Actualidad

LA ELECTROFORESIS *
Sus fundamentos.
Dr. RAMON MONTERO SCHMIDT
Hospital "Luis Calvo Mackcnna".

Este metodo, cada dia mas empleado La sero-albumina, de bajo peso mole-
en el estudio de casi todas las enfermeda- cular, es fuertemente electro-negativa y
des en que el suero y plasma sanguineos migra, al iniciarse el proceso electroforeti-
juegan algun papel (y sabemos que es co, al polo positivo. Las globulinas, de peso
muy dificil que haya alguna que no alte- molecular mas alto, se separan a velocida-
re o cambie en alguna forma la constela- des diferentes; una minoria se dirige tam-
cion albuminoidea de estos liquidos), con- bien en direccion del polo positivo pero me-
siste fundamentalmente en valorar la can- nos rapidamente que la sero-albumina,
tidad y calidad de las diversas fracciones pues su carga negativa es tambien menor;
proteicas que los fo'rman. La determina- las otras globulinas van al catodo por po-
cion de estas, separadas dentro de un cam- seer cargas electro-positivas. A este res-
po electrico por la influencia ejercida por pecto es muy ilustrativo el grafico N(-' 1.
los electrodos clasicos, aodo (- 1 -} y catodo La electroforesis, en suma, efectua la
( — ) , permite al investigador, por compa- separacion de todos los componentes al-
racion de sus valores normales con los en- buminoideos alineandose, si asi puede de-
contrados en la enfermedad, conocer y cirse, segun sus cargas negativas o posi-
precisar mejor numerosos cuadros patolo- tivas y su peso molecular, en un orden
gicos. bien estricto. Las albuminas se situaran
No solo las albuminas del suero y plas- muy cerca del polo positivo y a continua-
ma sanguineos son susceptibles de un es- cion las globulinas, por sus cargas electri-
tudio electroforetico sino que tambien las cas negativas debiles o positivas in cres-
de tejidos organicos, musculos, cuerpo cendo, formando varios grupos denomina-
vitreo y cristalino asi como las de toxinas, dos fracciones globulinicas alfa, beta, ga-
venenos albuminoideos y exudados diver- ma, etc. Ademas, aparecen o pueden apa-
sos, las de la leche y las aparecidas en la recer, otras gradientes proteicas como la
orina y en el L.C.R. llamada Fi (jt o del fibrinogeno) delta,
etc. o las fracciones V y T del L.C.R.
Comport amiento electroforetico de las Hay numerosos metodos de tecnica ma-
fracciones proteicas del plasma o suero cro y micro electroforeticos y to'dos tie-
nen sus defensores (Tiselius, Labhard,
Sabemos que las partfculas de proti- Staub y Lotmar, Philpot-Cook-Swensson,
dos, que por influjo de un campo electri- Toepler, Longworth, etc.) pero en el mo-
co adquieren carga positiva, migran en di- mento actual el metodo mas perfecto pa-
reccion al polo negativo y viceversa, pues rece ser el del Prof. H. J. Antweiler, de
la ley fisica es muy clara: "con las mis- Bonn, Alemania. Este procedimiento, lla-
mas cargas se repelen, con distintas se mado ';interesferometrico compensatorio
atraen". de luz blanca", es rapido, falgunos minu-
tos) y exacto pero desgraciadamente, por
Pel griego Phpros == llevar, transportar, exigir un aparato optico relativamente cos-
28 LA ELECTROFORESIS. — Dr. R. Montero S.

