarpo. Las bebidas de aguaje se preparan diluyendo el mesocarpo, en agua con azcar o sometiendo a fermentacin; el mesocarpo tambin puede deshidratarse y reconstituirse para bebidas (Figura 4). El consumo tradicional del aguaje, es masticando directamente el mesocarpo del fruto. Otros productos que se obtienen del mesocarpo son harinas y aceite.
Otras partes de la planta
El aguaje es una especie de uso mltiple. De las hojas se obtienen fibras para uso domstico y artesana; las hojas se usan directamente en el techado de viviendas rsticas; del pecolo se obtiene pulpa para papel. Las inflorescencias jvenes se cortan o amarran para colectar savia dulce que se consume directamente fermentado como bebida alcohlica o se hierve para obtener azcar (92,7% sacarosa, 2,3% azcares reducidos, 1,9% ceniza), (URREGO, 1987).
El estpite o tallo se utiliza como puente. De la mdula del tronco se obtiene harina comestible con alto contenido de almidn; en las palmas cadas o tumbadas y en pudricin proliferan larvas denominadas "suris" (Rhynchoporus palmarum) de consumo humano crudos, asados o cocinados. (MEJIA, 1992).
Figura 4. Frutos de aguaje 1.5 PRODUCCIN Y COSECHA
El aguaje, da inicio a su fructificacin entre los 7-8 aos despus de la plantacin, cuando alcanzan una altura de 6-7m; aunque han sido observadas plantas de menor porte que iniciaron la fructificacin a partir del 4 to ao. La fructificacin aparentemente ocurre todo el ao, con mayores concentraciones entre los meses de febrero-agosto y relativa escasez los meses de setiembre- noviembre.
El momento ptimo de cosecha del racimo, es cuando los frutos adquieren una coloracin marrn ms intenso y los frutos se desgajan fcilmente. La cosecha del fruto en los sistemas naturales sin manejo, es de la planta derribada y en sistemas manejados, se utilizan subidores o plantas de apoyo para alcanzar los racimos y cortar con machete. Tambin, se utilizan varas largas provistas de ganchos que desgajan los racimos y los frutos se recolectan manualmente del suelo. La produccin en sistemas naturales, se estima en 6,1 TM/ha en el Per y 9,1 TM/ha en Colombia; bajo cultivo, en plantaciones de monocultivo de 100 palmas/ha, se obtiene 19 TM/ha con promedio de 190 kg/planta por ao (IIAP, 2006).
1.6 CONSERVACIN Y VALOR NUTRITIVO DEL FRUTO
Los frutos del aguaje son perecibles, cuando estn maduros, despus de la cosecha pueden conservarse sin deterioro hasta 7 das. El mesocarpo preparado en pasta puede conservarse en refrigeracin o congelamiento; puede tambin deshidratarse y reconstituirse en bebidas.
La pulpa del aguaje, es el alimento ms nutritivo de los frutos del trpico, en la tecnologa de los alimentos el trmino secado se refiere a la desecacin natural, como la que se obtiene exponiendo la fruta a la accin del sol, y el de deshidratacin designa el secado por medios artificiales, como una corriente de aire caliente. En la desecacin por congelacin o liofilizacin, se someten alimentos congelados a la accin del vaco en una cmara especial hasta lograr la sublimacin de la mayor parte de su contenido en agua. La eliminacin del agua ofrece una excelente proteccin frente a las causas ms comunes de deterioro de los alimentos. Los microorganismos no pueden desarrollarse en un medio carente de agua, la actividad enzimtica es casi inexistente y la mayora de las reacciones qumicas se retardan de forma importante. La verdura, la fruta, la carne, el pescado y otros alimentos cuyo contenido en agua puede llegar hasta un promedio del 80% de media, pueden secarse hasta una quinta parte de su peso y alrededor de la mitad de su volumen original (SOTERO, 2006). Para la pulpa de aguaje la eliminacin de agua alcanza 53.6% de agua de muestra fresca, conservando mayor cantidad de -caroteno 1062 mg/100g vitamina A natural cinco veces mas que la zanahoria, siendo el cuadro N 1, el que presenta la composicin de carotenos y tocoferoles de los morfotipos de aguaje. Color, Amarillo y Shambo, (VSQUEZ, 2008).
Cuadro N 1. Concentracin de - caroteno y - tocoferol de los morfotipos color, amarillo y shambo
1.7 MINERALES Y MICRONUTRIENTES QUE SE ENCUENTRAN PRESENTES EN EL FRUTO
Los nutrientes, son compuestos que forman parte de los alimentos, los obtenemos por medio del proceso de la digestin y son importantes para un correcto funcionamiento de nuestro metabolismo. Los nutrientes se clasifican en: "macronutrientes" (protenas, lpidos, hidratos de carbono), aquellos que se encuentran en mayor proporcin en los alimentos y que adems nuestro organismo necesita en cantidades mayores, y "micronutrientes" (vitaminas y minerales), que se encuentran en concentraciones mucho menores en los alimentos y de los que tambin el organismo necesita cantidades menores para su funcionamiento.
Los minerales, son micronutrientes inorgnicos que el cuerpo necesita en cantidades o dosis muy pequeas; entre todos los minerales suman unos pocos gramos, pero, son tan importantes como las vitaminas, y sin ellos nuestro organismo no podra realizar las amplias funciones metablicas que realizamos a diario, la sntesis de hormonas o elaboracin de los tejidos. Constituyen slo el cinco por ciento de la masa corporal y de los 28 existentes slo una docena es considerada esencial Los micronutrientes, clsicamente considerados como compuestos esenciales para la vida humana, comprenden 13 vitaminas y unos 16 minerales. Tanto vitaminas como minerales no son sintetizados por el organismo humano (o en algunos casos s pero en cantidades insuficientes), por lo tanto, depende de la alimentacin para obtenerlos, siendo en general una buena fuente para la mayor parte de ellos las frutas y hortalizas. Los micronutrientes, son esenciales para el correcto crecimiento y desarrollo del organismo humano, la utilizacin metablica de los macronutrientes, el mantenimiento de las adecuadas defensas frente a enfermedades infecciosas, As como de muchas otras funciones metablicas y fisiolgicas (KIIRK, SAWYER, EGAN, 1996)
En el cuadro N 2: se muestra el valor nutricional de minerales que se encuentran presentes en tres morfotipos de la pulpa fresca de aguaje, obtenidas por (VSQUEZ, 2008)
Cuadro N 2 Valor nutricional de minerales encontrados en tres morfotipos de la pulpa fresca de aguaje (Mauritia flexuosa L. f)
Fuente: Vsquez (2008)
MINERALES AMARILLO mg/100g COLOR mg/100g SHAMBO mg/100g Zn 0,58 0,70 0,90 Ca 137,79 89,14 132,49 Cu 0,28 0,69 0,43 Na 8,18 9,20 20,76 Mg 44,12 44,08 98,61 Mn 10,96 7,72 6,62 K 390,36 312,31 660,81 Fe 1,18 0,55 0,83 CAPTULO II
DESCRIPCIONES QUE SE DETERMINARN EN LA MATERIA PRIMA
2.1 PRO VITAMINA 2.1.1 Diferencia entre vitamina y pro-vitamina La vitamina, es una sustancia que el cuerpo necesita, pero no la produce, y la pro vitamina, es una sustancia precursora de la vitamina, le falta algo para transformarse en vitamina, y ese proceso lo hace el hombre. El organismo, constantemente remplaza las clulas viejas y gastadas por otras nuevas y se necesita la vitamina A, para producir clulas sanas de reemplazo. La nica forma de obtenerla es por medio de alimentos de origen animal como el huevo, el hgado, pollo, leche y productos lcteos que contienen retinoles de forma natural. Pero, se descubrieron otras maneras de obtener esta vitamina y fue comiendo alimentos de origen vegetal, que contengan carotenos, los carotenos pertenecen a la familia de los carotenoides de los vegetales. El organismo, es capaz de transformarlo en vitamina A, en el intestino delgado. Posee conjuntamente las propiedades de la vitamina A y de los antioxidantes que actan sobre los radicales libres (RODRIGUEZ, 1999).
2.1.2 Distribucin y estado natural Los carotenoides, se encuentran ampliamente distribuidos en el reino vegetal, en bacterias y muy pocos se han reportado en animales (por ejemplo, los colores rojizos de las plumas del flamenco, son debidos a la cantaxantina, un carotenoide) y particularmente, invertebrados marinos como las esponjas. Estrellas de mar, pepinos de mar, erizos de mar y otros. En los animales superiores, el |-caroteno es un requerimiento dietario esencial, pues, es precursor de la vitamina A. Se conocen ms de 600 carotenoides, y se les encuentra en forma libre, como steres de cidos grasos o como Glicsidos. Sin embargo los Glicsidos carotenoides son muy raros, (ejemplo es la crocina). Los carotenoides, se encuentran principalmente en partes areas de las plantas, especialmente en hojas, tallos y flores, en frutos (tomate, pimentn, etc) y en menor proporcin en races (la zanahoria) (MENDOZA, 2003)
2.1.3 Los retinoides y los carotenoides tienen actividad de vitamina A Los o, | y o carotenos, as como, la criptoxantina, son los carotenoides pro vitamina A ms importantes por su cantidad. Aunque pareciera que una molcula de |-caroteno, produce dos de retinol, en la prctica no sucede as; 6g de |-caroteno equivalen a 1g de retinol preformado. Por ende, la cantidad total de vitamina A, en los alimentos se expresa en microgramos de equivalentes de retinol. El |-caroteno y otros carotenoides, precursores de la vitamina A, se dividen en la mucosa intestinal por accin del caroteno dioxigenasa, con lo que se obtiene retinaldehdo, el cual se reduce a retinol, se eterifica y se secreta en los quilomicrones junto con steres formados con el retinol de la dieta. La actividad intestinal del caroteno dioxigenasa es baja, por lo que un alto porcentaje del |-caroteno ingerido aparece sin cambios en la sangre.
A pesar de que el sitio principal de accin de la dioxigenasa de caroteno, es el enlace central del |-caroteno, tambin puede ocurrir una ruptura asimtrica, lo que conduce a la formacin de 8, 10, 12- apocarotenales, los cuales se oxidan hasta cido retinoico pero no pueden utilizarse como fuentes de retinol o de retinaldehdo (HARPER, 2002).
2.1.4 Conversin de |-caroteno en vitamina A Los carotenoides, se dividen en dos grupos principales: carotenos y xantofilas. Ambos tipos son pigmentos insolubles en agua de amplia distribucin en la naturaleza, aunque son ms abundantes en las plantas y las algas. Los carotenos, son hidrocarburos puros, mientras que las xantofilas, son derivados que contienen oxgeno. Los primeros son ms abundantes y los nicos que se estudiarn.
El carotenoide ms comn, es el |-caroteno (figura 5). Es un hidrocarburo C 40
formado por una cadena insaturada, muy ramificada, que contienen estructuras anulares sustituidas idnticas en cada extremo. Prcticamente, todos los dems carotenoides pueden considerarse variantes de esta estructura. Tiene gran importancia en el rompimiento enzimtico simtrico del |-caroteno, en dos molculas de vitamina A. En los animales, esta conversin representa una de las principales fuentes naturales de esa vitamina.
