Pelaez Loyola Lizeth Margoth

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
A
IC
M
UI
Q
O
INFORME DE PRÁCTICAS PRE PROFESIONALES PARA OPTAR EL
BI
Y
IA
TÍTULO DE QUÍMICO FARMACÉUTICO

AC
R M
FA
“CONTROL MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS

DE
FARMACEUTICOS NO ESTÉRILES EN LA INDUSTRIA

CA
FARMACÉUTICA.”
TE
IO
BL
BI
AUTOR:
Br. Pelaez Loyola Lizeth Margoth
ASESOR:
Mg. Q.F. Rengifo Penadillos Roger Antonio
TRUJILLO – PERÚ
2016
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
AGRADECIMIENTO
Agradezco a Dios por guiarme
en su camino y siempre permanecer
conmigo en cada momento de mi vida.
A
IC
M
UI
Q
A mis padres: Lupe y Miguel, por
O
BI
brindarme su amor y apoyo en todo
Y
momento. Cada logro en mi vida es
IA
gracias a ustedes. Los amo

AC
R M
FA
DE
Un cordial agradecimiento al personal

CA
TE
que labora en el Laboratorio Farmacéutico Markos por su

IO
BL
apoyo incondicional para la realización de este

BI
Informe de prácticas pre profesionales
Lizeth
RESUMEN
El objetivo del presente informe de prácticas pre-profesionales es realizar los

controles microbiológicos a los productos farmacéuticos no estériles
manufacturados en Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A. durante el año
2015. En la sección de control microbiológico se realizan diversas análisis
como: preparación de medios de cultivo, esterilización por calor húmedo y seco,
controles positivos y negativos, control de cepa patrón, verificación y promoción
A
de crecimiento de medios, análisis microbiológico de agua, control
IC
microbiológico de ambientes, superficies y personal, límite microbiano,
M
UI
determinación de patógenos, y potencia antibiótica; luego de obtener los
Q
resultados se concluye que estos están acorde con las especificaciones de la
O
BI
Farmacopea de los Estados Unidos-USP, de esta manera garantizando que los
Y
productos tienen una óptima calidad microbiológica.

IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Palabras claves: control microbiológico, cepas, medios de cultivo, productos
farmacéuticos no estériles, Farmacopea de los Estados Unidos.
ABSTRACT
The aim of this report pre-professional practice is to perform microbiological

controls to non-sterile pharmaceutical products manufactured in Markos
Pharmaceutical Laboratories S.A. culture media preparation, sterilization wet
and dry heat, positive and negative controls, strain pattern control, verification
and promotion of growth media, microbiological analysis: during 2015. Section
microbiological control various analysis as performed water, microbiological
A
control of environments, surfaces and personnel, microbial limit, determination
IC
of pathogens and antibiotic potency; after obtaining the results it is concluded
M
UI
that these are consistent with the specifications of the United States
Q
Pharmacopoeia-USP, thus ensuring that the products have optimal
O
microbiological quality.
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Keywords: microbiological control, strains, culture media, non-sterile pharmaceutical

products, the United States Pharmacopeia.
ii
INDICE
Resumen………………………………………………………………………..……i
Abstract………………………………………………………………………….….ii
A
I. Introducción………………………………………………………………..1
IC
M
UI
Q
O
II. La Institución o Empresa………………………………………………......3 BI
Y
IA
AC
III. Actividades desarrolladas…………………………………………………..8

R M
FA
DE
IV. Presentación de resultados de la prácticas pre profesionales………………47

CA
TE
IO
BL
V. Conclusiones……………………………………………………………… 56
BI
VI. Recomendaciones………………………………………………………….56
VII. Referencias bibliográficas…………………………………………………57
Anexos…………………………………………………………………….58
PRÓLOGO
La presencia de ciertos microorganismos en preparaciones no estériles puede tener el
potencial efecto de reducir y hasta inactivar la actividad terapéutica del producto y de
afectar adversamente la salud del paciente. Los fabricantes deben asegurar por tanto una
baja biocarga de formas farmacéuticas terminadas mediante la implementación de las
A
IC
guías de Buenas Prácticas de Manufactura vigentes durante la fabricación, el
M
UI
almacenamiento y la distribución de preparaciones farmacéuticas.
Q
O
En la Industria Farmacéutica se ha establecido la necesidad de incluir como ensayo de
BI
rutina la determinación del número y tipo de microorganismos para garantizar la
Y
IA
inocuidad en el consumo del medicamento así como para poder evitar variaciones en
AC
M
cuanto al aspecto, olor, color, sabor, consistencia, descomposición, intolerancia,

