Recuento e Identificación de Enterococos en Aguas

UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO
RUIZ GALLO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS
rea de Microbiologa y Parasitologa
MICROBIOLOGA ACUTICA
PRESENCIA AUSENCIA DE INDICADORES DE

CONTAMINACIN FECAL
Alumna
Ravines Arriaga C. Alejandra
Lambayeque, noviembre del 2017

I. INTRODUCCIN |
El aumento del uso del agua para diferentes fines y el crecimiento de la poblacin a nivel mundial
han contribuido al incremento de los niveles de contaminacin de los sistemas acuticos. La
contaminacin de estos ecosistemas es una problemtica que se presenta en la actualidad, debido al
constante vertimiento de desechos domsticos e industriales que constituyen una fuente de deterioro
del medio ambiente.
La calidad microbiolgica del agua se evala en todo el mundo para proteger la salud humana,
la biodiversidad en el medio ambiente acutico. La deteccin y cuantificacin de microorganismos
patgenos en el agua es importante para reducir los riesgos asociados a la salud pblica y tomar las
acciones ms adecuadas para prevenir la transmisin de enfermedades. Varios microorganismos
indicadores de la contaminacin fecal se utilizan para evaluar la calidad y la seguridad de los distintos
tipos de agua y alimentos.
El control de la calidad microbiolgica del agua de consumo y de vertido, requiere de anlisis

dirigidos a determinar la presencia de microorganismos patgenos. Las bacterias que se encuentran
con mayor frecuencia en el agua son las bacterias entricas que colonizan el tracto gastrointestinal del
hombre y son eliminadas a travs de la materia fecal.
Cuando estos microorganismos se introducen en el agua, las condiciones ambientales son muy
diferentes y por consiguiente su capacidad de reproducirse y de sobrevivir son limitadas. Debido a que
su deteccin y recuento a nivel de laboratorio son lentos y laboriosos, se ha buscado un grupo
alternativo de indicadores que sean de ms rpida y fcil deteccin.
Enterococcus est recibiendo una amplia aceptacin como indicador muy til en la
determinacin de la calidad microbiolgica tanto del agua, debido a que siempre estn presentes en las
heces de los animales de sangre caliente, son incapaces de multiplicarse en las, adems sobreviven
largos perodos en condiciones adversas de la naturaleza. Algunos estudios realizados con aguas
recreativas y potables consideran que los enterococos son indicadores ms estables que Escherichia coli
y los coliformes fecales.
Los miembros del gnero Enterococcus son cocos gram positivos, presentan una disposicin
aislada, en pares, o forman cadenas cortas. Ellos pertenecieron, clsicamente, a los Streptococcus grupo
D de Lancefield; sin embargo, a mediados de la dcada de 1980 fueron oficialmente clasificados en su
propio gnero. Son catalasa negativa, anaerobios facultativos, capaces de crecer en condiciones un
tanto extremas. Las caractersticas bioqumicas sobresalientes incluyen: la habilidad de crecer en
presencia de NaCl al 6,5%, a temperaturas entre 10C y 45C, y hasta en un pH de 9,6. Tienen la
capacidad de hidrolizar la esculina, crecer en presencia de bilis al 40%, sobrevivir 30 min a 60C e
hidrolizar la L-pirrolidonil -naftil-amida (PYR); esta habilidad ha sido usada como parte de un test
rpido para deteccin de enterococos en el laboratorio.
Las especies de Enterococcus clnicamente importantes son: E faecalis, E faecium, E durans, E

avium, E gallinarum, E casseliflavus, E raffinosus, E malodoratus, E hirae, E mundtii, E solitarius, E
pseudoavium. Cabe resaltar que E. faecalis es el patgeno humano ms frecuente representando el 60%
al 90% de los aislamientos clnicos de enterococos. E faecium es la segunda especie aislada en
frecuencia, representando el 5% al 16% de los aislamientos clnicos.
II. OBJETIVOS |
Aprender a utilizar la tcnica del test de Presencia o Ausencia.
Detectar contaminacin fecal en agua mediante la determinacin de Enterococos.
Determinar la calidad higinica del agua.
III. MATERIALES |
Muestra de Agua de pozo del Casero El Palomino, Zaa Lambayeque.
Una botella y una campana de Durham con medio P-A triple concentrado.
Un tubo con caldo Brilla.
Una placa con agar ENDO.
Un tubo con Agar Enterococo.
Un tubo con EC.
IV. PROCEDIMIENTO |
Prueba Presuntiva para Coliformes Totales
1. Se homogeniza la muestra (25 veces).

2. Inoculacin del medio, medir y agregar 50ml de la muestra en la botella caldo PA con triple
concentrado.
3. Incubar en aerobiosis 35C por 24 - 48 horas.
Lectura:
Produccin de gas.
Turbidez.
Prueba Confirmativa para Coliformes Totales
1. Sembrar 1 o 2 asadas en un tubo con caldo BRILLA (con campana de Durham), con el inculo
procedente de la siembra del caldo PA.
2. Incubar a 35C por 24 horas
Lectura:
Presencia de gas.
Si sale positivo, sembrar en placa con Agar ENDO e incubar a 35C por 24 horas.
Lectura:
Colonia con brillo metlico.