Figura 5. Representacin estructural del |-caroteno en vitamina A CH 3
H 3 C H 3 C |-caroteno (C 40 H 56 ) El rompimiento oxidativo en este enlace produce dos unidades de vitamina A Todos los enlaces dobles tienen la configuracin trans H 3 C CH 3
CH 3
CH =CH-C=CH-CH=CH- C=CH-CH 2 OH CH 3 CH 3
Vitamina A (forma alcohlica) Retinol 2.1.5 El |- caroteno En los productos animales, la vitamina A, de la alimentacin, existe como steres de retinol de cidos grasos de cadena larga. En los vegetales, la vitamina de la alimentacin existe como una pro vitamina en forma de |-carotenos, los cuales son pigmentos amarillos, los steres de retinol son hidrolizados dentro de la luz intestinal y absorbida directamente en los intestinos. Los |-carotenos, ingeridos (figura 6), son desdoblados por la va oxidativa mediante el |-caroteno dioxigenasa. Este desdoblamiento utiliza oxgeno molecular y requiere sales biliares y lecitina in vitro, para formar 2 molculas de retinaldehdo (retinol). Tambin, en la mucosa intestinal, el retinaldehdo, es reducido por medio de una reductosa especfica que utiliza NADPH, para formar retinol. Una pequea fraccin del retinol formado a partir del |-caroteno, es oxidada a cido retinoico en el mismo intestino. El cido retinoico es absorbido a travs del sistema porta y por lo general no se acumula en el hgado o en otros tejidos. El cido retinoico puede ser metabolizado a compuestos ms polares y excretado en la orina y en la bilis (HARPER, 2002) El retinol absorbido es esterificado nuevamente con cidos grasos saturados de cadena larga, incorporando a los quilomicrones de la linfa y entonces penetra del torrente sanguneo. Por ltimo, los steres del retinil son hidrolizados y esterificados nuevamente como palmitato de retinil para ser almacenados en las gotas de los lpidos hepticos. El retinol almacenado es movilizado del hgado por hidrlisis de su ter y por fijacin del retinol a la protena fijadora de esporetinol, la cual es sintetizada en el hepatocito. As el complejo retinol-protena fijadora, llamado protena fijadora de holoretinol, entra en circulacin y libera el retinol a los tejidos blancos (HARPER, 2002)
Figura 6. El |-caroteno y su divisin a retinaldehdo, reduccin a retinol y la oxidacin a cido retinoico.
2.1.6 Actividad biolgica Es conocido que los carotenoides de las frutas y verduras de la dieta son la principal fuente de vitamina A. La molcula de |-caroteno, se parte en dos molculas de vitamina A (retinol), proceso que ocurre en el intestino y en el que participa un complejo enzimtico dioxigenasa (Figura 7). Cualquiera de los carotenoides que posean el anillo | no sustituido, caracterstico del |-caroteno, es precursor de la vitamina A. Por ejemplo o-caroteno,|,|-caroteno-5,6-epxido y |-criptoxantina (ORTIZ, 2003) H 3 C CH 3
CH 3
CH 3 CH 3
CH 3 CH 3
CH 3
CH 3
H 3 C |-caroteno O2 Sales biliares |-caroteno Dioxigenasa CH 3
Figura 7. Absorcin de vitamina A preformada y pro vitamina A del intestino delgado. RE = ster de retinilo; ROH = retinol; CM= quilomicrn (BLOMHOFF, 1994). Los carotenoides de pro vitamina A, pasan inalterados a las clulas de la mucosa. Una parte de cada uno, junto con los carotenoides que no son pro vitamina, pasa inalterada a la linfa y a la sangre. El resto experimenta la divisin de la molcula por una enzima 15,15-dioxigenasa especfica dentro de la clula de la mucosa intestinal. Este proceso tambin puede tener lugar dentro del hgado y algunos otros tejidos (GOODMAN, et. al. 1966). La divisin simtrica de la molcula de -caroteno, produce dos molculas de retinal, el cual se reduce y esterifica a ster de retinilo en gran medida. Parte de la divisin es asimtrica y produce menos retinal (Figura 6). En la prctica, el - caroteno y otros carotenoides de pro vitamina A, tienen slo una fraccin de la actividad del retinol. El retinol, es esterificado dentro de las clulas de la mucosa antes de ser incorporado a los quilomicrones (Figura 7). En este proceso, un tipo especfico de Protena Celular Fijadora de Retinol (conocida como CRBPII por sus siglas en ingls) transporta el retinol liposoluble a travs de los medios acuosos y lo entrega a la enzima Lecitina: Aciltransferasa de Retinol (conocida como LRAT por sus siglas en ingls) (MACDONALD, et. al 1987). Esta parece ser la enzima intestinal principal, que esterifica normalmente el retinol y luego lo entrega a los quilomicrones. El uso biomdico de los carotenoides est fundamentalmente dirigido a la produccin de vitamina A. Sin embargo, actualmente se investiga el potencial del licopeno, la lutena y la zeaxantina, en la prevencin de enfermedades como el cncer y la enfermedad coronaria. Algunos estudios recientes son: - El |-caroteno, suplemento en la dieta ha mostrado alguna evidencia de accin antitumoral en ratas. Las bastaditas aisladas de esponjas marinas presentan accin antitumoral, contra el cncer de la piel y en leucoplasias orales (ORFANOS, 1981). - El vesanoido, es un derivado de la vitamina A que presenta accin citotxica, y es usado par el tratamiento de leucemia promieloctica aguda (ORFANOS, 1997).
2.1.7 Importancia Las vitaminas, son sustancias orgnicas, de naturaleza y composicin variada. Imprescindibles en los procesos metablicos que tienen lugar en la nutricin de los seres vivos. No aportan energa, ya que no se utilizan como combustible, pero sin ellas el organismo no es capaz de aprovechar los elementos constructivos y energticos suministrados por la alimentacin. Normalmente, se utilizan en el interior de las clulas como antecesoras de las coenzimas, a partir de las cuales se elaboran los miles de enzimas que regulan las reacciones qumicas de las que viven las clulas. Su efecto consiste en ayudar a convertir los alimentos en energa. La ingestin de cantidades extras de vitaminas, no eleva la capacidad fsica, salvo en el caso de existir un dficit vitamnico (debido, por ejemplo, a un rgimen de comidas desequilibrado y a la fatiga). Entonces, se puede mejorar dicha capacidad ingiriendo cantidades extras de vitaminas. Las necesidades vitamnicas varan segn las especies, con la edad y con la actividad. En cuanto a la vitamina A y al retinol, sus diversas funciones que desempean en el organismo es la siguiente: - Sistema seo: es necesaria para el crecimiento y desarrollo de huesos. - Desarrollo celular: esencial para el crecimiento, mantenimiento y reparacin de las clulas de las mucosas, epitelios, piel, visin, uas, cabello y esmalte de dientes. - Sistema inmune: contribuye en la prevencin de enfermedades infecciosas, especialmente del aparato respiratorio creando barreras protectoras contra diferentes microorganismos. Estimula las funciones inmunes, entre ellas la respuesta de los anticuerpos y la actividad de varias clulas, producidas por la medula sea, que interviene en la defensa del organismo como fagocitos y linfocitos. Por ello, promueve la reparacin de tejidos infectados y aumenta la resistencia a la infeccin. - Sistema reproductivo: contribuye en la funcin normal de reproduccin, contribuyendo a la produccin de esperma. Tambin, al ciclo normal reproductivo femenino. Debido a su rol vital en el desarrollo celular, la vitamina A, ayuda a que los cambios que se producen en las clulas y tejidos durante el desarrollo del feto, se desarrollen normalmente. - Visin: es fundamental para la visin. El Retinol contribuye a mejorar la visin nocturna, previniendo de ciertas alteraciones visuales como cataratas, glaucoma, perdida de visin, ceguera crepuscular ,tambin ayuda a combatir infecciones bacterianas como conjuntivitis. - Antioxidante: previene el envejecimiento celular y la aparicin de cncer, ya que al ser un antioxidante natural elimina los radicales libres y protege al ADN de su accin mutagnica
2.2 CPSULAS
Las cpsulas son masas slidas o semislidas de gelatina, principalmente y que se utilizan para administrar polvos, suspensiones o lquidos. El material de las cpsulas es de gelatina, glicerina y agua, sirven para enmascarar sabores, colores desagradables, presentan una ms rpida absorcin en el estmago.
Tambin, se puede obtener una desintegracin a diferentes intervalos de tiempo dependiendo de la preparacin de grnulos. De los riesgos en la preparacin de cpsulas son el evitar la humedad o el uso de materiales higroscpicos, (Figura 8). Es decir, que absorben agua, y las condiciones de almacenamiento que deben ser en lugares secos y frescos (MARTIN N. A, 1970).
Las cpsulas se clasifican de acuerdo a su tamao por nmeros:
Figura 8. Cpsulas de aguaje liofilizado
Atendiendo a su mayor produccin y mejor conocimiento se describe la disponibilidad por las cuales son conocidas y comercializadas:
Cpsulas grandes de 000 y 00 son conocidas como jumbo Cpsulas normal de 0, 1, 2 y 3 son conocidas como estndar Cpsulas pequeas de 4 y 5 son conocidas como chicas
Cpsulas duras Formadas por dos piezas cilndricas abiertas en uno de sus extremos y cuyo fondo es semiesfrico.
Tamao
Volumen (mL)
Masa (mg) 000 1,00 810 a 1620 00 0.95 570 a 1140 0 0,60 400 a 816 1 0,50 300 a 600 2 0,37 222 a 444 3 0,30 180 a 360 4 0,21 126 a 252 5 0.11 72 a 144
Cpsulas blandas
Sus paredes son ms gruesas y pueden estar plastificadas mediante un agregado de poli alcohol como sorbitol o glicerina. (www.wiquipedia.es). Ventajas:
Las cpsulas poseen ms ventajas si se comparan con las tabletas, ya que se desintegran ms rpidamente en presencia de los lquidos gstricos. Quiz la nica desventaja sea el que puede presentarse un tiempo de absorcin variable. Hoy en da una multitud de frmacos, como vitaminas, antibiticos, etc., se administran en forma de cpsulas (www.wiquipedia.es).
Usos:
Las cpsulas de gelatina, son conocidas universalmente por sus aplicaciones en la industria farmacutica. Lo que generalmente no se sabe, es que hay aplicaciones en un amplio espectro para cpsulas vacas de gelatina, en numerosos campos, bien fuera de la industria farmacutica. En verdad, hemos observado que hay una clara dicotoma de las aplicaciones, las cpsulas de gelatina ms pequeas han sido utilizadas en microscopa e histologa y los tamaos ms grandes "jumbo" son ms utilizados para empaque
Atendiendo a la envoltura se distinguen:
CPSULAS AMILCEAS CPSULAS DE GELATINA Siendo la ltima clasificada en:
\ Cpsulas blandas \ Cpsulas duras
2.2.1 CPSULAS AMILCEAS En su composicin entra el almidn, de varios tipos: maz, arroz, trigo y agua salada. Tambin reciben el nombre de sellos o discos. Tamao de las cpsulas amilceas que son utilizadas en la produccin de su comercializacin
000 00 0 1 2 3. No se debe utilizar el tamao grande porque debido a su tamao se produce dificultad para la deglucin, en la medida de lo posible conviene emplear el ms pequeo para facilitar la ingestin.
2.2.2 CAPSULAS GELATINOSAS
El componente fundamental es la gelatina, normalmente la gelatina se obtiene por hidrlisis de tejidos colagnicos de origen animal, de pieles o huesos. \ Cpsulas blandas: Las blandas, tienen plastificante en la formulacin de la cubierta. El plastificante, puede ser la gelatina o el sorbitol al 70%, son compuestas por gelatina, plastificante y agua; todo ello, en proporciones variables. Su concentracin depender de la consistencia de la masa: la presencia de agua quita consistencia a la masa, el plastificante le da elasticidad. La elasticidad de la cubierta permite que el volumen de la cubierta sea mayor o menor. \ Cpsulas duras: Las duras, no contienen plastificante, por lo cual, dentro su formulacin contienen gelatina y agua. Tamaos disponibles en su utilizacin
000 - 00 - 0 - 1 - 2 - 3 - 4 - 5. El tamao, estar condicionado por el volumen de polvo a distribuir y nmero de cpsulas a preparar, el volumen de polvo depender de la formulacin, principalmente del principio activo. 2.3 ESTABILIDAD Capacidad de un producto de mantener las especificaciones sealadas y aceptadas en la monografa de un principio activo o de un producto farmacutico, que aseguren sus propiedades fsicas, qumicas y microbiolgicas dentro de lmites especificados. Su estudio se basa en realizar una serie de pruebas relacionadas con las caractersticas fsicas, qumicas, biolgicas y microbiolgicas de un principio activo o un producto farmacutico para obtener informacin sobre su estabilidad, a fin de definir su perodo de eficacia en determinadas condiciones de envase y almacenamiento (ISPC, 1995).
