UNIVERSIDAD DE SONORA

DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUIMICO
BIOLOGICAS
LABORATIORIO DE QUIMICA ANALITICA III
“Separación de Carbohidratos por Cromatografía Ascendente
en Papel”
López Cota Astrid G., Partida Rivera Rey M. A., Vega Littlewood Rebeca
Equipo 1 (7am-9am)
utilizar diferentes fases móviles (gases, líquidos
Objetivo o fluidos supercríticos) y estacionarias
(minerales, polímeros orgánicos e inorgánicos o
● Evaluar el efecto de la polaridad de la fase sólidos recubiertos de líquidos) (Rubinson y
móvil en la separación de azúcares Rubinson, 2001). Hoy en día, en casi todos los
reductores.
campos de las ciencias experimentales (química,
biología, medicina, etc.) se utiliza la
Introducción
cromatografía en alguna de sus formas, tanto en
Los carbohidratos constituyen la mayor parte de su vertiente preparativa como en la analítica; por
la materia orgánica disponible en la Tierra. otra parte, el desarrollo del uso conjunto de la
Proporciona grandes ventajas a los seres vivos, cromatografía con otras técnicas analíticas, así
como almacén de energía, combustibles e como el desarrollo de otros tipos de
intermediarios metabólicos (Cárabez & cromatografía hace previsible una extensión aún
Chavarría, 2013). Estos tienen su origen en la mayor de su uso (Cerdán, 2014).
dieta, al igual que en la síntesis endógena. Al
momento de digerir en la dieta, se encuentran en La característica que distingue a la cromatografía
forma de polisacáridos (almidón), disacáridos de la mayoría de los métodos físicos y químicos
(fructosa) o monosacáridos (glucosa o galactosa); de separación es que se ponen en contacto dos
y una vez digeridos son absorbidos por la flora fases mutuamente inmiscibles (una estacionaria y
intestinal en forma de monosacáridos (Moreano, otra móvil). La muestra se introduce en la fase
2015). móvil donde es transportada a lo largo de la
columna que contiene la fase estacionaria. Los
Los azúcares reductores son aquellos que poseen componentes de la muestra experimentan
su grupo carbonilo (grupo funcional) intacto interacciones repetidas (repartos) entre la fase
entre estos tenemos glucosa, lactosa, fructosa, móvil y la fase estacionaria, provocando que los
maltosa, galactosa, manosa, y que a través del diferentes constituyentes de la muestra se separan
mismo pueden reaccionar con otras moléculas; gradualmente en bandas en la fase móvil. Al final
los azúcares no reductores al contrario no poseen del proceso los componentes separados emergen
su grupo carbonilo libre y entre estos tenemos en orden creciente de interacción con la fase
sacarosa (Moreano, 2015). estacionaria, el componente menos retenido
emerge primero mientras el más afín con la fase
En 1910, se introdujo por vez primera el método estacionaria eluye el último (Cerdán, 2014).
de cromatografía, el cual permite separar entre sí
los componentes de una matriz compleja, La cromatografía de papel es una técnica
encontrando que su gran aplicabilidad se debe a utilizada para llevar a cabo análisis cualitativos,
la variedad de condiciones que pueden utilizarse está nos permite llevar a cabo la separación e
para separar dichos componentes. Se pueden identificación de compuestos, trabajando con
cantidades mínimas de sustancia. Pertenece al 1. Se preparó la fase móvil, haciendo una mezcla
tipo de Cromatografía de partición, el cual se de solventes (Butanol-Agua-Ácido acético) en
fundamenta en que las sustancias problema, relación 5:4:1 a un volumen de 30 mL.
pueden tener diferentes coeficientes de reparto en
dos disolventes parcialmente miscibles en ella. 2. Se vació la mezcla de solventes en el vaso de
existen varios tipos de cromatografía, la berzelius y se tapó por un periodo de 40 min hasta
ascendente (papel hacia arriba), descendente lograr la completa saturación.
(papel invertido), radial y de separación de zonas
y sectores. Para esta técnica, se utiliza 3. Utilizando los guantes, se marcó el origen en
generalmente como fase estacionaria una hoja de el papel a 1 cm de la orilla y el frente del solvente
papel de celulosa de elevada pureza, recubierta a 10 cm del origen.
con una capa de agua asociada a las fibras de
celulosa (UNAM, 2007). 4. Se marcó 1 cm en los márgenes izquierdo y
derecho, y entre cada una de las muestras se
Materiales: marcó 1.5 cm.