I ta 2 p Beta 3), despues y siempre en di-

reccion al catodo, la fraccion Fi y, por
ultimo, la de la gama globulina (que po-
see tambien dos fracciones gama 1 y ga-
ma 2). La expresion en un diagrama de
todo esto se encuentra en los graficos N^
2 y 3.
Para el adulto y recien nacido estos
valores son los siguientes: (en( grs. por
litro de suero). (Ver cuadro N ? 1).
Grafico N9 1. Se ve claramente que la gama globu-
Fundamento de la electroforesis en papel (segun lina es 1/5 del total de las proteinas del
Antweiler) 1) Suero o mezcla albuminosa a exami- recien nacido y solamente 1/9 de las del
nar. 2 ) Componentes con carga electrica positiva. adulto. La tasa de gama globulina del re-
3) Componenies con carga negativa. La flecha senala cien nacido normal es superior a la corres-
la ekctroosmosis catodica de la mezcla a examinar,
que se produce antes de iniciarse la electroforesis misma. pondiente de la madre, naturalmente en
un embarazo y parto normales. Ya a los
toso y delicado, no esta al alcance de cual- dos meses de la vida del lactante comienza
quiera clinica. For ello el metodo de elec- a caer la tasa de gama globulina y ello
troforesis en papel es el mas empleado en continiia hasta los 10 meses mas o menos,
la practica diaria; es economico y de tec- a cuya fecha alcanza solo a la mitad de la
nica facil y aunque no nos informa sobre cifra normal del adulto; en adelante sube
el fibrinogeno, o sea, no separa la fraccion de nuevo hasta alcanzar, alrededor de los
Fi del plasma sanguineo, es el que nos per- 4 anos, la tasa media del individuo com-
mite seguir con la mayor facilidad la evo- pletamente desarrollado. Las alfa y beta
lucion que las proteinas del suero experi- globulinas son, al memento del nacimien-
mentan durante el curso de nefropatias, to, mas bajas que las del adulto pero su-
hepatopatias, distrofias. desnutriciones, ben rapidamente en los primeros 5 dias
carcinomatosis, procesos reumaticos y tbc, haciendose muchas veces francamente al-
etc. Personalmente hemos tenido oportu- tas, tanto que las reacciones de Hanger y
nidad de trabajar tanto con el metodo de otras analogas pueden ser positivas por
Antweiler como con el de electroforesis en esta causa.
papel (respecto a este ultimo nosotros Sobre modificaciones debidas al colos-
usamos el Elphor H, o metodo de Grass- tro en el diagrama electroforetico del lac-
mann, Hannig, Knedel). For quedar fue- tante de pocos dias no hay acuerdo aun
ra de la indole de este articulo no nos re- entre los investigadores. Es interesante si
feriremos aqui a detalles tecnicos. anotar que el icterus gravis de la eritro-
Valores normales de proteinas totales en blastosis fetal muestra la disproteinemia
los diversos periodos de la vida mas desfavorable conocida en el periodo
del recien nacido; disminucion enorme de
Efectuada la electroforesis de un plas- la sero-albumina y de la gama globulina.
ma o suero normal, esta separa primera- El diagrama normal de la segunda in-
mente una gran banda, que luego de colo- fancia o periodo preescolar es mas o me-
reada por tecnicas ad-hoc, es perfectamen- nos el del adulto.
te calculable por planimetria (como todas Origen y caracteristicas electroforeticas
las demas), mediante el metodo llamado mas importantes de las albuminas del
de las curvas de Gauss en papel milime- plasma y suero sanguineo
trado, o directamente segun procedimien-
tos recientes y que corresponde a la sero- Sero-albumina. — Se forma en el hf-
albumina. A continuation, vienen dos ban- gado, como asimismo el fibrinogeno y la
das para las Alfa 1 y Alfa 2 globulinas, protrombina. Tiene una gran estabilidad
luego una para las Beta (sean Beta 1, Be- clectroforetica, debido, como ya dijimos, a
CUADRO
Sero-albuminas Alfa glob Beta glob. Gama glob.
Adulto 63,5 ± 2.8 12,3 -+- 2 12,7 ± 2 11,6 ± 2 - 9 •
tti 4,8
(t-2
7,5
Reci£n nacido 64,7 ± 2,8 8,05 ± 2 6,3 -+- 2 20,3 ± 3.5
 LA ELECTROFORESIS. — Dr. R. Montero