MELENDEZ et. al, 2004; investigaron la estabilidad de los pigmentos carotenoides en los alimentos, el cual evaluaron los efectos que intervienen en la estabilidad de carotenoides como degradacin de un principio activo; debido a su estructura, cambios qumicos inducidos por las distintas condiciones de procesamiento o factores que intervienen en la degradacin del compuesto, los cuales conlleva una disminucin de su valor nutritivo, expresan lo siguiente:
\ Efecto de la oxidacin La degradacin de los carotenoides, se debe fundamentalmente a reacciones de oxidacin, ya sean no enzimticas o debidas a enzimas como las lipoxigenasas, y se presenta generalmente, durante el secado de frutas y vegetales. Los primeros datos que existen sobre oxidacin de carotenoides, son los de COLE Y KAPUR (1957), quienes conjugan las variables oxgeno y temperatura en la degradacin del licopeno. La interaccin de los carotenoides con algunos constituyentes de los alimentos, que ejerce un efecto protector contra dichas reacciones, de tal forma que se oxidan ms rpidamente cuando se extraen del fruto en estado puro o se purifican. Es decir, la intensidad de la oxidacin de los carotenoides depende de si el pigmento se encuentra in vivo o in vitro y de las condiciones ambientales. Tambin, el ozono, influye en la estabilidad de los carotenoides. En un interesante ensayo se comprob el efecto que una corriente continua de agua saturada de oxgeno y ozono a 30C, ejerca sobre una serie de carotenoides (todo trans |-caroteno, 9-cis-|-caroteno, |-criptoxantina y licopeno), adsorbidos en fase slida (C 18 ). Se comprob que aproximadamente el 90% de todo-trans- |- -caroteno, 9-cis- |-caroteno y |- criptoxantina, se perda despus de 7 horas de exposicin al ozono. Una prdida de licopeno cuantitativamente similar, se produca en slo 1 hora. Cuando los citados carotenoides fueron sometidos a la accin del oxgeno, todos, a excepcin de la | -criptoxantina, se degradaban a menor velocidad. En este estudio la mayor velocidad de degradacin corresponde al licopeno, y la menor al 9-cis-|-caroteno (licopeno>|-criptoxantina > todo-trans- |- caroteno > 9-cis- |-caroteno). En los ltimos aos, MELENDEZ, et. al., (2004), han realizado una serie de estudios que confirman que la encapsulacin de carotenoides los hace ms manejables y estables frente a la oxidacin.
\ Efecto de la composicin lipdica Los carotenoides, pueden sufrir oxidacin acoplada en presencia de lpidos a velocidades que dependen del sistema. El estudio de la velocidad de degradacin de carotenoides esterificados y no esterificados del pimiento rojo, indic que el que se degrada a menor velocidad, es capsorrubina, seguido de zeaxantina, capsantina y |-caroteno. Asimismo, se comprob que capsantina y capsorrubina y sus steres se degradaban a la misma velocidad, mientras que los steres de zeaxantina se degradaban ms rpido que el pigmento libre, presumiblemente debido a que dicho pigmento est esterificado principalmente por el cido graso poliinsaturado linolnico En otro interesante estudio, se evalu el comportamiento de clorofila o y |- caroteno durante tratamientos trmicos en sistemas modelo de lpidos, la tasa de degradacin de ambos pigmentos, fue mayor en metil estearato, seguida por metil oleato y metil linoleato, es decir, la reaccin entre el carotenoide y los radicales libres se minimiza en presencia de metil linoleato, posiblemente debido a la mayor reactividad de ste con el oxgeno. No obstante, en otra investigacin se lleg a la conclusin contraria, es decir, que el |-caroteno es ms inestable que el cido linolnico y, por tanto, puede proteger a ste durante tratamientos trmicos (RODRIGUEZ AMAYA, 1992)
\ Efecto de la estructura Las diferencias de estabilidad entre los distintos carotenoides estn influenciadas por su estructura individual. La reactividad de estos pigmentos en reacciones de captacin ("scavenging") de radicales, en general, disminuye al disminuir el nmero de dobles enlaces coplanares y debido a la presencia de grupos hidroxilos y carbonilos. La reactividad, por tanto, disminuye de los carotenos a los hidroxicarotenoides y de estos a los cetocarotenoides. La configuracin geomtrica de los carotenoides, implica tambin, diferencias en cuanto a estabilidad de los mismos. En un sistema modelo acuoso el todo-trans-|-caroteno, es ligeramente ms sensible al ozono que el 9-cis-|-caroteno. Sin embargo, en presencia de oxgeno, ste ltimo ismero, es bastante menos sensible a la oxidacin. Se ha sugerido que la mayor reactividad de la molcula cis, en relacin con los radicales libres es debida a una mayor interferencia estrica entre las dos partes al otro lado del doble enlace cis, aunque en la actualidad, no existe una explicacin aparente de estas discrepancias (RODRIGUEZ AMAYA, 1992)
\ Efecto de la temperatura La influencia de la temperatura, en la estabilidad de los pigmentos es clara; tanto para reacciones anhidras como hidratadas, siempre acta como acelerador de la reaccin de degradacin. Por lo general, los carotenos con mayor actividad biolgica, son aquellos que tienen todos sus dobles enlaces en forma del ismero trans, que se transforman parcialmente en la forma cis, durante tratamientos trmicos en ausencia de oxgeno. Esta reaccin de isomerizacin, se puede efectuar durante el proceso de esterilizacin de productos enlatados, con lo que se pierde parte del poder vitamnico de los carotenos. BAO Y CHANG (1994), revelan que la degradacin del |-caroteno y licopeno debida a diferentes condiciones de calentamiento, sigue una cintica de primer orden. Debido a su importancia nutricional como fuente de carotenos, muchos de los estudios de estabilidad de estos compuestos se han realizado en zanahorias y productos derivados. En algunos de estos estudios se ha evaluado el impacto del escaldado, empleado para inactivar la lipoxigenasa, en el contenido de los carotenoides. La influencia de este tratamiento en los niveles de o - y | -caroteno, en la pulpa y en el zumo de zanahorias ha sido objeto de estudio.
\ Efecto de la luz La accin intensa de la luz sobre los carotenos induce su ruptura con la consiguiente formacin de compuestos incoloros de bajo peso molecular. Estas reacciones tienen mucha importancia en la industria alimentara ya que los carotenos pierden, adems de su funcin biolgica de pro vitamina A, su color caracterstico. Para RODRIGUEZ - AMAYA (1997) que estudi la relacin existente entre la prdida de pigmentos, la exposicin a la luz y la presencia de cidos grasos, encontrndose que la instauracin de los cidos grasos protege en estas condiciones a los pigmentos. Existen estudios que demuestran que la degradacin del |-caroteno debida a la iluminacin con luz fluorescente sigue un modelo de primer orden, favoreciendo dicha iluminacin la formacin de 13,15-di-cis-|-caroteno. (BAO Y CHANG, 1994)
\ Efecto del pH Aunque los carotenoides extrados o no son relativamente resistente a valores de pH extremos, los cidos y lcalis pueden provocar isomerizaciones cis/trans de ciertos dobles enlaces, reagrupamientos y desesterificaciones, lo cual debe ser tenido en cuenta a la hora de manipularlos en laboratorio con fines analticos. No obstante, volviendo a la estabilidad de los carotenoides en los alimentos, hay que tener en cuenta que los epoxicarotenoides son muy inestables en medio cido, lo cual tiene una gran importancia, debido a la acidez inherente de algunos alimentos en particular. Por ejemplo este hecho es conocido tanto en la elaboracin de zumos como en vegetales fermentados, donde las condiciones cidas del proceso promueven algunas conversiones espontneas de los grupos 5,6 y 5,6- epxidos a 5,8 y 5,8-furanoides (Figura 9). En un reciente estudio se ha sugerido que el importante cambio en el perfil de carotenoides del mango como consecuencia del procesado, puede ser debido a estas reacciones. En este estudio se observ que mientras que en la fruta fresca el principal carotenoide era violaxantina, en el producto procesado como zumo dicho carotenoide no se detectaba, aunque s era apreciable la cantidad de auroxantina, no presente en la fruta fresca. Este hecho podra explicarse como consecuencia de la conversin de los grupos 5,6-epxido de la violaxantina en 5,8-furanoides de la auroxantina, posiblemente debido a la liberacin de cidos orgnicos del mango durante el procesado industrial.
Figura 9. Conversin de carotenoides 5,6 - epxidos en 5,8 - furanoides. Estas isomerizaciones tambin se han descrito en los procesos fermentativos que tienen lugar en el procesado de las aceitunas.
\ Efecto del almacenamiento Por otro lado, el efecto del almacenamiento sobre los carotenoides va a depender, indudablemente, de las condiciones en las que se lleve a cabo. Para RODRIGUEZ AMAYA (1997), en un interesante estudio ha evaluado los cambios que tienen lugar en o-caroteno, |-caroteno y lutena cuando se mantienen en la oscuridad a diferentes temperaturas (4C, 25C y 45C) y cuando se almacenan a 25C expuestos a la luz. Para ello utilizaron carotenoides en polvo liofilizados, obtenidos a partir de zanahorias. Los resultados revelaron que los niveles de la forma toda-trans de estos tres carotenoides disminuan al aumentar la temperatura de almacenamiento o el tiempo de iluminacin. Evaluaron la estabilidad de o - y | -caroteno en polvo de zanahoria encapsulado en diferentes tipos de almidn hidrolizado, comprobando que la degradacin de los carotenos estudiados, como consecuencia del almacenamiento a temperaturas comprendidas entre 37C y 65C, segua una cintica de primer orden. No todos los tipos de almidn hidrolizado empleados para encapsular el producto, fueron igual de eficientes, comprobndose que el de 36,5 equivalentes de dextrosa mejoraba la retencin de carotenos en comparacin con el resto (4, 15 y 25 equivalentes
de dextrosa). Los resultados del estudio muestran que la encapsulacin aumentaba la vida media del producto a 21C entre 70 y 220 veces, en funcin del tipo de almidn empleado. En cuanto al efecto de la luz, se observ que la retencin de los carotenos estudiados en las muestras expuestas a la luz y en la muestra mantenida en la oscuridad tras ocho semanas era prcticamente la misma, sugirindose que la degradacin de carotenos en polvo de zanahoria encapsulado se deba fundamentalmente a procesos de auto oxidacin (WAGNER Y WARTHESEN, 1995) Evaluaron la evolucin de clorofilas a y b, b -caroteno y lutena, en judas verdes frescas y escaldadas y en pimientos de Padrn almacenadas durante un ao a 22C. En las judas verdes, no escaldadas se comprob que los niveles de los pigmentos disminuan sensiblemente durante el primer mes de almacenamiento, estabilizndose despus, aunque en el caso del b -caroteno tambin hubo prdidas durante el segundo mes antes de la estabilizacin. En el caso de las judas escaldadas, los resultados fueron similares, si bien la retencin de carotenoides fue mayor debido a la inactivacin de la lipoxigenasa como consecuencia del escaldado. En cuanto a los pimientos de Padrn, los niveles de los pigmentos estudiados permanecieron ms o menos constantes a lo largo de todo el estudio. (ORUA-CONCHA et al, 1997). Estudiaron la cintica de degradacin de los carotenoides del azafrn, principalmente crocinas, encapsulados en tres matrices diferentes, pululan y dos polivinilpirrolodonas (PVP), PVP40 y PVP360, comprobando que la encapsulacin los protega de la oxidacin. Las crocinas, son carotenoides hidrosolubles, por lo que los ensayos se realizaron a diferentes actividades de agua y en la oscuridad a 35C. Los resultados del estudio indicaron que la encapsulacin con PVP40, era la que reduca en mayor medida la velocidad de oxidacin en todas las condiciones de almacenamiento ensayadas. (SELIM et al- 2000). Estudiaron la relacin existente entre la retencin de vitamina C y la estabilidad de los pigmentos presentes en el zumo de naranja, durante su almacenamiento por 7 semanas a 4,5C. Para ello, emplearon muestras de zumo de naranja de la variedad Moro, de color rojizo debido a la presencia de pigmentos antocianos (polifenoles) y carotenoides. Comprobaron que la degradacin de la vitamina C estaba correlacionada linealmente (r > 0.93), con la prdida de antocianos. En el caso de los carotenoides, se observ que las prdidas eran menos sensibles que en el caso de los antocianos, debido al efecto estabilizante de la vitamina C, que protege a los carotenoides de procesos oxidativos. (CHOI et al - 2002).