● Papel Whatman # 1 (20 x 20 cm) 5. Se colocó con un capilar diferente cada

● Capilares muestra y se esperó a que seque en el papel.
● Cámara cromatográfica (vaso de
berzelius de 500 600 mL) 6. Se enrolló y engrapó (sin empalmar) el
● 1 Probeta de 100 mL cromatograma de las orillas.
● Guantes de látex
● Campana de extracción 7. Se introdujo el cromatograma en la cámara
● Bomba de vacío con el origen hacia la base y se tapó.
● Regla
● Lápiz 8. Se esperó el tiempo necesario para que el
● Tijeras solvente alcance el frente del solvente.
● Reactivo
9. Se sacó el cromatograma y sin desengrapar, se
● Butanol
puso a secar en la campana de extracción.
● Ácido acético
● Soluciones de carbohidratos
10. Se desengrapó el cromatograma y se reveló
● Solución reveladora Anilina- Ftalato
con anilina-ácido ftálico (preparado en el
● 1 Vaso de Berzelius de 400 o 600 mL
momento, con la formulación que contenía mayor
● Vidrio de reloj para tapar el vaso de
cantidad de ácido ftálico) con un atomizador al
berzelius
vacío.
● 2 Vasos de precipitado de 100 o 150 mL
● 1 Vaso de precipitado de 250 ML 11. Se calentó en estufa a 100 grados centígrados
durante 2 a 5 min.

12. Se localizaron las manchas y se calcularon los

valores de Rf.
Preparación de revelador para cromatografía
de papel
Resultados
Saturar en un embudo de separación 63 ml de
butanol y 37 ml agua, después, ya que se vaya a Tabla 1. Fase móvil en papel
utilizar agregar 1.63 g de ácido ftálico más 1 ml
de anilina. Orden Carbohidratos Rf

1 Fructosa 0.375
Metodología
 2 Glucosa 0.325
demás carbohidratos analizados y por lo tanto
interacciona menos con la fase estacionaria que
3 Ribosa 0.4375 consta de papel de celulosa y agua. El agua tiene
una alta afinidad por los grupos hidroxilo de las
4 Lactosa 0.1875
unidades de glucosa presentes en las fibras
5 Sacarosa 0 celulósicas del papel, forma puentes de hidrógeno
con ellos y funciona como fase estacionaria. La
6 Galactosa 0.2875
fase móvil
7 Muestra problema 0.4375 es una fase líquida menos polar, que
(Fructosa + Lactosa + generalmente consiste en solventes orgánicos
Ribosa) miscibles con agua tales como butanol y ácido
acético (Osorio, 2001).

Conclusión
Fue posible la evaluación del efecto de la
polaridad de la fase móvil en la separación de
azúcares reductores, por medio del uso de papel
filtro como fase estacionario y una solución de
solventes de butanol-agua-ácido acético (5:4:1)
como fase móvil. Se pudieron obtener sus rf de
cada azúcar al igual que el de la muestra
Imagen 1. Revelado de cromatografía en papel problema.
de la fase móvil.

Revelador: Anilina y ácido ftálico (específico Referencias

para azúcares reductores).
● UNAM. (2007). Técnicas
Cromatográficas., de
Discusión
Universidad Autónoma de
México Sitio web:
En la Tabla 1. se observan los valores de Rf de
http://depa.fquim.unam.mx/amy
cada uno de los carbohidratos analizados así
d/archivero/M.Cromatogrficos_
como el valor de Rf de la muestra problema. En
6700.pdf
este caso la ribosa fue el carbohidrato que
● Moreano, M.M. (2015).
recorrió la distancia más larga al igual que la
Determinación de Azucares
muestra problema tal y como se puede observar
Reductores y su Relación con
en la Imagen 1., por lo que se cree que la muestra
Carbohidratos No Absorbidos en
problema X es ribosa puesto que ambos presentan
Niños (a) del Centro de
un valor de Rf de 0.4375 así como el mismo color
Educación Inicial “María
rojizo a la hora de realizar el revelado en papel.
Montessori” del Cantón
Que ambas muestras tengan el valor de Rf más
Latacunga en el Período 2014-
grande nos indica que tienen más afinidad con la
2015., de UNIVERSIDAD
fase móvil (que se destaca por ser menos polar
TÉCNICA DE AMBATO Sitio
que la fase estacionaria) que con la fase
web:
estacionaria. Esto se debe a que la ribosa es un
http://repositorio.uta.edu.ec/jspu
monosacárido menos polar comparándolo con los
i/bitstream/123456789/10569/1/
 TESIS%20MAYRA%20MORE
ANO%20%281%29.pdf
● Cerdán, M. (2014).
Aproximación Metabolómica a
los Zumos de Fruta Mediante la
Cromatografía de Líquidos y de
Gases Acoplada a la
Espectrometría de Masas., de
Universidad de Valencia Sitio
web:
https://www.educacion.gob.es/t
eseo/imprimirFicheroTesis.do?i
dFichero=qBa%2Bejg21b8%3D
● Osorio, V. K. L., & Oliveira, W.
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Detergentes Em Po Comerciais.
Química Nova, 24(5), 700-708.
https://dx.doi.org/10.1590/S010
0-40422001000500019