Diagrama de gradientes pro-

teicas del plasma sanguineo
segdn el procedimiento de Diagrams de gradientes proteicas del plasma (o suero")
Antweiler.AfSeroalbilmina.ocT sanguineo, segun el mctodo de electroforesis en papel.
(M. Knedel) .
*i ,^ f 7- f f,Fracciones globull- Grafico N ? 3. 1
nicas.f ,Fracci<5n fi(del fi-
brindgeno), el mieloma, endocarditis lenta abacteria-
Grafico N? 2. na y en la poliartritis reumatica. Existen,
entonces, policentros de globulino-genesis
su alta carga electronegativa, o sea, mi- intra y extra hepaticos; estos ultimos se
gra en masa hacia el polo positive, al que hallan en activo campo de investigacion.
es fuertemente atraida; sabemos tambien Las alfa y beta globulinas son ricas en
que su bajo peso molecular hace que la lipoides, tambien en hidratos de carbono
velocidad de migracion sea mayor que la y vitaminas liposolubles. Si los lipoides
de las escasas otras fracciones proteinicas son extraidos con acetona u otra substan-
de carga negativa. Tiene capacidad para cia de igual efecto, disminuyen las bandas
unirse (combinarse) a colorantes diver- electroforeticas correspondientes, especial-
sos, a acidos grasos de ambas cadenas (sa- mente la de la alfa globulina.
turados o aromaticos), a sulfoderivados, a En las beta globulinas hay estrogenos
las vitaminas C. K. y P, a cardioglucocidos y es la proteina sanguinea casi electiva del
y a los antibioticos. Es la albumina que transporte del cobre. Casi 3/4 partes de la
mejor mantiene la viscosidad sanguinea, protrombina del plasma esta en la beta
ahorrando trabajo al corazon. Se le descri- fraccion, el resto en las alfa y gama y asi-
ben tres fracciones seguras, de las cua- mismo 1/3 de las isohemoaglutininas, en-
les una, el seroglicoide, que contiene hasta tre ellas el factor antirhesus. Los 2/3 res-
8 % de H de C, es muy soluble y no cris- tantes de estas isohemoaglutininas se ha-
talizable, a diferencia de las otras dos frac- llan unidas a la gama globulina.
ciones, que son insolubles y cristalizables. Concepto de la mucoproteina. — Es
GZobulinas. — Se forman en buena conveniente citar aqui la llama mucopro-
parte en el higado pero indiscutiblemente teina, sobre la que los autores america-
tambien en otros sistemas como en el re- nos vienen insistiendo muchisimo. Es una
ticuloendotelio del bazo, medula osea y en fraccion de la alfa globulina, de la que
los linfocitos. Es indudable, asimismo, que constituye mas o menos 1/5 o sea, apro-
la mucosa intestinal da origen a globuli- ximadamnete un centesimo de las protei-
nas. Las hiperglobulinemias siempre o ca- nas totales del plasma. Se encuentra muy
si siempre vienen acompanadas de hipose- disminuida en las afecciones por insu-
ro-alburninemia, lo que hace presumir con ficiencia hepatica, tambien en la nefro-
fundamento qus las globulinas proceden sis y _en el mieloma; esta aumentada, en
de la seroalbumina, la que seria a la pos- cambio, en los procesos proliferativos y
tre la materia prima de las mismas y el neoplasicos y en las ictericias obstructi-
organismo echa mano de ellas (de mas al- ves, siendo un buen medio de diagnostico
to valor molecular) para emplearlas en diferencial de estas ultimas.
funciones determinadas. Gama globulina. — Muy estudiada y
La gama globulina (rica en triptofano) sobre ella la literatura es enorme tanto
se halla tambien en los organos linfaticos en relacion co nlos fenomenos de inmuni-
y muy abundante en las plasmacellen, en dad como con cuanto tenga que ver con
 30 LA ELECTROI-'ORESIS. Dr. R. Montero