2.4 SECADO O DESHIDRATACIN Cuando se menciona acerca de secar una sustancia, se piensa invariablemente en la eliminacin de agua. Para realizar esta operacin, es imprescindible tener en cuenta en primer lugar, la naturaleza de las fuerzas que mantienen al agua unida a la sustancia de la cual se desea eliminar. As, puede hablarse de eliminar humedad, o agua de inclusin o de hidratacin y hasta de constitucin. Es obvio, que cuanto ms fuertemente se encuentre asociada el agua, ms enrgicas debern ser las condiciones para eliminarla (MELO, 2005) En la deshidratacin por liofilizacin, se someten alimentos congelados a la accin del vaco en una cmara especial hasta lograr la sublimacin de la mayor parte de su contenido en agua. La eliminacin del agua, ofrece una excelente proteccin frente a las causas ms comunes de deterioro de los alimentos. Los microorganismos no pueden desarrollarse en un medio carente de agua, la actividad enzimtica es casi inexistente y la mayora de las reacciones qumicas se retardan de forma importante. Esta ltima caracterstica hace que la deshidratacin se prefiera al envasado, si el producto ha de almacenarse a temperaturas elevadas. Para obtener esta proteccin, es necesario eliminar la mayor parte del agua. A continuacin hay que empaquetar el alimento en recipientes a prueba de humedad para impedir que absorban agua del aire. Por ello, se utilizan a menudo latas hermticas para el envasado de productos deshidratados. Estas latas, ofrecen la ventaja adicional de ser inmunes a agentes destructores externos, como el oxgeno, la luz, los insectos y los roedores (GEANKOPLIS 1998).
2.5 LIOFILIZACIN Como todos sabemos, segn la temperatura, una sustancia cualquiera tiene tres estados: slido, lquido y gaseoso. Si queremos convertir el agua en gaseosa (vapor), la tenemos que hervir o por lo menos dejarla reposar largo tiempo para que <<se seque>>, espontneamente. Si queremos que un pedazo de hielo se derrita, le aplicamos el calor ambiental o lo calentamos para acelerar su licuacin. La liofilizacin, consiste en sacarle el agua a una sustancia congelada, saltndonos el pasaje por el estado lquido: se congela una solucin acuosa de la sustancia qumica que deseamos liofilizar y, a esa baja temperatura, que impide cambios qumicos de deterioro, se le somete a un alto vaco, que hace pasar el agua del estado slido al estado gaseoso, sin pasar por el estado lquido. Es una forma de secar un producto qumico a temperaturas bajsimas, sin el deterioro que producira el recalentamiento. El secado con congelacin, o liofilizacin, es la sublimacin de agua a partir de hielo operando a vaco elevado y a temperaturas inferiores a 0. Esto se realiza en secadores especiales de bandejas, para secar vitaminas y otros materiales sensibles al calor. Se usa generalmente, en la preparacin comercial de antibiticos, de algunas vacunas y de muchos productos vegetales alimenticios y saborizantes. Es un proceso de congelacin - desecacin (freeze-drying) (GEANKOPLIS, 1998).
2.5.1 Operaciones unitarias en la liofilizacin \ Operacin Unitaria Una operacin unitaria, es cada una de las acciones necesarias de transporte, adecuacin y/o transformacin implicadas en un proceso qumico (Figura 10). Las operaciones unitarias poseen tcnicas comunes y se basan en los mismos principios cientficos. (GEANKOPLIS, 1982)
\ Proceso Qumico Un proceso qumico, es un conjunto de operaciones qumicas y fsicas ordenadas para la transformacin de materias iniciales, en productos finales diferentes. \ Procesos / Operaciones En cada proceso / operacin unitaria, se cambian las condiciones de una determinada cantidad de materia, de una o ms de las siguientes formas: - Modificando su masa o composicin - Modificando el nivel o calidad de la energa que posee - Modificando sus condiciones de movimiento
Figura 10. Procesos / operaciones que se da en la liofilizacin MELO (2005); cada operacin unitaria tiene una fuerza impulsora, un gradiente en alguna propiedad, que da cuenta del mecanismo principal de transferencia.
2.5.2 Ciclo de liofilizacin La liofilizacin, es una operacin esencialmente cclica, que se desarrolla siguiendo una serie de etapas. Es importante la seleccin y preparacin del alimento antes de su secado por congelacin, slo pueden utilizarse materias primas de calidad. Tambin es importante el almacenamiento del producto liofilizado, antes de su rehidratacin y uso. En la (figura 11), aparecen las diferentes etapas del proceso, desde la preparacin inicial del producto hasta su reconstitucin y uso. En las etapas especficas del proceso de liofilizacin, se indica la variacin de la temperatura durante el ciclo tpico.
PROCESO Servicios Auxiliares Productos Materias Primas Energa Alta Calidad Energa Residual 2.5.3 Congelacin del producto Con el fin de conseguir una estructura porosa en los alimentos secados por liofilizacin, se deben formar antes del secado muchos cristales pequeos. En una situacin ideal, el producto debe ser congelado hasta la condicin de concentracin (congelacin mxima). En este punto, se ha formado la mayor fase de volumen de hielo y el material que permanece sin congelar, tiene el contenido de agua ms bajo posible. En este caso, se puede eliminar por sublimacin la mayor cantidad de agua.
Figura 11: ciclo que presenta un producto en la liofilizacin 2.5.4 Transferencia de masa y de calor en la liofilizacin En ingeniera la liofilizacin es muy utilizada (ANCASI et. al., 2005) por sus favorables ventajas que presenta en cuanto a su utilizacin como producto final, es por ello, que dentro del proceso se observa el mtodo de desecacin que se produce, mientras se elimina el agua por congelacin del producto hmedo (Figura 12); la transferencia que existe al suministrar calor el hielo Producto Fresco
Acondicionamiento
Envasado Secado Primario Congelacin Secado Secundario Temperatura C Calefactor Producto 140
100
40
20 0 -20 -40 sublima y se evita el paso por la fase lquida. Dentro del mismo, se detalla los pasos que se ejecutan: \ Transferencia de calor por convencin El proceso ms comn de liofilizacin, se basa en que los gases que rodean al material suministran a la superficie del slido, el calor de sublimacin necesario. Despus, el calor se transfiere por conduccin a la superficie congelada. El flujo especfico de calor a la superficie del material, se verifica por conveccin, y una vez en el slido seco, por conduccin hasta la superficie de sublimacin. El flujo de calor a la superficie es igual al que pasa por el slido seco, suponiendo un estado seudo estacionario. \ Transferencia de calor por conduccin La transferencia de calor por conduccin en la liofilizacin, se basa en la ley de Fourier, que nos menciona que la transferencia de calor por conduccin, est en relacin directa al rea de transferencia y a la diferencia de temperaturas del medio y del alimento (para este caso); y en relacin indirecta a la distancia que recorrer el calor en el alimento. \ Transferencia de masa La transferencia de masa, se produce desde el frente de sublimacin, a travs del producto seco, hacia la superficie donde el vapor es eliminado por el vaco. La estructura del producto seco determina, en gran medida, la cantidad de humedad transferida durante la liofilizacin.
Figura 12: Balance de masa y de calor que se ejecuta en liofilizacin
2.6 ISOTERMAS DE ADSORCIN Una isoterma, es simplemente una curva que relaciona el contenido de humedad de equilibrio de un producto, con la humedad relativa del aire o actividad de agua del producto. La humedad de equilibrio, se define como el contenido de humedad de un material higroscpico, despus de estar expuesto a un ambiente en condiciones controladas de temperatura y humedad relativa, durante un lapso prolongado. Se puede decir, adems, que el material est en equilibrio higroscpico con el ambiente en que se encuentra, cuando la presin de vapor de agua correspondiente a la humedad del material es igual a la presin de vapor de agua del aire ambiente. Para cada especie o variedad de material, la tensin de vapor tiene un valor caracterstico acorde con la temperatura y el contenido de humedad del material (LABUZA et. al, 1985). Los valores del contenido de humedad de equilibrio de los productos biolgicos, dependen principalmente, de la temperatura y de la humedad relativa del aire, de = + Es el que recibe el producto desde los estantes Son las caloras gastadas en sublimar el hielo Es el que se utiliza en calentar el producto la especie o variedad del producto. La madurez fisiolgica y la historia del producto, junto con la manera en que se obtuvo el equilibrio (adsorcin o desorcin), tambin influyen en la humedad de equilibrio. El contenido de humedad de equilibrio de un material higroscpico, en determinadas condiciones de temperatura y humedad relativa de equilibrio, depende del camino que se siga para alcanzar el equilibrio. As, para una misma humedad relativa, puede haber dos isotermas, denominadas isotermas de adsorcin y de desorcin, obtenidas en funcin de las condiciones experimentales iniciales. Esto, porque el material puede presentar un contenido de humedad menor o mayor que la humedad de equilibrio para las condiciones del ambiente. Este fenmeno se llama histresis. (BELITZ, 1982) Termodinmica de la adsorcin: En termodinmica el uso de las isotermas se expresan como molculas en fase gaseosa que tienen mayor entropa que adsorbidas en la superficie de un slido (CHIRALT, 2007). 2.6.1 Descripcin de isotermas de adsorcin en fisicoqumica
El grado de adsorcin se mide en funcin de la cobertura fraccional, : = u Tambin se lo define como: = u V V = . sup l a toda cubri r a i ente correspond gas de Vol umen adsorbi do gas de vol umen
Suponga que: 1) La adsorcin no ocurre ms all de la primera capa de cobertura 2) Todos los sitios de adsorcin son equivalentes y la superficie uniforme posibles adsorcin de sitios de n ocupados adsorcin de sitios de n 3) La capacidad de una molcula de adsorberse es independiente de las otras molculas adsorbidas. 2.6.2 Modelos de equilibrio higroscpico La ecuacin de Kelvin, se aplica solamente a las humedades relativas superiores a 95% y la ecuacin de Langmuir, no se aplica a productos alimenticios. La ecuacin de BET y la versin que presenta Rounsley permiten estimar la parte de agua adsorbida en relacin con el total de agua ligada. Las ecuaciones de BET, Harkins-Jura y Rounsley, ofrecen resultados aceptables solamente para valores de humedad relativa inferiores a 30% La ecuacin de Henderson y la de Chung-Pfost son las que mejor expresan el contenido de humedad de equilibrio en gamas ms amplias de temperatura y humedad relativa. Las modificaciones empricas mejoraron sustancialmente dichas ecuaciones y las hicieron aplicables a una mayor parte del abanico de temperaturas y humedades relativas. (BOQUET et. al, 1978). Brunauer - Emmet y Teller (BET). Su ecuacin describe muy satisfactoriamente los distintos tipos de isotermas encontradas experimentalmente.
Donde:
a = Humedad relativa de cada desecador
M = Contenido en agua del producto (g/100 g materia seca)
M 1 = Contenido en agua correspondiente a la capa monomolcular (g/100g de materia seca)
C = Constante energtica, relacionada al calor de adsorcin de la primera capa de agua.