R
FA
disminución de su actividad y otros.1

DE
CA
TE
IO
BL
BI
I. INTRODUCCIÓN
Los productos no estériles son susceptibles de contaminarse con microorganismos

tales como bacterias, mohos y levaduras durante el proceso de manufactura: pesada,
fabricación, llenado, almacenamiento, así como durante su uso. La contaminación de
los productos farmacéuticos, puede tener el potencial de reducir o inactivar la
actividad terapéutica del principio activo y por ende representar un riesgo para la
salud del paciente; adicionalmente la presencia de estos microorganismos
dependiendo de su patogenicidad puede ocasionar infecciones o enfermedades
que afecten al paciente o consumidor.
A
IC
Por otra parte, el deterioro microbiano podría conllevar a cambios en las
M
características físicas y químicas que conducirían a que el producto deteriorado no
UI
sea apto para ser usado, afectando con ello la imagen del laboratorio productor.
Q
O
Es por ello, que las materias primas y los productos farmacéuticos terminados, deben
BI
ser sometidos a un análisis microbiológico que demuestre que cumplen con las
Y
IA
especificaciones establecidas por los organismos oficiales, para garantizar que los
AC
productos son adecuados para el uso al que están destinados.2

R M
FA
Las buenas prácticas en un laboratorio microbiológico consisten en actividades que

DE
dependen de varios principios: técnicas asépticas, control de medios, control de cepas

de prueba, operación y control de equipos, registro detallado y evaluación de datos
CA
así como capacitación del personal de laboratorio.

TE
Debido al riesgo inherente de variabilidad de los datos microbiológicos, la

IO
BL
confiabilidad y la reproducibilidad dependen de la utilización de los métodos

BI
aceptados y reconocidos como métodos farmacopeicos validados y del

cumplimiento de las buenas prácticas de laboratorio.3
Chávez A. Luis, 1987. Trabajo de investigación en el Control microbiológico de

materia prima y producto terminado realizado en C.I.N.P.S.A determinó que la
materia prima y el producto terminado cumplen con las especificaciones USP.
Guevara V. Marlon, 1999. Informe de prácticas desarrollado en Control

microbiológico y fisicoquímico de medicamentos genéricos en el laboratorio
farmacéutico Roxfarma S.A. donde realizo el análisis microbiológico de cinco
medicamentos genéricos, determinó que sus resultados son acorde con las
especificaciones farmacopeicas establecidas.
Sánchez E. Janeth. 2003. En su estudio sobre el Control microbiológico en la
Industria farmacéutica, informa sobre los diversos análisis microbiológicos que se
realizan al producto farmacéutico.
Castro G. Omar, García C. Juan. 2012. Estudio desarrollado en la Evaluación
microbiológica del recuento de bacterias, mohos y levaduras aislamiento e
A
IC
identificación de E. coli. S. aureus, P. aeruginosa., Salmonella sp y Candida
M
albicans en producto farmacéuticos expendidos en el Emporio Comercial Albarracín
UI
de la ciudad de Trujillo evaluaron 12 marcas de productos expendidos, determinó
Q
O
que los análisis realizados solo 10 de ellas cumplen con los requisitos de calidad
BI
adecuados para su comercialización.
Y
IA
García C. Juan. 2012. Estudio desarrollado en la Determinación y Cuantificación de

AC
Gentamicina sulfato en Multiderm crema de Laboratorios Farmacéuticos

M
Farmindustria S.A por potencia antibiótica, mediante el método microbiológico

R
FA
cilindro-placa determino la potencia antibiótica de Gentamicina y demostró la

DE
efectividad y confiabilidad del método

García S. Sheyla. 2013. Estudio en el Análisis microbiológico de productos no
CA
estériles y dietéticos elaborados por la Industria farmacéutica nacional. evaluó la

TE
calidad microbiológica de 81 productos no estériles determinando que todos los

IO
BL
productos cumplen con los criterios de aceptación.

BI
Objetivo General
1. Ejecutar los controles microbiológicos a los productos farmacéuticos no estériles
manufacturados en Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A.
Objetivos Específicos
1. Realizar el manejo adecuado de los medios de cultivo y cepas microbianas.
2. Realizar los análisis microbiológicos respectivos a los medios de cultivo y cepas

microbianas.
3. Realizar los controles microbiológicos de ambiente, superficie y personal.
4. Desarrollar capacidades en el análisis microbiológico.
Descripción del Informe

En el presente informe de prácticas sobre los controles microbiológicos se detalla las
diversas actividades y análisis que se realizan en la sección de control
microbiológico del área de control de calidad en la industria farmacéutica.
El examen microbiológico de productos no estériles se realiza de acuerdo a los
A
IC
métodos proporcionados en la Farmacopea de los Estados Unidos-USP, de Pruebas
M
de Recuento Microbiano y Pruebas de Microorganismos Específicos.
UI
Los criterios de aceptación para productos farmacéuticos no estériles basados en el
Q
O
recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y el recuento total combinado
BI
de hongos filamentosos y levaduras (RTCHL) se presentan en las guías
Y
IA
farmacopeicas USP .4,5

AC
M
II. LA INSTITUCIÓN O EMPRESA

R
FA
DE
 Razón social
Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A.
CA
TE

IO
Fundación e Historia
BL
Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A. es una empresa dedicada a la