Prueba para Coliformes Termotolerantes
1. Del caldo PA sembrar 1 o 2 asadas en un tubo con caldo EC.

2. Se incuba 45C por 24 horas
Lectura:
Presencia de gas indica positividad de la prueba.
Prueba presuntiva para Enterococos fecales
1. Del caldo PA, se siembra 1-2 asadas en caldo Enterococcus.
Lectura:
Presencia de gas y sedimento.
2. Confirma la presencia de Enterococos en Agar Enterococos

3. Observacin Microscpica: Cocos Gram +; Catalasa (+), disposicin en cadenas cortas de 2,
de 4.
PROCEDIMIENTO | DESCRIPCIN GRFICA
1 2
3 4 5
Figuras. 1) Muestra tomada en el casero El Palomino Zaa Lambayeque. 2) Botella con medio P-A triple
concentrado. 3) Resultados del caldo enterococo y caldo BRILLA, ambos fueron positivos con formacin de gas. 4)
Placa con Agar Enterococo usado para la prueba confirmativa. 5) Botella con medio P-A triple concentrado despus
de ser incubada. Result tener crecimiento positivo, con presencia de gas.
V. RESULTADOS |
Caldo BRILLA |
Positivo, hubo crecimiento y turbidez.

Agar ENDO | Prueba de Confirmacin
Se detect crecimiento.
Colonias grandes y pequeas de bordes irregulares, lactosa negativos.
Presencia de coliformes lactosa negativos.
Frasco con medio P-A |
Viraje de color.
Turbidez.
Presencia de gas captada gracias a la campana de Durham.
VI. INTERPRETACIN |
Los requisitos de calidad del agua apta para el consumo humano estn establecidos en el
Reglamento de la Calidad del Agua para el Consumo Humano DS N 031-2010-SA, de la
Direccin General de Salud Ambiental, Ministerio de Salud Lima Per 2011. Segn
Artculo 60 Parmetros Microbiolgicos y Otros Microorganismos el nmero de
bacterias heterotrficas en agua para el consumo humano debe ser cero UFC/ml a 35C.
La presencia de gas y brillo metlico en la placa con agar ENDO, indican la presencia de estas
bacterias., comparando los resultados observamos con los requisitos de calidad del agua apta
para el consumo humano, la presencia de Enterococcus no cumple con la norma.
Se excede el lmite permitido por el Reglamento de la Calidad del Agua para el Consumo
Humano; por lo tanto, la muestra de agua obtenida en el casero El Palomino Zaa
Lambayeque, no es apta para el consumo humano.
VII. CONCLUSINES |
Teniendo en cuenta los objetivos de la prctica se logr determinar la presencia de enterococos
en el agua.
Segn el Reglamento Peruano de la Calidad del Agua Para el Consumo Humano, el agua
utilizada por los habitantes del casero El Palomino Zaa Lambayeque, no es apta para el
consumo, por exceder los lmites de enterococos permitidos.
VIII. RECOMENDACIONES |
El agua de pozo utilizada por los habitantes del casero El Palomino no es apta para ser
consumida directamente, por lo tanto debe ser previamente hervida o desinfectada con bajas
concentraciones de cloro antes de ser utilizada para el consumo.
IX. BIBLIOGRAFA |
Madigan, M., J. Martinko y J. Parker, BROCK BIOLOGIA DE LOS MICROOORGANISMOS-
8va Edicin-Ed. Prentice May-1064pp.
Donald J. Reasoner, Ph.D. Recuento heterotrfico en placas Divisin de Contaminantes

Microbiolgicos, WSWRD, NRMRL Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos
Cincinnati, Ohio 45268. Tomada el 12 de junio del 2015 de
http://www.bvsde.paho.org/bvsala/e/fulltext/recuento/recuento.pdf

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PRESENCIA AUSENCIA DE INDICADORES DE

Lambayeque, noviembre del 2017

El control de la calidad microbiolgica del agua de consumo y de vertido, requiere de anlisis

Las especies de Enterococcus clnicamente importantes son: E faecalis, E faecium, E durans, E

Prueba Presuntiva para Coliformes Totales

1. Se homogeniza la muestra (25 veces).

Prueba Confirmativa para Coliformes Totales

Colonia con brillo metlico.

1. Del caldo PA sembrar 1 o 2 asadas en un tubo con caldo EC.

Presencia de gas indica positividad de la prueba.

Prueba presuntiva para Enterococos fecales

1. Del caldo PA, se siembra 1-2 asadas en caldo Enterococcus.

Presencia de gas y sedimento.

2. Confirma la presencia de Enterococos en Agar Enterococos

Positivo, hubo crecimiento y turbidez.

Frasco con medio P-A |

Donald J. Reasoner, Ph.D. Recuento heterotrfico en placas Divisin de Contaminantes

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