Con la ayuda de ecuacin se pueden calcular M 1 y C segn M y a determinados experimentalmente; para ello se lleva ) 1 ( a M a
a ordenadas y a C M C a C M a M a 1 1 ) 1 ( 1 ) 1 (
+ =
a abscisas; se obtiene as una recta, que en la interseccin con el eje de
ordenadas y la pendiente da, respectivamente, los valores de C M 1 1 y de C M C 1 1
Fig .13. Esquema comparativo de las isotermas de sorcin (ZUG,2002)
2.6.3 Actividad de agua La actividad del agua (aw), es considerada la propiedad ms importante del agua en un sistema alimenticio. A travs de la historia, el hombre se ha reconocido la importancia de controlar el agua en los alimentos, para lo cual ha utilizado el secado, el congelado o la adicin de sales y azcares con fines de preservacin y control de la calidad de los mismos. Existen dos tipos bsicos de anlisis de agua. El primero es el contenido de agua, el cual es una determinacin cuantitativa o volumtrica de la cantidad total de agua presente en un alimento. El segundo tipo mide la actividad del agua e indica la fuerza con la que el agua est atada, estructural o qumicamente, a un alimento (FENNEMA, 1990) La actividad del agua, es un concepto termodinmico refirindose a una condicin de equilibrio, describe la situacin de energa del agua o el grado en que est atada, en un producto alimenticio y, por lo tanto, su habilidad de actuar como solvente y participar en reacciones qumicas y bioqumicas y en el crecimiento microbiano. Cuando se deshidrata un alimento, por ejemplo, no slo disminuye su contenido de agua sino que disminuye la disponibilidad de esta agua. En este caso, disponibilidad se refiere a que, aunque un alimento posea una cantidad de agua, esta puede no estar disponible para reacciones bioqumicas o microbiolgicas. Una forma de expresar esta disponibilidad, es mediante el trmino actividad de agua. Por analoga, as como, el pH es un trmino que indica el grado de acidez de un alimento, la actividad de agua a w , es un trmino que se emplea para indicar la disponibilidad del agua (ROCKLAND et. al, 1981). La actividad del agua se representa como la relacin entre la presin de vapor del aire alrededor de un alimento (p) y la presin de vapor del agua pura (p 0 ), ambos permaneciendo a una misma temperatura. De manera prctica, esto es la humedad relativa del aire en equilibrio con una muestra contenida en una cmara sellada de medicin. Multiplicando la a w por 100, se obtiene la humedad relativa de equilibrio (ERH), de la atmsfera en equilibrio con el alimento. Estas ecuaciones se representan as: a w = p/po = %ERH/100 Con un mximo valor de 1,0 Cuando se disuelven otras sustancias en agua pura, el valor de la aw disminuye; lo mismo sucede cuando a un alimento se le retira parte del agua. Si esta disminucin, es en un porcentaje elevado, el alimento adquiere un valor de a w relativamente bajo y se le podr denominar alimento de humedad intermedia. Aunque el concepto de actividad del agua, slo se aplica a sistemas en equilibrio, y la mayora de productos alimenticios no son sistemas en equilibrio, su aplicacin en el marco de tiempo experimental y de estimacin de vida de anaquel es una herramienta til. 2.6.4 Formas de manejar la a w
Debido a que hongos, levaduras y bacterias, requieren cierta cantidad de agua disponible para crecer, al igual que muchas reacciones qumicas y bioqumicas para ocurrir, su desarrollo puede limitarse con la reduccin de esta agua. Una forma de lograr este objetivo es a travs de los procesos trmicos severos, los cuales usan adems las propiedades letales del calor, mientras que procesos como la deshidratacin o la liofilizacin, trabajan slo por disminucin de la a w . Otro mtodo, involucra la atadura del agua libre por la adicin de solutos, usualmente azcares o cloruro de sodio. Esto crea un desbalance en la presin osmtica, con lo cual se extrae agua de las clulas y tejidos. El desarrollo de productos encuentra nuevos retos para mantener niveles suficientemente bajos de aw con el uso de los sustitutos de grasa disponibles hoy en da. La grasa, la cual no contribuye agua libre, es reemplazada con agua o un gel para proveer lubricacin. Estos geles, no reducen la aw, por lo que se requieren mtodos adicionales de control para revenir el deterioro. Cuando una sustancia es agregada a un producto para reducir la aw, el resultado puede ser complicado. Idealmente, la sustancia debe reducir la aw, sin ningn otro efecto, como el incremento en la fuerza inica y/o la disminucin de la tensin superficial, por lo que la adecuada seleccin de dicha sustancia es muy importante. (BADUI, 1981) Por qu es importante? Para muchos productos alimenticios, la actividad del agua es una propiedad muy importante. Predice la estabilidad de los alimentos con respecto a sus propiedades fsicas, la velocidad de las reacciones de deterioro y el crecimiento microbiano, influenciando la vida de anaquel, el color, olor, sabor y consistencia de los mismos Con la determinacin de la actividad del agua de los alimentos, es posible predecir qu microorganismos pueden causar deterioro y enfermedades, por lo que se considera una importante propiedad desde el punto de vista de inocuidad alimentara. El control de la aw, es tambin una forma importante de mantener la estabilidad qumica de los alimentos; ejerce un fuerte efecto sobre las reacciones de pardeamiento no enzimtico y las de oxidacin lpida autocataltica. La actividad del agua, puede adems, jugar un papel clave en la actividad enzimtica y vitamnica en los alimentos, as como en propiedades fsicas como textura y vida en estante de los mismos. Su utilidad e importancia como medida de la calidad y la inocuidad de los alimentos, fue reconocida cuando result obvio que el contenido de humedad no reflejaba exactamente las fluctuaciones en el crecimiento microbiano. El concepto de aw, ha servido al microbilogo y al tecnlogo en alimentos durante dos dcadas, como el criterio de calidad e inocuidad ms exacto y utilizado. Recientemente la aw, como parmetro fisicoqumico, ha sido discutido principalmente slo en dos disciplinas: la fisicoqumica y la microbiologa de alimentos. En la primera, mide la energa libre termodinmica del agua, mientras que en la segunda, la actividad del agua es utilizada para definir los lmites inferiores para el crecimiento de microorganismos en alimentos. 2.6.5 Medicin de la Actividad del Agua No existe instrumento alguno en el que pueda colocarse directamente un producto para medir su actividad de agua. Sin embargo, la actividad de agua de un producto puede determinarse a partir de la humedad relativa del aire alrededor de la muestra cuando el aire y la muestra alcanzan el equilibrio. Por lo tanto, la muestra debe colocarse en un espacio cerrado, en donde dicho equilibrio ocurrir. Cuando esto ocurre, la actividad del agua de la muestra y la humedad relativa del aire son iguales; la medicin realizada en el equilibrio se llama humedad relativa en equilibrio, o ERH. Aunque existen mtodos a nivel de laboratorio para determinar la actividad del agua, comercialmente existen principalmente dos tipos de instrumentos para tal propsito. Uno, utiliza la tecnologa de espejo enfriado en punto de roco, mientras que el otro mide la humedad relativa con sensores que cambian la resistencia elctrica o capacitancia. Ambos mtodos poseen ventajas y desventajas, varan en exactitud, reproducibilidad, velocidad en la medicin, estabilidad en la calibracin, linealidad, costo y conveniencia de uso. 2.6.6 Relacin entre la Actividad de Agua y la Humedad relativa en equilibrio (HRE) La HRE, se refiere estrictamente a la atmsfera en equilibrio con una solucin o alimento y constituye una expresin menos apropiada que la aw, como forma de medir el agua disponible. La HRE, como la aw, es la relacin entre la presin de vapor de la solucin y la del agua pura pero expresadas en porcentaje.
2.6.7 Relacin entre la Actividad de Agua y el contenido de agua La relacin entre la composicin de un alimento y su aw, es bastante compleja. Para conocer esta relacin lo habitual es determinar los valores de la aw del alimento a diferentes concentraciones de agua, los que se representan grficamente con el fin de obtener la isoterma de sorcin de agua. Los factores que reducen la presin de vapor de agua en los alimentos y, por tanto, la a w son la adsorcin de las molculas de agua a las superficies, las fuerzas capilares y las sustancias disueltas que se han mencionado anteriormente. Normalmente, se acepta que el primer ascenso de la isoterma representa la adsorcin del agua formando una monocapa de molculas en los lugares de adsorcin del producto slido. Al aadir ms agua, la isoterma crece rpidamente a medida que los solutos se disuelven y se llenan los espacios capilares. Estos fenmenos se solapan, y algunos pueden no estar representados en la isoterma. Puede no verse la monocapa en los alimentos que contienen poco material estructural, si las fuerzas capilares tienen poca influencia. (Figura 13).
Figura 13. Isotermas de desorcin de agua en la que se muestra la histresis. Curva A: adsorcin; Curva B: desorcin.
2.6.8 Relacin entre la Actividad de Agua y la Temperatura La actividad de agua, depende de la temperatura dado, que sta influye tambin sobre la presin de vapor de agua de las soluciones pero el efecto es pequeo con la mayora de los solutos, salvo que las soluciones sean saturadas. En tales casos, las cantidades de algunas sustancias de la solucin, y por tanto la aw, pueden variar marcadamente con la temperatura. A temperaturas inferiores a las del punto de congelacin, de una solucin o alimento, la presin de vapor del agua lquida disminuye al descender la temperatura. La aw, de una solucin o alimento congelados es funcin de la temperatura presentando un valor de 0,953 a -5 C; de 0,907 a -10 C; de 0,864 a -15 C y de 0,823 a -20 C. (SCOTT, 1962) ha estudiado los lmites del crecimiento microbiano en un medio congelado en relacin con la temperatura y la a w .
2.7 ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Los antioxidantes, son sustancias que detienen o previenen una cadena de propagacin oxidativa, mediante la estabilizacin del radical generado (radical libre). Nuestro organismo posee antioxidantes enzimticos y no enzimticos, para protegerse de estos radicales, sin embargo, otra fuente muy importante de ellos son las plantas, y precisamente el estudio de estos compuestos es prioritario por su rol en la proteccin del cuerpo humano, en contra de un nmero considerable de enfermedades degenerativas, las evidencias experimentales sugieren que protegen de manera importante las funciones biolgicas de las clulas en contra de la actividad de los radicales libres (CANTU, 2001). 2.7.1 Antioxidantes Cada clula de nuestro organismo, posee naturalmente, los mecanismos necesarios para compensar la accin de los radicales libres. Pero, con la edad o bajo condiciones de stress, estos protectores celulares naturales (antioxidantes), disminuyen en su concentracin celular. Pueden los antioxidantes contribuir a reducir el riesgo de las afecciones ligadas al envejecimiento? A partir de los 50 aos, comenzamos a preocuparnos por nuestro envejecimiento y por las patologas, que pueden asociarse con este proceso. Una dieta balanceada ha sido siempre la llave para una buena salud. Actualmente, estudios cientficos estn apuntando cada vez ms a los potenciales beneficios para la salud, de algunos nutrientes especficos. Existen investigaciones muy promisorias sobre el rol que ejercen determinados nutrientes en disminuir los riesgos de desarrollar enfermedades asociadas al envejecimiento (BLOMHOFF, 1994) En los ltimos aos, instituciones cientficas, como el Research Center of Aging de USA, han conducido investigaciones sobre la Vitamina C, E y A entre otros nutrientes asociados entre s en dosis teraputicas. Las evidencias demuestran, que asegurando una correcta ingesta de Vitamina C, E y Betacarotenos en la dieta, se reducen los riesgos de desarrollar ciertas enfermedades como cataratas, cncer y afecciones cardio-vasculares. Desde ya, un estado de buena salud, adems de la correcta nutricin, depende de otros factores, muchos de los cuales pueden ser manejados como: el hbito de fumar, el control del stress, la prctica metdica de ejercicios y el control mdico peridico. Hay buenas razones para disminuir los riesgos de enfermedades crnicas, utilizar alimentos ricos en Vitamina C, E y Betacarotenos, puede ser un recurso. 2.7.2 Las vitaminas y los antioxidantes esenciales El envejecimiento celular, no es slo gentico, influyen en ese proceso cantidad de factores ambientales a los que se los denomina "calidad de vida". Por otro lado, la adecuada y correcta alimentacin, mas la exposicin a sustancias qumicas del medio ambiente son tambin determinantes para dicho proceso. En lneas generales, se sabe que la restriccin alimentara (comer poco pero balanceado) prolonga la vida, mientras que las dietas hipercalricas la acortan. El tema alimentario, es un factor muy importante para prevenir el envejecimiento, ya que a travs de lo que comemos aportamos naturalmente los antioxidantes. Pero, aquellas personas que carecen del tiempo necesario para incorporar diariamente las dosis adecuadas de vitaminas, a travs de los alimentos, debern optar por las ofertas que ofrecen los laboratorios y que sustituyen esas necesidades bsicas. Hoy es posible discriminar, cul es la funcin que cada una de las vitaminas cumple en nuestro organismo; a saber: - La vitamina E: Retrasa el envejecimiento celular, ocasionado por la oxidacin, es decir, que defiende a las clulas de la accin de los radicales libres oxidantes y previene enfermedades crnicas. - La vitamina C: retrasa trastornos del envejecimiento y acta sobre el sistema inmunitario. - Beta carotenos: Acta combinado con las vitaminas C y E, para mantener el nivel de actividad de las clulas y cumple una funcin depurativa de los oxidantes en las clulas. - Selenio: Tiene efectos anticancergenos, protege el corazn y elimina algunos tipos de virus. - Zinc: Refuerza el sistema inmunitario y lucha contra el envejecimiento en todas sus formas. - Magnesio: Ayuda a prevenir los trastornos cardacos. Se deberan incluir diariamente todas estas vitaminas, para que los llamados radicales libres, se mantengan controlados en el organismo y no produzcan envejecimiento prematuro, alteraciones celulares (cncer), problemas cardiovasculares, neurolgicos u oculares. Muchos de estos productos suplementarios, bajo la apropiada prescripcin y supervisin mdica, pueden ingerirse en forma de cpsulas o tabletas.