BI
elaboración de productos farmacéuticos, que fue fundada en el año 1977, bajo la

dirección del Sr. Marcelino Orihuela. En sus inicios impulsó la venta de
productos galénicos, como Agua de Azahar, Agua Oxigenada, Agua del
Carmen, Supositorios de Glicerina; llegando a ser su principal producto la
Limonada Purgante Markos, dándole presencia en el mercado.
Laboratorios farmacéuticos Markos S.A. inicia sus actividades como empresa

dedicada al cuidado de la salud, a través de la fabricación y comercialización de
sus productos farmacéuticos en el año de 1978.
El flujo de producción obedece a una secuencia adecuada, desde el ingreso de la

materia prima y material de empaque al almacén hasta la obtención del producto
terminado.
Actualmente Laboratorios farmacéuticos Markos S.A. cuenta con la certificación

de Buenas Prácticas de Manufactura (BPM), otorgada por la Dirección General
de Medicamentos, Insumos y Drogas (DIGEMID), así como la certificación de
A
Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL).
IC
M
UI
Q
 Misión
O
BI
Y
Empresa farmacéutica nacional dedicada a la comercialización y producción de
IA
medicamentos de calidad. Comprometidos con la plena satisfacción de nuestros

AC
clientes, apoyados en la competencia de nuestro recurso humano, innovación,

R M
desarrollo de productos, tecnología actualizada, estrictos controles de calidad y

FA
orientados a la preservación del medio ambiente.

DE
CA
Influyendo positivamente en la calidad de vida de la comunidad y con el apoyo

TE
constante de los accionistas a quienes se le garantiza el retorno de su inversión.

IO
BL
 Visión
BI
Seremos una empresa reconocida en el mercado farmacéutico Peruano, logrando

la satisfacción de nuestros clientes y proveedores, en un mercado dinámico y
exigente, con nuevos productos, a través de estrategias claras, innovación a todo
nivel, plantas modernas, con personal capacitado que trabaja en equipo.
Identificado y con altos niveles de motivación, disfrutando de una organización
ágil y proactiva.
 Objetivos:
Comercialización y producción de medicamentos de calidad. Comprometidos

con la plena satisfacción de nuestros clientes.
A

IC
Organigrama General
M
UI
Gerencia
Q
General
O
Sub Gerencia
BI
General
Y
IA
Superintend
ente de
AC
Planta
M
Dirección
Técnica
R
FA
Asistente
DE
Jefe de Jefe de
Jefe Jefe de Jefe de Jefe de Producción Compras
CA
Aseguramiento Control de Almacén Mantenimiento

de la Calidad Calidad
TE
IO
BL
BI
 Organigrama del Área de Practica
Jefe de Control de
Calidad
Responsable de Análisis Responsable de Desarrollo Responsable de Análisis

Fisico-Químico Analítico Microbiológico
A
IC
Analista Responsable Analista Responsable
de de Validaciones de Analista Responsable
M
Procesos de de Microbiolgía
Control de Procesos Fabricación
UI
Q
Analista Responsable
O
de Material de
de Validación de
Empaque
Limpieza BI
Y
Analista de Analista Responsable

IA
Responsable de de Estabilidad de
productos en
AC
Materia Prima y Agua

comercialización
M
Analista Responsable Analista Responsable

R
de Equipos y de Validación de
FA
Calibraciones de Técnicas analíticas y

Material de Vidrio Estándares
DE
de Desarrollo de
Técnicas analíticas y
de Producto
CA
estabilidad de
Terminado
productos nuevos
TE
IO
BL
BI
 Funciones de área donde se desarrolla la práctica

 Realizar los análisis microbiológicos del agua purificada según los programas
establecidos.
 Realizar los análisis microbiológicos de ambientes según el programa
establecido.
 Realizar las pruebas de límite microbiano y determinación de patógenos a los
productos terminados, materias primas, material de empaque.
 Interpretar los resultados de las pruebas de límite microbiano, control
microbiológico de aguas, control microbiológico de ambientes, control
microbiológico de personal.
A
IC
 Realizar las valoraciones microbiológicas correspondientes cuando la técnica lo
M
UI
requiera.
Q
 Controlar y realizar los controles positivos y negativos de los medios de cultivo.
O
BI
 Realizar el mantenimiento y registro de las cepas patrón.
Y
 Preparar los materiales para valoraciones microbiológicas, medios de cultivo y

IA
AC
otros necesarios para los análisis microbiológicos.

M
 Manejo de los estándares primarios y secundarios que requieran valoraciones

R
FA
microbiológicas.
DE
 Apoyo analítico en el área de análisis microbiológico durante las validaciones.

 Manipular la autoclave y estufa para los procesos de esterilización.
CA
 Coordinar y supervisar el mantenimiento de las condiciones del área de

TE
IO
microbiología, así como, del funcionamiento continuo de las incubadoras a su

BL
cargo con los registros respectivos.