afecciones cronicas, enfermedades del co- mos por 100 cc.). Su aumento acelera la
lageno, dermatosis, etc. En 1936 Tiselius velocidad de sedimentacion. El aumenta
establece su inhomogeneidad y en 1947 al final del embarazo, despues de las in-
separa de ellas tres grupos principales tervenciones quirurgica, en las enferme-
(gama 1, gama 2, gama 3). Hasta doce dades infecciosas, en los derrames pleu-
sub-grupos, a lo menos, ban sido aislados riticos, en el reumatismo, en la tubercu-
hasta ahora pero evidentemente que en losis y en el infarto del miocardio. En to-
varios de estos debe tratarse de parapro- da hiperinosis esta acelerada la viscosi-
teinas. dad sanguinea.
Electroforeticamente se conocen dos Electroforeticamente el fibrinogeno se
componentes gama (1 y 2), los que, sin desplaza dentro de la llamada fraccion Fi
embargo, desde el punto de vista inmuno- (;i) pero ella no revela exactamente la
biologico, se comportan en forma iden- cuantia de la fibrinogenemia real. En efec-
ticas. Ambas fracciones (o las que fue- to, esta no podra ser mas alta que lo que la
ren) contienen el 98% de las inmuno- gradiente Fi seriala pero si puede ser mas
globulinas del plasma o suero. Han sido, baja. Ya dijimos que la fraccion Fi no apa-
en efecto, identificados factores inmuni- rece en la electroforesis en papel. Deci-
tarios contra difteria, disenteria, tifoidea, didamente ningun metodo electroforetico
estreptococias, afecciones por perfringens es un buen medio para saber la fibrino-
y neumococos, contra herpes, paperas, he- genemia en un momento dado; solo me to-
patitis, sarampion, poliomielitis, etc. Es- dos analiticos identifican con exactitud
pecialmente rico en estos factores es el las cifras verdaderas de fibrinogeno san-
suero de convalecientes pero, cosa cu- guineo. Sin embargo, la electroforesis
riosa, muchas veces, sin que la cifra de orienta significativamente sobre las tasas
gama globulina sea mayor que la normal, de este protido.
aunque, en general, hay paralelismo evi- Interesante es senalar algunas de las
dente entre fracciones gama globulina au- caracteristicas de las proteinas del plasma
mentadas de los convalecientes y tasas ante los agentes fisicos, por ejemplo, frio,
altas a la gama globulina. La aglutinina calor, rayos X, etc. En el suero conserva-
0 de la tifoidea y la beta isohemoaglutini- do a temperatura ambiente la alfa globu-
na se hallan electivamente en la gama 1 lina disminuye a los 3 dias, algo mas tar-
fraccion. Los anticuerpos de la influenza de disminuye la beta y a la semana la
y coqueluche en ambas gama fracciones. alfa fraccion puede llegar a desaparecer.
Merece ser tambien senalado (Moore y En cambio, no se altera la gama fraccion
Harris) el hecho que la antihialuronidasa, y aun, mientras aquellas caen, puede esta
elemento que frena y aun paraliza la ac- aumentar.
cion de la hialuronidasa estreptococica, Hay autores, sin embargo, que han lo-
substancia esta ultima, que como es sabi- grado hallar factores albuminoideos elec-
do esta fuertemente aumentada en los en- troforeticamente separables en sueros con-
fermos de reumatismo o en los que sufren servados mas de un aho a la temperatura
una afeccion estreptococica, acompana a ordinaria.
la gama fraccion y es un verdadero neu- El enfriamiento, en los primeros ocho
tralizador de la hialuronidasa presente en dias, no altera las proteinas, salvo que
la sangre. Es decir, es un anticuerpo, a precipite las crioglobulinas, si estas exis-
diferencia del otro factor antihialuronida- ten; pero el calentamiento sobre 37° co-
sico, el llamado inhibidor y que se halla mienza a producir cambios irreversibles
en la sero-albumina, el cual frena o im- que hacen imposible la electroforesis. Los
pide la produccion de hialuronidasa pero rayos X sobre ochocientas r. disminuyen
nada puede contra la ya existente, a la las gama globulinas y aumentan las al-
que es incapaz de neutralizar. fa y beta; la seroalbumina no se modi-
Fraccion Fi o del fibrinogeno. (;i) El fica substancialmente. Las ondas ultra
fibrinogeno, tal vez la mas completa al- sonoras y la luz ultra violeta no parecen
bumina de la economia, pues contiene producir efectos modificadores sobre nin-
practicamente todos los aminoacidos co- guna de las proteinas del plasma.
nocidos, se origina en el higado; tiene el En un proximo articulo nos referire-
mas alto peso molecular de todos los pro- mos a la importancia de la electroforesis
tidos del plasma (tasa 250 a 400 miligra- en la practica clinica.