CAPTULO III
MATERIALES Y MTODOS
3.1 LOCALIZACIN DE LA MATERIA PRIMA Las muestras de frutos de aguaje, fueron recolectadas en las comunidades de Aucayo, Libertad y Centro Unin, ubicadas en la cuenca baja del ro Amazonas, Distrito de Fernando Lores, Provincia de Maynas, en la regin Loreto. Se recolectaron manualmente, en estado pintn, evidenciado por el color, firmeza al tacto del fruto, y ausencia de daos, despus de recolectadas los frutos se separan del racimo (Figura 14). Se lavaron con abundante agua limpia, para remover los residuos y la tierra que recogen durante la cosecha.
Figura 14. Racimo de aguaje despus de la recoleccin
3.2 PREPARACIN DEL MATERIAL Despus del proceso de adecuacin, se procede al tratamiento de maduracin el cual consiste, en sumergir los frutos completamente en agua limpia a una temperatura de 60 C, durante un lapso de 4 a 6 horas, aproximadamente (Figura 15). Este tratamiento, es eficiente, ya que en los frutos, que se van ablandando, se separan con facilidad los componentes (pulpa-corteza del endospermo y la semilla).
Figura 15. Tratamiento de maduracin de frutos de aguaje El despulpado de los frutos, se realiza en forma manual, obtenindose finalmente la separacin entre masa pulpa corteza y los residuos que constituyen el endodermo y la semilla. En este proceso, el rendimiento en 10 frutos grandes y pequeos es de 54,98 g y 24,18 g de masa pulpa-corteza respectivamente. 3.3 MATERIALES DE LABORATORIO - Desecadores - Pinzas metlicas - Placas de Petri grandes y pequeas - Baln de 250 mL base redonda - Matraces de diferentes medidas - Papel de filtro - Cpsula de porcelana con tapa (crisol) - Vaso de precipitado de 50,100 mL - Peras de separacin - Fiolas 02 de 100 mL 01 de 10 mL - Filtros PURADIS 25 AS de 0.45 m (Whatman) - Papel aluminio - Parafilm - Marcadores - Bolsas plsticas - Cuchillos - Pinza de metal - Guantes descartables - Probetas
3.4 EQUIPOS, INSTRUMENTOS Y OTROS Balanza analtica, mufla (550C), equipo de extraccin Soxhlet, estufa, digestor Kjeldahl, cocina elctrica, destilador simple, termmetros de mercurio (0C a 100C), equipo de absorcin atmica, espectrofotmetro UV/vis. 3.5 REACTIVOS Y DISOLVENTES Agua destilada, Hexano, Butanol, Etanol de 96%, cloruro de litio, acetato de potasio, Cloruro de sodio, Nitrito de sodio, Hidrxido de sodio, sulfato de potasio, cloruro de magnesio, cido clorhdrico 6N, 3N y 0.3N, Cloruro de lantano al 10%, 1,1-difenil-2-picrihidrazil (DPPH). 3.6 METODOLOGA 3.6.1 Determinacin de peso del fruto por liofilizacin El aguaje, despus de haber sido despulpado, fue sometido al mtodo de desecacin-congelacin, donde las muestras tratadas, fueron previamente congeladas a temperatura bajo cero, antes de ser sometidas al proceso, cada una fue previamente pesada, ocurriendo el proceso de deshidratacin en un equipo LABCONCO de 4,5 L, trabajando al vaco a una temperatura de -50 C. 3.6.2 Determinacin de humedad de equilibrio experimental Existe dos mtodos para la obtencin experimental de contenidos de humedad de equilibrio: el esttico y el dinmico. En el mtodo esttico, las muestras se colocan en recipientes con humedad relativa y temperatura controladas, hasta que alcancen el equilibrio higroscpico, sin que haya movimiento de aire. Las isotermas, se obtienen colocando un alimento cuyo contenido en agua se conoce, bajo vaco, en un recipiente cerrado y midiendo, despus del establecimiento del equilibrio a una temperatura determinada, la presin de vapor del agua, con la ayuda de un manmetro o de un higrmetro (o incluso por cromatografa en fase gaseosa). Tambin, se puede obtener colocando muestras de un mismo alimento (seco o hmedo) en una serie de recipientes cerrados, en los cuales se mantienen por ejemplo, mediante soluciones salinas (por lo general saturadas) o cido sulfrico de diversas concentraciones a una gama de humedades relativas constante (CHEFTEl, 2000). De acuerdo a la Official Methods of Analysis (A.O.A.C N 934.06). Las muestras de aguaje liofilizado, se colocaron en los desecadores con las diferentes soluciones saturadas, se dejaron en un rea del laboratorio, dentro de los desecadores hasta alcanzar el equilibrio. Despus, de retirar las muestras se llevaron a pesar a una balanza digital marca Sartorius con capacidad de 220 gramos para realizar los clculos pertinentes y as obtener la humedad en equilibrio, de manera que se puedan construir las isotermas de adsorcin lo cual se verific cuando el peso de las muestras se hizo constante. Se realizaron tres repeticiones de cada punto de las curvas, Las muestras liofilizadas en equilibrio, se llevaron a una estufa marca Autonics, modelo T24ST, para determinar su humedad. (Figura 16).
Figura 16. Desecadoras preparadas para el control del medio de humedades relativas constantes con soluciones salinas saturadas.
3.6.3 Determinacin de su composicin qumica Anlisis bromatolgico \ Humedad, Las muestras se coloca en estufa de aire circulante por 8 h. a 105C, hasta peso constante. \ Grasas, Las muestras se obtuvieron por extraccin con el aparato de Soxhlet , usando hexano. (ADOLFO LUTZ ,1985) \ Protenas, Las muestras desengrasadas se sometieron a la destilacin de nitrgeno mediante la utilizacin del aparato de Kjendahl, (ADOLFO LUTZ ,1985). \ Cenizas, Las muestras se incineraron en mufla a la temperatura de 550C (ADOLFO LUTZ ,1985). 3.6.4 Anlisis de estabilidad Para la USP23/NF18 Pharmacopeia (1995); realizar el anlisis de estabilidad, es determinar el uso, tiempo de vida til, propiedades y caractersticas que posee un producto al momento de su fabricacin. Para todo el proceso de investigacin y desarrollo, los productos farmacuticos, son una parte fundamental de que debe hacerse previamente, que ser puesta a disposicin de la poblacin, con el fin de determinar el tiempo durante el cual mantiene sus especificaciones de calidad, determinando la estabilidad del producto que dependen principalmente de factores ambientales, tales como Temperatura y Humedad, que juegan un papel muy importante en los resultados que se obtienen sobre las propiedades tanto fisicoqumicas y biolgicas; siendo muy importante tomar en cuenta la forma farmacutica y los envases primario-secundarios. Para ello, se muestran cinco criterios de estabilidad en la siguiente tabla. Criterio para los niveles aceptables de estabilidad
Tipo de estabilidad
Condiciones que mantuvieron fija la vida til del producto.
Qumica
Cada ingrediente activo retiene su integridad qumica y la potencia etiquetada, dentro de los lmites especificados,
Fsica
Las propiedades fsicas originales, que se presenta apariencia, uniformidad, disolucin, que se retienen en la solucin y en el paladar, susceptibilidad.
Microbiolgica
Se retienen esterilidad o resistencia a crecimiento microbiano segn los requisitos especificados. Agentes antimicrobianos que estn presentes y retienen efectividad dentro de los lmites especificados
Teraputica
El efecto teraputico permanece inalterado
Toxicolgica
No ocurre ningn aumento significante en toxicidad
En el desarrollo del anlisis slo se ejecut las pruebas fsicas, qumicas y microbiolgicas. 3.6.5 Anlisis de pro vitamina A y retinol Por el Mtodo espectrofotomtrico se determin las lecturas de - carotenos y retinol siendo la preparacin de la solucin 35 mL de alcohol n-butlico y 15 mL de agua destilada siendo mezcladas para obtener una solucin saturada de Alcohol n-butlico. El procedimiento consisti en pesar 1 g de muestra en un matraz de vidrio de 300 mL y aadir 50 mL de alcohol n-butlico saturado se agit durante 2minutos y se dej en reposo por espacio de 20 minutos. A la solucin en reposo, se filtr a travs de un papel filtro y se procedi a colocar en una cubeta de 1cm 3 con el extracto de la muestra y la otra con el solvente. Lase la absorbancia a 450 nm, efecte tres lecturas. Para la determinacin del Retinol, se procede igual que para la determinacin del -caroteno, con la nica diferencia de que las lecturas de la absorbancia tienen que ser a una longitud de onda de 470 nm. (HIGBY, 1962) Para diferenciar la obtencin de las siguientes muestras se describen las frmulas de la pro vitamina A y del retinol que se muestran en las (Figuras 17 y 18) Figura 17. Pro vitamina A ( caroteno) OH CH 3 CH 3 C H 3 CH 3 CH 3
Figura 18. Vitamina A (Retinol). Clculos - carotenos mg/100 g de muestra = (A-B)*1,57/w RETINOL mg/100g de muestra = (A-B)*10,90/w Donde: A = Lectura de la absorbancia de la muestra B = Lectura de la absorbancia del solvente W = Peso tomado de la muestra 3.6.6 Micronutrientes minerales Se utiliz el mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica, utilizando un equipo marca Varian AA 240, del Laboratorio de Biotecnologa del Instituto de Investigaciones de la Amazonia Peruana, para determinar: calcio, cobre, hierro, magnesio, manganeso, potasio, sodio y zinc en los productos alimenticios. El procedimiento consisti en las cenizas obtenidas por incineracin seca: \ A las cenizas se agrega de 5 -10 mL de cido clorhdrico 6 N, hasta mojarlas totalmente y a continuacin desecar cuidadamente sobre placa caliente a temperatura moderada, luego, se le aadi 15 mL de cido clorhdrico 3 N y se calienta en el crisol, hasta que la solucin comience a hervir, se dejo enfriar y se filtro a travs de papel filtro, hacia un matraz volumtrico, al crisol se lavo tres veces con agua y se filtro, los lavados hacia el matraz. \ Si se va a determinar calcio aadir 5 mL de solucin de cloruro de lantano, por 100 mL de solucin, se enfra y se diluye el contenido del matraz hasta la seal de enrase con agua.(OSBORNE & VOOGT, 1978)
3.6.7 Actividad antioxidante Los extractos fueron obtenidos por maceracin de los tejidos, extraccin en metanol. Para evaluar la actividad antioxidante se utiliz el mtodo de reduccin del radical 1,1-dipfenil-2-picrihidrazil (DPPH), con absorbancia de 515 nm. Los extractos fueron utilizados en las concentraciones siguientes 10000 g/mL, 3000 g/mL, 1000 g/mL y 300 g/mL como testigo se utiliz la muestra patrn preparada. Se determin la IC 50 (concentracin necesaria para inhibir el 50% del radical libre).
CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIONES
4.1 Evaluacin qumica antes del liofilizado
Antes de que las muestras de aguaje fueran liofilizadas, se procedi a realizar el ensayo bromatolgico de la pulpa fresca y as, poder comparar si la pulpa al ser liofilizada mantiene sus propiedades y su comportamiento qumico. Los ensayos se realizaron por triplicado como se muestra en la (tabla 1), donde se observa la concentracin de humedad, protenas, aceites, cenizas y carbohidratos.