BI
 Elaborar los reportes correspondientes a los análisis microbiológicos realizados

que constituyen la evidencia documentada de las actividades realizadas.
 Elaborar procedimientos, instrucciones y toda la documentación necesaria para
el mejor desempeño del puesto.
 Custodiar y preservar la documentación técnica inherente al puesto como
responsable de los análisis de producto microbiológico.
 Política de la Empresa
Ofrecer productos y servicios competitivos, cumpliendo con las necesidades y
expectativas de los clientes y los requisitos regulatorios, mejorando
continuamente nuestro Sistema de Gestión Integral de Calidad a través del
compromiso con la prevención de la contaminación ambiental y el control de los
aspectos e impactos significativos reales y potenciales, asegurando resultados
sociales, empresariales y económicos que garanticen la sostenibilidad de la
empresa.
 Servicios de la empresa
A
IC
Empresa farmacéutica nacional dedicada a la comercialización y producción de
M
medicamentos de calidad, al servicio de la medicina humana, Con altos
UI
estándares de calidad – Buenas Prácticas de Manufactura (B.P.M.), satisfacemos
Q
O
las necesidades de nuestros clientes y generamos valor agregado.
BI
Suministramos materias primas, materiales de Envase, Control de Calidad,
Y
IA
Validación de Metodologías Analíticas y Estudios de Estabilidad en tiempo

AC
oportuno.
R M
FA
 Localización
DE
Av. Separadora Industrial 531 / Urb. Los Alamos, Ate – Lima – Perú
CA
TE
IO
BL
BI
 Infraestructura Administrativa y Productiva:
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
III. ACTIVIDADES DESARROLLADAS
POE: CC-MAMB-017: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 6

Los medios de cultivo constituyen la base de la mayoría de las pruebas
microbiológicas. Por tanto, es de suma importancia que se proteja la calidad de estos
medios a fin de lograr resultados exitosos en el laboratorio de microbiología. La
preparación de los medios, el almacenamiento apropiado y las pruebas de control de
calidad pueden asegurar un suministro uniforme de medios de alta calidad.
Describir las pautas necesarias para la correcta preparación de los medios de cultivo.
A
IC
M
El analista responsable de preparación de medios de cultivo verifica, previamente a la
UI
pesada, el color y la apariencia del medio deshidratado. No utilizar el medio si tiene la
Q
O
apariencia grumosa o si presenta alteración del color. BI
Y
Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado en un beacker, cubrir con aluminio y
IA
registrar en el cuaderno de preparación de medios de cultivo. El medio pesado es

AC
transferido a un balón, matraz y/o jarra limpia de acero inoxidable con capacidad
R M
adecuada para disolver siguiendo las instrucciones indicadas en la tabla 1. Se verifica el

FA
pH de todos los medios de cultivo.

DE
Se tapa los balones conteniendo los medios con torundas (algodón y gasa), un capuchón
CA
de papel Kraft y sobre el papel se pega una tira de cinta indicador de esterilidad de calor
TE
húmedo (que permite confirmar la distribución del vapor en la autoclave). Luego se

IO
BL
rotula colocando el nombre del medio de cultivo, número de lote y la fecha de

BI
preparación.
Se colocan los balones con los medios preparados en bandejas para su Proceder a la
esterilización considerando los parámetros indicados en la tabla 1.
Los medios de cultivo preparados debidamente identificados son almacenados en

refrigeración entre 2°C - 8°C y tienen vigencia de un mes.
10
Preparación de solución amortiguadora fosfato ph 7,2:
Solución Amortiguadora Madre: Transferir 34g de fosfato monobásico de potasio a un

matraz volumétrico de 1 000mL, disolver en 500mL de agua purificada, ajustar con
hidróxido de sodio a un pH 7,2 ± 0,2, agregar agua purificada a volumen y mezclar.
Dispensar en recipientes y esterilizar. Almacenar a una temperatura de 2°C a 8°C.
Solución Amortiguadora Fosfato pH 7,2: Para usar medir 1 mL de la solución

Amortiguadora madre y diluir hasta 800 mL, distribuir en balones y esterilizar en un
autoclave a 121°C y aproximadamente a 15 psi, de presión durante 15 minutos.
A
IC
Distribuir las soluciones según indica:
M
UI
Solución amortiguadora de fosfato pH 7,2 : 90 mL
Q
Solución amortiguadora de fosfato pH 7,2 en tubos de prueba : 9 mL
O
BI
Y
Tabla 1: Fórmula de los medios de cultivo
IA
AC
R M
Nombre de Cantidad Calidad de pH (a Recomendaciones de Esterilizar

FA
medios de cultivo requerida agua 25°) preparación

DE
Agar antibiótico 30,5 g por Agua purificada 8,3 ± 0,1 Disolver calentando 121°C por
CA
N°11 litro en baño maría 15 minutos

TE
hirviendo o en
IO
corriente de vapor.
BL
Agua purificada Calentar en agua

BI
Agar manitol 108 g por 7,4 ± 0,2 hirviente y agitar con 121°C por
salado (MS) litro frecuencia hasta 15 minutos
disolución completa
Agar Cetrimide 45,3 g por Agua purificada 7,2 ± 0,2 Disolver calentando 121°C por
(CM) litro en agua hirviente o en 15 minutos
corriente de vapor y
agregar 10mL de
glicerina por litro de
11
medio.
Agar MacConkey 50,0 g por Agua purificada 7,1 ± 0,2 Disolver calentando 121°C por
(MC) litro en baño maría 15 minutos
hirviendo o en
corriente de vapor.
55,2 g Agua purificada 7,2 ± 0,2 Disolver calentando No Autoclavar.
Agar xilosa lisina por litro estéril en baño maría
Desoxicolato hirviendo o en
(XLD) corriente de vapor.
Los precipitados
ocasionales no
perjudican la eficacia
A
IC
del medio de cultivo.
M
Caldo Rappaport – 42,5 g por Agua purificada 5,2 ± 0,2 Disolver e introducir 115°C por
UI
vassiliadis para litro. en tubos o matracitos. 15 minutos
Q
enriquecimiento de
O
salmonella (CRV) BI
Y
Agar plate count 22,5g por Agua purificada 7,0 ± 0,2 Disolver calentando 121°C por
IA
(PC) litro en baño maría 15 minutos

AC
hirviendo o en
M
corriente de vapor.
R
Agar glucosa 65,0 g por Agua purificada 5,6 ± 0,2 Disolver calentando 121°C por
FA
sabouraud 4% litro en agua hirviente y 15 minutos

DE
(AS) agitar con frecuencia No

CA
hasta disolución sobrecalentar

completa.
TE
Caldo Mac Conkey 35,0 g por Agua purificada 7,3 ± 0,2 Disolver e Introducir 121°C por
IO
(CM) litro en tubos de ensayo 15 minutos

BL
dotados de tubitos de
BI
fermentación
Agar Digerido de 40,0 g por Agua purificada 7,3 ± 0,2 Disolver calentando 121° por
caseína y soja litro en baño maría 15 minutos
(TSA) hirviendo o en
corriente de vapor.
Caldo digerido de 30,0 g por Agua purificada 7,3 ± 0,2 Agitar con frecuencia 121°C por
Caseína y soja litro hasta disolución 15 minutos
(TSB) completa.
12
Agar antibiótico 17,5 g por Agua purificada 7,0 ± 0,05 Disolver mezclando 121° por
N° 3 litro bien y calentar 15 minutos
agitando
frecuentemente y
hierva durante 1
minuto para disolver
completamente el
polvo.
Caldo Mossel para 45 g por litro Agua purificada 7,2 ± 0,2 Disolver mezclando 121° por
enriquecimiento de bien. Introducir en 5 minutos
Enterobacterias tubos y Autoclavar o
calentar durante 30
A
IC
minutos a 100° en
M
baño de agua hirviente
UI
o en corriente de
Q
vapor enfriar
O
BI inmediatamente.
Y
IA
Agar Violeta rojo 39,5 g por Agua purificada 7,4 ± 0,2 Disolver y hervir en No Autoclavar
AC
bilis Glucosa litro estéril un baño de agua No

M
(VRBD) hirviente o en Sobrecalentar

R
corriente de vapor
FA
bajo agitación regular

DE
por balanceo hasta que

el medio de cultivo se
CA
haya disuelto
TE
completamente.
IO
Seguidamente
BL
continuar hirviendo no
BI
más de 2 minutos.
13
POE: CC-MB.012: ESTERILIZACIÓN POR CALOR HUMEDO 6
La Esterilización es un proceso por el cual se eliminan o destruyen todas las formas

viables de microorganismos. El calor húmedo es un vapor saturado a presión.
Establecer los pasos para la correcta esterilización por calor húmedo de los medios de
cultivos y materiales; se aplica a todos los medios de cultivos recientemente preparados
y/o materiales que sea necesario esterilizar por calor húmedo como hisopos, cucharas
descartables, tips, guantes.
Para llevar a cabo la esterilización de medios de cultivo y materiales, se hace uso de la
A
autoclave, la cual se utiliza cada vez que se requiera realizar este proceso.
IC
M
Se colocan los medios de cultivo o material a esterilizar en bandejas limpias y secas.
UI
Colocar al material a esterilizar la cinta indicadora de esterilización para verificar que el
Q
O
proceso de esterilización se lleve de manera adecuada. BI
Introducir el material dentro de la autoclave, proceder a autoclavar.
Y
IA
Para la esterilización de materiales mediante calor húmedo se deberán tener en cuenta

AC
las siguientes condiciones:

R M
FA
PRESION : 15 psi
DE
TEMPERATURA : 121C
TIEMPO : 15 minutos
CA
TE
Para la esterilización de medios de cultivo mediante calor húmedo considerar las

IO
BL
condiciones indicadas en metodología analítica.

BI
Se deberá llevar un control del ciclo de esterilización, el cual será registrado en el

formato F-CC.013 “CONTROL DE ESTERILIZACION”, realizar cinco registros,
distribuidos como sigue:
CONTROL No 1 : Al inicio
CONTROL No 2 : Después de 4 minutos
CONTROL No 3 : Después de 4 minutos adicionales
14
Asimismo en el ítem PRODUCTO de este formato, registrar el N° de lote de

preparación de los medios a esterilizar.
Concluido el proceso, retirar y trasladar el material esterilizado por la puerta Nº 1 de la
autoclave, seguidamente cerrar la autoclave.
Verificar cada 15 días la eficiencia del autoclavado mediante el uso del bioindicador.
POE: CC-MB.005: ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES POR CALOR SECO 6
A
El correcto proceso de esterilización de los materiales por calor seco, nos asegura la
IC
eliminación de alguna forma viable de microorganismos presente en el material,
M
UI
garantizando así la efectividad del análisis microbiológico.
Q
O
Se aplica a todos los materiales de vidrio y aquellos que resistan una temperatura de
BI
180º.
Y
IA
Los materiales a esterilizar por este método son los siguientes: pipetas gravimétricas y
AC
volumétricas, placas petri, fiolas, probetas, pinzas de acero inoxidable, espátulas de

M
acero inoxidable, frascos para muestreo, tubos de prueba.