Tabla 1: Evaluacin qumica de pulpa de aguaje fresca Antes de ser liofilizada
Ensayo Bromatolgico Pulpa de aguaje sin liofilizar Amarillo Color Shambo
Fuente: Trabajo de la tesista La Tabla 1: Indica, que debido a su comportamiento, los morfotipos entre si presentan diferencia relevante. Es decir, que la humedad en cada uno es diferente siendo el morfotipo color quien contiene ms humedad y mayor concentracin de aceite en comparacin a los morfotipos shambo y amarillo; en donde, ms destaca el contenido de protenas es el morfotipo shambo demostrando la diferencia ms alta con respecto al morfotipo color; mientras que el contenido inorgnico para los tres morfotipos no presenta mayor diferencia.
4.2 Determinacin del peso del fruto por Liofilizacin
Las muestras de aguaje, antes de ser sometidas al proceso de deshidratacin por liofilizacin, fueron previamente pesadas para determinar el rendimiento que se obtiene cuando se encuentran secas; los resultados experimentales (Tabla 2), donde, se dan los pesos y rendimientos de los tres morfotipos
Tabla 2. Peso de aguaje de pulpa fresca y liofilizada
Amarillo Color Shambo Peso de inicio kg/g 1366 1782 980 Peso final kg/g 368.6 455.8 250.4 Rendimiento % 26.98 25.58 25.55
Fuente: Trabajo de la tesista
Realizando la regla de tres simple, la diferencia que se obtiene por cada peso es aproximadamente un 25% de muestra, deshidratndose aproximadamente un 75% de agua contenida en cada morfotipo, observando una buena apariencia al tacto y distinguindose la presencia notable fsica en el color caracterstico en cada uno de ellos. As como el camu camu; del aguaje puede obtenerse pulpa refinada, liofilizada, atomizada y productos con alto valor agregado como sachets, polvos hidrolizables, complementos vitamnicos, entre otros. (VEGA - 2000); quin determin los posibles usos que se pueden obtener del camu camu.
As como se determino de la extraccin liofilizada del camu camu el contenido de cido ascrbico (vitamina C), que se encuentra en la pulpa (GARCA,1995); del aguaje al realizar la extraccin de la pulpa fresca o liofilizada, se sabe que existe la presencia de carotenos como son: | - caroteno y o - caroteno (pro vitamina A vitamina A), o - tocoferol (vitamina E), calciferol, (pro vitamina D vitamina D). Esta ltima, que se obtiene a travs de la piel, mediante luz solar, los cuales serviran de mucha ventaja en el consumo y utilizacin del fruto.
4.3 Humedad de equilibrio experimental
Los datos experimentales obtenidos de las muestras expuestas a la temperatura de libre adsorcin, se expresan en las figuras 1,2 y 3, datos reemplazados de las (tablas 3,4 y 5), que indican las constantes halladas y el grado de ajuste encontrado para cada uno de ellos. Estas figuras presentan una relacin de humedad en equilibrio de pulpa de aguaje liofilizado con la humedad relativa (HR).
Como se mencion anteriormente las isotermas de adsorcin son tiles para disear y controlar los procesos como el almacenamiento, deshidratacin, la prediccin de la vida til del producto y de la evolucin en el contenido de humedad, entre otros. Segn FENNEMA (1993), las isotermas de adsorcin se dividen en tres zonas en funcin de la actividad de agua, desde la zona I (seca) a la zona III (de alta humedad).
Las isotermas de adsorcin del aguaje liofilizado muestra la zona I, donde el agua del fruto es ms fuertemente adsorbida y ms inmvil; la aw va de 0 a 25%. Esta agua no puede intervenir en reacciones como disolvente, tampoco se congela y es difcil de eliminar en deshidratacin. Se denomina agua monocapa.
Mediante el empleo de la ecuacin de BET y GAB, modelos matemticos de las isotermas de adsorcin se procedi a reemplazar los datos experimentales y aplicarlos a la ecuacin para as poder obtener el mejor grado de ajuste que puede poseer cada morfotipo y si existe diferencia alguna entre ellos a travs de su comportamiento.
Clculos para obtener la curva de BET
ECUACIN DE BET Para obtener el mejor grado de ajuste en esta ecuacin se utiliza la ecuacin de regresin lineal, para evaluar el mejor R 2 que se obtiene en cada morfotipo.
bx a y + = C))aw * (m 1) ((C C * m 1 )) aw (1 m aw( + = Ecuacin de BET Ecuacin lineal Tabla 3. Datos experimentales reemplazados en la ecuacin de BET, que expresan las constantes encontradas y el grado de ajuste para el morfotipo amarillo. Aw (X) m aw/(m(1-Aw)) 1/(m*C) (C-1)/(m*c) y(ajustado) m(ajustado) 0.0000 0.000 Y a b a + b(Aw) Aw/Y(ajus)(1-Aw) 0.083 0.0029 31.2112 9.5404 38.568 12.742 0.007 0.113 0.0177 7.1975 9.5404 38.568 13.899 0.009 0.225 0.0399 7.2763 9.5404 38.568 18.218 0.016 0.328 0.0322 15.1582 9.5404 38.568 22.191 0.022 0.654 0.0454 41.6338 9.5404 38.568 34.764 0.054 0.753 0.0804 37.9177 9.5404 38.568 38.582 0.079
Utilizando la ecuacin propuesta por BET, al encontrar las constantes lineales se procedi a efectuar la operacin, reemplazando los datos obtenidos en la ecuacin y as poder expresar el coeficiente de correlacin lineal y la curva de adsorcin que nos indica la muestra.
R 2 = 0.9281 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Y ( a j u s t a d o ) Actividad de agua Grfico de curva de adsorcin Logartmica (Series1)
Figura 1. Ajuste de los valores experimentales de morfotipo amarillo con la ecuacin de BET. MORFOTIPO SHAMBO
Clculos para obtener la curva de BET
Tabla 4. Datos experimentales reemplazados en la ecuacin de BET, que expresan las constantes encontradas y el grado de ajuste para el morfotipo shambo.
Aw (X) m aw/(m(1-Aw)) 1/(m*C) (C-1)/(m*c) y(ajustado) m(ajustado) 0.0000 0.000 Y a b a + b(Aw) Aw/Y(ajus)(1-Aw) 0.083 0.0133 6.8055 -1.2748 54.03 3.210 0.028 0.113 0.0193 6.6008 -1.2748 54.03 4.831 0.026 0.225 0.0470 6.1771 -1.2748 54.03 10.882 0.027 0.328 0.0374 13.0507 -1.2748 54.03 16.447 0.030 0.654 0.0498 37.9553 -1.2748 54.03 34.061 0.055 0.753 0.0797 38.2507 -1.2748 54.03 39.410 0.077
Reemplazando los datos obtenidos en el grfico se obtiene:
R 2 = 0.9281 -5 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Y ( a j u s t a d o ) Actividad de agua Grfico de curva de adsorcin Logartmica (Series1)
Figura 2. Ajuste de los valores experimentales de morfotipo Shambo con la ecuacin de BET. MORFOTIPO COLOR
Clculos para obtener la curva de BET
Tabla 5. Datos experimentales reemplazados en la ecuacin de BET, que expresan las constantes encontradas y el grado de ajuste para el morfotipo Color. Aw (X) m aw/(m(1-Aw)) 1/(m*C) (C-1)/(m*c) y(ajustado) m(ajustado) 0.0000 0.000 Y a b a + b(Aw) Aw/Y(ajus)(1-Aw) 0.083 0.0133 6.8055 1.3341 42.369 4.851 0.019 0.113 0.0187 6.8126 1.3341 42.369 6.122 0.021 0.225 0.0559 5.1936 1.3341 42.369 10.867 0.027 0.328 0.0244 20.0039 1.3341 42.369 15.231 0.032 0.654 0.0899 21.0253 1.3341 42.369 29.043 0.065 0.753 0.0772 39.4894 1.3341 42.369 33.238 0.092
Reemplazando los datos obtenidos en el grfico se obtiene:
Figura 3. Ajuste de los valores experimentales de morfotipo Color con la ecuacin de BET. R 2 = 0.9281 0 5 10 15 20 25 30 35 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Y ( a j u s t a d o ) Actividad de agua (aw) Grfico de curva de adsorcin Logartmica (Series1) La calidad de ajuste del modelo propuesto que se encontr en la pulpa liofilizada de aguaje para los morfotipos Amarillo, color y Shambo se evalu por medio del coeficiente de correlacin de regresin (R 2 ), el que debe ser superior a 0,85 para conseguir un buen modelado de los datos experimentales, resultados similares obtuvieron COLOME, ( 2008) en Iquitos Per. GARCA et. al. ( 2007) evalu en Argentina, determinaron las isotermas de adsorcin y la cintica de secado de las hortalizas: cebollita de verdeo (Allium cepa L.), puerro (Allium porrum L.) y pimiento verde (Capsicum annuum L.), y las plantas aromticas: organo (Origanum mejorana L) y perejil (Petroselinum sativus Hoffm) donde las isotermas de adsorcin se determinaron utilizando el mtodo esttico, exponiendo las muestras a atmsferas generadas con soluciones salinas saturadas a 30C hasta alcanzar el equilibrio msico, para harina de maz en Chile(VEGA et. al., 2006), reportando que la humedad de la monocapa para los modelos GAB, BET, OSWIN Y HALSEY ajustaron de mejor manera los datos experimentales, en comparacin a las dems ecuaciones propuestas en literatura. PRIETO et. al. (2005) reportando que los cereales para desayuno arroz, trigo y maz en Chile expuestos a la libre adsorcin de humedad, alcanzan rpidamente el equilibrio de adsorcin. A baja a W
(0.10), los tres cereales evaluados en este trabajo, ceden humedad al medio; a partir de valores de a W de 0.53 y mayores manifiestan sus capacidades de adsorcin de humedad con el tiempo, lo cual est asociado a que en los cereales se encontraron altos contenidos de azcares. El cereal de arroz, manifest los menores valores de capacidad de adsorcin, en tanto el de maz, la ms alta capacidad generando por consecuencia una dbil hidratacin., segn informa CHAVEZ et. al.(2004) en Argentina, determinaron en modelar las isotermas de adsorcin de berenjena deshidratadas en diferentes condiciones, aplicadas a las ecuaciones de BET, GAB Y FERRO FOTAN siendo este ltimo el que describe las isotermas de adsorcin de las berenjenas secadas en todo el rango de temperaturas estudiadas.
MEDINA & MENDIETA (1995) en San Martn Per; obtuvieron para datos experimentales evaluar diferentes ecuaciones de isotermas de desorcin para valores experimentales de humedad de equilibrio y humedad relativa obtenidos en la desorcin del jengibre, donde fueron evaluados 12 modelos matemticos de isotermas.
4.4 Estabilidad
Tabla 6, nos indica, el comportamiento qumico que presenta la pulpa liofilizada de aguaje para los morfotipos Amarillo, Shambo y Color, partiendo desde el tiempo inicial (tiempo cero), hasta el final (seis meses), siendo las muestras envueltas en cpsulas de gelatina a temperatura controlada de 30 C y denotar si la estabilidad y la calidad que podra poseer el fruto el cual destaca dentro de nuestra regin por su alto valor comercial, su excelente sabor y color caracterstico; nos seale que la calidad es una funcin multiparamtrica y que viene determinada no slo por las propiedades organolpticas, tales como color, sabor y textura, sino tambin, por el contenido en nutrientes. LABUZA Y HYMAN (1998), indican que la calidad y seguridad de un alimento que un fabricante debe tener en cuenta son la estabilidad microbiana, las propiedades fsicas y la velocidad de los cambios qumicos que conducen a la prdida de vida til.
Para la (USP 23 /NF 18 1995); la utilizacin de este mtodo, nos permite ver si la estabilidad del producto a analizar en un tiempo controlado vara al transcurrir el tiempo.