R
FA
DE
Preparación de los materiales

Los materiales a esterilizar son preparados previamente antes de proceder a la esterilización.
CA
Previamente este material debe estar limpio y seco; para lo cual se tendrá en cuenta los siguientes
TE
pasos:
IO
BL
 Pipetas: en la parte superior de la pipeta colocar algodón y eliminar los residuos de algodón
BI
cortándolos con una tijera, envolver cada pipeta con papel kraft de tal forma que sea fácil
sacarla por la parte superior sin necesidad de comprometer el resto de la pipeta.
 Placas Petri: se agrupan en paquetes de cuatro placas y se envuelven en papel kraft.
 Fiolas y probetas: se envuelve la parte superior (la boca) con papel aluminio.
 Tubos de prueba: se les colocará un tapón de algodón, se envuelven en paquetes de cuatro
con papel kraft.
15
 Frascos: cubrir el tapón de algodón con papel kraft y atar con pabilo ésta cubierta sobre la
rosca del frasco.
 Pinzas, sacabocados y espátulas de acero inoxidable: Envolverlos en papel aluminio.
Los materiales a esterilizar se colocan en la estufa de esterilización, se coloca la cinta

indicadora de esterilización al material, para verificar que el proceso de esterilización se
lleve de manera adecuada.
Llevar a una temperatura aproximada de 180C, una vez que la estufa ha alcanzado la
temperatura, anotar la hora y a partir de ahí contar dos horas para el término de la
esterilización.
A
Controlar la temperatura del horno de esterilización cada 30 minutos y hacer las
IC
anotaciones pertinentes en el formato F-CC.013 “CONTROL DE ESTERILIZACIÓN”.
M
UI
Retirar los materiales esterilizados, revisar que el papel que los envuelve no se
Q
encuentre dañado; de ser así descartar dicho material.
O
BI
Trasladar y guardar el material esterilizado en el lugar acondicionado para este fin.
Y
El material esterilizado es almacenado por un periodo no mayor a 30 días, después del

IA
AC
cual el material vuelve a ser preparado y sometido al proceso de esterilización.

R M
FA
POE: CC-MB.010: CONTROLES POSITIVOS Y NEGATIVOS 6

DE
CA
Asegurar que los medios de cultivo preparados conserven las propiedades, garantizando
TE
una respuesta adecuada frente a los microorganismos.

IO
Cada lote de medios de cultivos preparados y esterilizados pasan por las pruebas de
BL
controles positivos y negativos.

BI
Controles negativos
Todos los medios de cultivos preparados y esterilizados son colocados en la incubadora
en condiciones descritas según la Tabla N°2, luego son revisados para descartar alguna
posible contaminación, mala manipulación o esterilización deficiente.
Se descarta aquellos medios donde haya evidencia de crecimiento de microorganismos.
16
Los medios de cultivo que pasen esta prueba son ubicados en la refrigeradora a una
temperatura de 2°C - 8°C por espacio no mayor de 1 mes.
Controles positivos.
Se siembra la cepa especificada para cada medio a evaluar según Tabla Nº 2.
Los medios son incubados en las condiciones establecidas para el crecimiento de cada
cepa según tabla Nº2.
Las pruebas se consideran satisfactorias si hay una clara evidencia de crecimiento en los
medios inoculados. Los medios de cultivo se descartan si muestran una respuesta
inadecuada de crecimiento.
A
IC
M
Los resultados de los controles respectivos se registran en el formato correspondiente F-
UI
CC.022 Controles Positivos Y Negativos.
Q
O
BI
Tabla N°2: Controles positivos y negativos
Y
IA
CONTROL POSITIVO CONTROL NEGATIVO

AC
Tº TIEMPO Tº TIEMPO
MEDIOS CEPA
M
(ºC) (horas) (ºC) (horas)

R
Agar Cetrimide Pseudomona

FA
aeruginosa. 30 a 35 24 30 a 35 24
DE
Agar Plate Count ATCC 9027

CA
Agar Manitol salado

TE
Caldo Digerido de Staphylococcus

IO
caseína y soja Aureus 30 a 35 24 30 a 35 24

BL
ATCC 6538
BI
Agar Digerido de
caseína y soja.
Agar MacConkey Escherichia coli 30 a 35 30 a 35
24 24
Caldo MacConkey ATCC 8739 42 a 44 42 a 44
17
CONTROL POSITIVO CONTROL NEGATIVO

TIEMPO TIEMPO
Tº Tº
MEDIOS CEPA (Horas/Días (Horas/Días
(ºC) (ºC)
) )
Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato
Salmonella thyphi
Caldo Rappaport ATCC 14028 30 a 35 24 30 a 35 24
vassiliadis para
enriquecimiento de
A
IC
salmonella.
M
Staphylococcus
Agar Antibiótico
UI
epidermidis 30 a 35 24 30 a 35 24
Q
Nº 11
ATCC 12228
O
Agar sabouraud BI
Candida albicans 20 a 25 5-7 20 a 25 5 -7
Y
Dextrosa
IA
AC
POE: CC-MB.020: MANEJO Y MANTENIMIENTO DE CEPAS PATRONES.7

R M
FA
Garantizar la conservación y el mantenimiento de las cepas a utilizarse en los controles

DE
Microbiológicos a fin de garantizar los resultados obtenidos cuando se requiera su uso.

CA
Se aplica a toda la colección de cepas utilizadas en el área de microbiología del

TE
departamento de control de calidad

IO
BL
 Cepa: Cultivo puro de un microorganismo, clasificado y tipificado, con

BI
características morfológicas y bioquímicas constantes con código ATCC.

 ATCC: American Type Cultura Collection (Organización Estadounidense
encargada principalmente del mantenimiento de cultivos puros, auténtico de
bacterias y otros microorganismos: levaduras, mohos, protozoos, virus y
ricketsias).
18
 Cepa stock: Representan el verdadero banco de cepas, serán mantenidos en un

sistema cerrado de conservación minimizando su actividad genética y
fisiológica. Lo constituyen las cepas originales.
 Cepas de trabajo diario: Los cultivos control para el trabajo diario, son una
forma conveniente para realizar el control de calidad de pruebas de uso
frecuente.
Cepas utilizadas:
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228
Pseudomona aeruginosa ATCC 9027
A
IC
Escherichia coli ATCC 8739
M
Bacillus subtilis ATCC 6633
UI
Q
Salmonella typhimurium ATCC 14028
O
Candida albicans ATCC 10231
BI
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404
Y
IA
AC
Las cepas utilizadas para los controles microbiológicos serán cepas certificadas tipo
M
ATCC, estas se encuentran ubicadas en condiciones ambientales controladas en el área

R
de microbiología (Refrigeración de 2 a 8ºC).

FA
Se recepcionará cepas stocks pertenecientes a la 2da generación dependiendo de su

DE
disponibilidad.
CA
TE
 Reconstitución del cultivo de referencia:

IO
1. Retirar la cinta blanca de seguridad del tubo contenedor de los sachets

BL
(Kwik-Stik).
BI
2. Abrir un sachet y retirar el dispositivo de color naranja donde se

encuentra el hisopo de inoculación.
3. Retirar la etiqueta de seguridad del dispositivo. Presionar la parte
superior del dispositivo hasta emerger el fluido hidratante
4. Abrir el dispositivo y retirar el hisopo de inoculación, cultivar por
agotamiento en una placa de agar no selectivo Agar digerido de caseína y
soja (TSA), excepto para las cepas Candida albicans, Aspergillus
19
brasiliensis en las que se empleará Agar Sabouraud (AS) y para la cepa

de Staphylococcus epidermidis se utilizará Agar antibiótico N° 11.
 Reconstituido el cultivo de referencia, se obtiene el cultivo operativo mensual
(2do pasaje) “placa de granulación”.
 La placa de granulación será rotulada con el nombre de la cepa madre, N°
ATCC, N° de lote de cepa, código de cultivo y la fecha de reconstitución.
Incubar por 24 horas a una temperatura de 30 - 35 °C; excepto las cepas de
hongos y levaduras que serán incubadas por un periodo  5 días a una
temperatura de 20 a 25 °C, registrar en el formato F-CC.021 V2 “Control de
cepas patrón” .
A
IC
 Evidenciado el crecimiento en la placa de granulación, realizar subcultivo
M
semanal a una placa de agar no selectivo (Agar digerido de caseína y soja -
UI
Q
TSA), excepto para las cepas Candida albicans, Aspergillus brasiliensis en las
O
que se empleará Agar Sabouraud (AS) y para la cepa de Staphylococcus
BI
Y
epidermidis se utilizará Agar antibiótico N° 11. Obteniendo cultivo operativo
IA
semanal (3er pasaje) de la semana 1 y día 1, cada día de la semana crear colonias
AC
de subcultivo de esta placa a una placa nueva. De modo que para cada día de la
R M
semana se tenga una placa en uso (4to pasaje).

FA
 Al finalizar cada semana realizar un nuevo subcultivo de la placa de

DE
granulación. Este procedimiento se continúa hasta culminar las cuatro semanas

CA
(esquema 1); registrar en el formato F-CC.151 “CONTROL DE USO DE

TE
CEPAS”.
IO
 Las placas serán rotuladas con el nombre de la cepa madre, N° ATCC, N° de

BL
lote de cepa, código de cultivo, fecha de repique, número de pasaje y número de

BI
placa correspondiente a cada semana en uso. Incubar por 24 horas a una

temperatura de 30 - 35 °C; excepto las cepas de hongos y levaduras que serán
incubadas por un periodo  5 días a una temperatura de 20 a 25 °C.
 Las cepas serán conservada a una temperatura de refrigeración de 2 a 8 °C y a la
vez eliminar las cepas pertenecientes al repique anterior, según POE: CC-
MB.003 “LIMPIEZA DE MATERIAL CONTAMINADO” por esterilización de
calor húmedo a 121° por media hora.
20
 Realizar el subcultivo el día anterior al ensayo de tal forma que permita su

disponibilidad al día siguiente.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
POE: CC-MB.021: VERIFICACIÓN Y PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO DE LOS