Tabla 6. Comportamiento qumico de muestras liofilizadas de aguaje, para los Morfotipos Amarillo, Color y Shambo
Ensayo Bromatolgico Tiempo cero Tres meses Seis meses Amarillo Color Shambo Amarillo Color Shambo Amarillo Color Shambo
Los datos experimentales obtenidos (tabla 6), nos indican, que despus de haber determinado el comportamiento qumico para las muestras encapsuladas de aguaje liofilizado, el incremento de humedad va en aumento, desde el tiempo inicial hasta el final, para los tres morfotipos, empezando en el amarillo con 3,19% en su tiempo de inicio y terminando en 9,06% en su tiempo final. El mismo incremento ocurre para los morfotipos Color y Shambo; observando que sus contexturas fsicas permanece igual sin presentar ablandamiento de la capa en que se encuentran cubiertos ni encogimiento de las mismas; en cuanto al contenido de residuos inorgnicos las muestras al transcurrir el tiempo presentan un leve decrecimiento, obteniendo mayor concentracin en el tiempo inicial que el tiempo final, el cual nos seala el morfotipo amarillo que se inicia con un 2,24%, al inicio y termina con 1,99% al final del proceso. Mientras que para los morfotipos Amarillo y Color la obtencin de aceite al inicio de su extraccin es menor, expresando mayor concentracin en el tiempo intermedio y decayendo en el tiempo final, el morfotipo Color nos seala que se inicia con un 33,49%, mientras que en su tiempo intermedio crece a un 62,16% y decae en el tiempo final con un 24,25%, a diferencia del morfotipo Shambo que permanece casi constante desde el inicio hasta el final del proceso. En cuanto al contenido de protenas para los tres morfotipos se observa que al inicio la obtencin es menor y la mayor concentracin se da al final del proceso, sealando el morfotipo Amarillo con 6,56% al inicio, 13,4% en el tiempo intermedio y terminando con un 13,56%, en el tiempo final, permaneciendo casi constante al termino del proceso.
Siendo los datos experimentales analizados, con respecto a su estructura qumica (tabla 1), en comparacin con la (tabla 6), nos indican, que la pulpa liofilizada posee sus caractersticas qumicas en mayor proporcin, conservando su pureza y caracterstica qumica de la muestra. Se deduce que las muestras liofilizadas al ser encapsuladas y sometidas al anlisis de estabilidad por un periodo de seis meses a una temperatura controlada de >30C; se observa que en el transcurso del tiempo, la prdida de fuerza en su comportamiento normalmente es el resultado de un cambio qumico, que pueden ocurrir a travs de la interaccin entre los ingredientes dentro de un producto, o raramente entre el producto y recipiente. Una prdida clara de su componente en el ingrediente activo, puede ser el resultado de la difusin de la muestra en o su combinacin con la superficie del recipiente en el sistema del cierre. El comportamiento de sus componentes es determinada por medio de un procedimiento del ensayo que diferencia entre la molcula intacta y sus productos de degradacin, lo que nos indica una leve seal de inestabilidad en el producto.
En cuanto a su comportamiento fsico, la pulpa de aguaje liofilizada y encapsulada bajo estas condiciones de formulacin; se observa que la formacin del producto terminado al ser manipuladas, abiertas y expuestas al ambiente para analizar el contenido; no muestra ninguna descarga de gas ni cambio en su apariencia en ninguno de los tres morfotipos.
Con respecto a su comportamiento microbiolgico en los anlisis la (Tabla 7) nos indica la contaminacin por bacterias, recuento de mohos, recuento de levaduras y probables contaminacin de escherichia coli. Siendo en general dentro del rango de aceptabilidad para el recuento de microorganismos un indicativo en las condiciones de salubridad de los alimentos, las tasas superiores a 10 6 10 7 ufc/ml, pueden ser indicios de descomposicin. Asimismo el lmite para mohos y levaduras es de 10 3
ufc/ml PASCUAL, (1992).
Tabla 7. Determinacin de anlisis microbiolgicos
Fuente: UNAP- Laboratorio de Industrias alimentarias Las muestras de aguaje liofilizadas se observa que antes de que las mismas fueran encapsuladas se hace denotar una leve apariencia de Mohos y Bacterias Heterotrficas con posible contaminacin del producto al Ensayo microbiolgico Tiempo cero Seis meses Amarillo Color Shambo Amarillo Color Shambo Recuento de Mohos (ufc/g) 9.9x10 3 9.5x10 1 4.7 x10 3 1.5x10 1 <10
Escherichia coli (ufc/g) <10 <10 <10 <10 <10 <10 inicio del proceso, pero al ser encapsuladas se observa el decrecimiento de microorganismos y disminucin de contaminacin, criterio que se evala debido a las condiciones en las cuales fueron sometidas las muestras y ventaja que pudieran producir en un periodo prolongado de seis meses de almacenamiento bajo esa envoltura . Las ventajas al determinar estos anlisis es que a la temperatura de 30C todas las bacterias, mohos y levaduras son capaces de desarrollarse en condiciones establecidas, reflejando la calidad sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulacin y las condiciones higinicas de la materia prima ORTIZ, (2003). Entre las desventajas tenemos que estos recuentos no pueden considerarse como totales ya que solo son susceptibles del contaje aquellos microorganismos capaces de crecer en las condiciones establecidas, adems se estima la microflora total sin especificar los tipos de microorganismos y por ltimo, sin tener un recuento bajo de aerobios mesfilos el cual nos indica las condiciones de salubridad de algunos alimentos eso no nos asegura la ausencia de patgenos o sus toxinas; de la misma manera que un recuento elevado no significa presencia de flora patgena. 4.5 Pro vitamina
En los grficos 7 y 8, se observa que al extraer el aceite con hexano de las muestras encapsuladas de aguaje, se observa que a una lectura de absorbancia de 450nm existe presencia de - caroteno en la muestra antes de ser encapsuladas y como esta se va degradando esto podra deberse a alguna reaccin enzimtica de degradacin y/o reacciones de destruccin qumica y/o una combinacin de ambas, sin embargo y por la forma de las graficas obtenidas podra considerarse como degradacin oxidativa ya sea por efecto de la temperatura o el almacenamiento a las cuales fueron sometidas. A diferencia del retinol se observa que a una lectura de 470nm existe presencia del mismo en la misma proporcin del -caroteno.
Determinacin de B-caroteno -2 0 2 4 6 8 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Meses L e c t u r a
d e
a b s o r b a n c i a Amarillo Color Shambo
Grfico 7. Anlisis de -caroteno por espectrofotometra a luz visible de 450nm
Determinacin de Retinol -2 0 2 4 6 8 10 0 1 2 3 4 5 6 7 Meses A b s o r b a n c i a
4 7 0
n m Amarillo Color Shambo
Grfico 8. Anlisis de retinol por espectrofotometra a luz visible de 470nm En la (Tabla 8), se presentan los resultados de estabilidad del -caroteno encapsulado conteniendo la pulpa de aguaje liofilizado a -50C y almacenadas a 30C, por un lapso de 180 das. Se observa que la concentracin inicial, prcticamente triplica lo obtenido por el de VSQUEZ, (2008), al trabajar con pulpa seca. Este resultado es concordante, debido a la prdida de humedad por la pulpa del aguaje, al ser sometida a la operacin de deshidratado por liofilizacin. Del mismo modo esta cifra es superior a la de pulpa fresca de aguaje dada por YUYAMA et al., (1998) quienes reportan valores entre 11,05 mg/100g a 35,8 mg/100g, y al de umar que presenta entre 7,9 mg/100g y 15,3 mg/100g, segn reporta MARINHO Y CASTRO, (2002).
Tabla 8. Estabilidad del -caroteno (mg/100g) en cpsulas de gelatina conteniendo pulpa liofilizada de aguaje de tres morfotipos almacenadas a 30C, por espectrofotometra a luz visible de 450nm
La (tabla 9), nos muestra el valor nutricional de los micronutrientes minerales que se encuentran presentes en la pulpa liofilizada de aguaje para los morfotipos amarillo, color y shambo. Datos experimentales obtenidos a travs de la utilizacin del equipo de absorcin atmica.
Tabla 9. Datos experimentales de metales obtenidos en el aguaje liofilizado de tres morfotipos
Fuente: IIAP Laboratorio de sustancias naturales (sala de espectrofotometra)
Como se observa en esta tabla, se observa que la concentracin que en todos los metales obtenidos prcticamente es 10 veces ms lo obtenido por el de VSQUEZ, (2008), al trabajar con pulpa fresca de aguaje de los mismos tres morfotipos. Este resultado es concordante, debido a la prdida de humedad por la pulpa del aguaje, al ser sometida a la operacin de deshidratado por liofilizacin el cual nos indica que la muestra sometida a esta proceso mantiene sus propiedades nutritivas. Dando como ventaja que el consumo de este producto, debido a la cantidad de minerales que posee es de esencial importancia en el metabolismo humano. MITCHELL et al., (1978) dijo que, aproximadamente el 2% del cuerpo humano adulto es calcio y 1% es fsforo. As mismo, el 99% de calcio es constituyentes de los huesos y dientes 75% fsforo, dndoles fuerza y rigidez. Minerales Amarillo mg/100g Color mg/100g Shambo mg/100g Fierro 1.43 2.67 1.33 Manganeso 2.03 16.28 15.59 Zinc 8.25 1.33 3.05 Sodio 331.13 220.42 350.43 Calcio 64.75 74.43 151.93 Potasio 1673.37 2488.16 1420.93 Magnesio 212.57 171.43 141.08 Cobre 2.32 1.21 0.52 4.7 Actividad antioxidante
Las IC 50 obtenidas fueron >50% estos resultados que nos indican la (tabla 7) son las concentraciones que se emplearon y las cuales present la actividad antioxidante mas relevante, para cada lectura por morfotipo pruebas qumicas previas realizadas en esta especie.
Tabla 7. Evaluacin de la actividad antioxidante, como porcentaje de inhibicin del radical DPPH por la pulpa liofilizada de tres morfotipos de aguaje
Fuente: trabajo de la tesista
En la Tabla 8, se presenta el porcentaje de inhibicin de la pulpa de aguaje liofilizado, utilizando como radicales libres los proporcionados por el DPPH, se observa que en todas las concentraciones efectuadas el morfotipo shambo presenta mayor actividad antioxidante. Estos datos demuestran una actividad antioxidante moderada si se compara con la pulpa, cscara y semilla de camu camu, los cuales presentan a 300 ug/mL una actividad antioxidante de 75,33 ug/mL, 76,64 ug/mL y 43,54 ug/mL respectivamente, segn reporta SOTERO et al., (2009) (Tabla 9). Resultados similares nos indica la (Tabla 10). Para la Anona, Chope, Huito, Huasa, Uvilla y castaa.
Concentracin ug/mL %Inhibicin Amarillo Color Shambo 10000 52.07 62.00 70.37 3000 25.37 32.24 38.09 1000 10.78 16.62 17.59 300 8.04 6.72 9.05 Tabla 9. Evaluacin de la actividad antioxidante por secuestro del radical 2,2- dipfenil-1-picrilhidrazil (DPPH) y determinacin del IC 50 en extracto metanlico de camu camu
Tabla 10. Evaluacin de la actividad antioxidante por secuestro del radical 2,2- dipfenil-1-picrilhidrazil (DPPH) y determinacin del IC 50 en extracto metanlico de Anona, Chope, Huasa, Huito, Uvilla y Castaa. Frutos Extractos metanlicos
1. Los frutos de aguaje al ser liofilizados se observa que el 75% del agua contenida es eliminada durante el proceso obtenindose un 25% de pura muestra en los frutos.
2. Despus de ser liofilizadas las muestras de aguaje se ejecut el anlisis de humedad para determinar si la muestra es propensa a regenerarse nuevamente captando humedad inmediata del ambiente que lo rodea. Siendo los resultados satisfactorios, indicando que la muestra liofilizada no se humedece fcilmente permaneciendo su comportamiento fsico estable al ambiente y seco al tacto.
3. En los anlisis bromatolgicos se observa que a medida que transcurre el tiempo las muestras encapsuladas se inestabilizan mostrando diferentes variaciones en humedad, cenizas, aceites y protenas
4. La determinacin de pro vitamina A durante su almacenamiento a temperatura de 30C se nota una leve degradacin oxidativa lo que nos indica presencia de inestabilidad en la muestra.
5. Para la actividad antioxidante las concentraciones de 10000 g/mL nos indica en el morfotipo amarillo presenta un 52,07% de inhibicin en la muestra, observando a la misma concentracin el morfotipo shambo con el 70,37% de inhibicin elevada para ambos siendo mnima para el morfotipo color indicando una menor inhibicin por debajo de los 50.
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