MEDIOS65,8
TE
IO
Establecer el procedimiento adecuado para verificar que los diferentes medios de

BL
cultivo utilizados en el área de microbiología cumplan con la promoción de crecimiento

BI
para investigación de bacterias, levaduras y hongos.
Se aplica a todos los medios de cultivo.
Promoción de crecimiento: Es la capacidad de los medios de cultivo de promover y

evidenciar el crecimiento de los microorganismos sembrados en ellos. Todo lote de
medio de cultivo debe cumplir el test de promoción de crecimiento.
21
 Medio líquido: Inocular una porción del medio apropiado con un número
pequeño (no más de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la
temperatura y tiempo especificado. Se produce un crecimiento claramente
visible de microorganismos comparable al obtenido anteriormente con una
partida de medio analizada y aprobada anteriormente.
 Medio sólido: Inocula cada una de las placas con un número pequeño (no más
de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura y tiempo
especificado. Se produce un crecimiento de microorganismos comparable al
obtenido anteriormente con una partida de medio analizada y aprobada
previamente.
A
IC
Preparación del inóculo:
M
UI
Q
1. Repicar la cepa en tubo inclinado de TSA de no más de 24 horas, preparar una
O
BI
suspensión con solución amortiguadora de cloruro de sodio – peptona de pH: 7.0
Y
solución amortiguadora de fosfato de pH: 7.2; para suspender esporas de

IA
AC
Aspergillus brasiliensis se puede añadir 0.05% de polisorbato 80 al buffer. Usar

M
las suspensiones dentro de las 24 horas, si se almacenan a una temperatura de

R
2ºC a 8ºC.
FA
2. A partir de esta solución madre de microorganismos, hacer diluciones.

DE
3. Prever 10 tubos conteniendo 9.0 mL de solución amortiguada de fosfato de pH:

CA
7.2.
TE
4. Añadir 1.0 mL de la solución madre al primer tubo que corresponde la dilución

IO
1: 10 (I)….10-1.
BL
5. De (I) transferir 1mL al segundo tubo que contiene 9 mL solución amortiguada

BI
de fosfato de pH: 7.2. Dilución 1:100 (II)…..10-2.

6. De (II) transferir 1 mL a un tubo que contiene 9 mL solución amortiguada de
fosfato de pH: 7.2. Dilución 1:1000 (III)…10 -3.
7. En forma continua realizar las diluciones hasta llegar a la dilución 10-10.
8. De las diluciones seriadas transferir por duplicado 1 mL a placas petri y
adicionar entre 15 a 20 mL, aproximadamente, de Agar digerido caseína y soja e
incubar a una temperatura de 30° a 35°C por un periodo de 18 – 24 horas.
22
9. De las diluciones seriadas de la cepa Candida albicans, transferir por duplicado

1 mL a placas petri y adicionar entre 15 a 20 mL, aproximadamente, de Agar
sabouraud dextrosa e incubar a una temperatura de 20° a 25°C por un periodo de
48 – 72 horas.
10. De las diluciones seriadas de la cepa Aspergillus brasiliensis, transferir por
duplicado 1 mL a placas petri y adicionar entre 15 a 20 mL, aproximadamente,
de Agar sabouraud dextrosa e incubar a una temperatura de 20° a 25°C por un
periodo de 5 – 7 días, o hasta alcanzar una buena esporulación.
11. Usar la dilución en la que se obtengan un recuento entre 10 a 100 ufc/mL.
Guardar la batería de diluciones en la refrigeradora de 2º – 8ºC.
A
Registrar la dilución y las ufc/mL en el formato F-CC.140 “Registro De
IC
M
Promoción De Crecimiento” .
UI
Q
 Medio de cultivo Agar digerido de caseína y soja es de amplio
O
espectro:
BI
Y
IA
Microorganismo N° ATCC
AC
Bacillus subtilis 6633

R M
Pseudomonas aeruginosa 9027

FA
Staphylococcus aureus 6538

DE
CA
- Transferir a placas 1 mL de la suspensión que se obtenga un recuentro entre 10

TE
a 100 ufc/mL.
IO
- Añadir de 15 a 20 mL de cultivo Agar digerido de caseína y soja

BL
- Homogeneizar la mezcla haciendo movimientos circulares.

BI
- Dejar solidificar los medios de cultivo inoculados a temperatura ambiente.

- Incubar a una temperatura de 30º C a 35°C, durante un periodo  3 días.
- Observar crecimiento de colonias.
23
 Medio de cultivo Agar Saboraud Dextrosa al 4%:
Candida albicans 10231
Aspergillus brasiliensis 16404

a 100 ufc/ml.
- Añadir de 15 a 20 mL de agar saboraud dextrosa al 4%.
A
IC
M
- Incubar a una temperatura de 20º C a 25ºC, durante un periodo  5 días.
UI
Q
O
BI
 Medio de cultivo Agar Plate count:
Y
IA
AC
R M

FA
Escherichia coli 8739

DE

CA
TE

IO
a 100 ufc/mL.
BL
- Añadir de 15 a 20 mL de agar plate count.

BI

- Incubar a una temperatura de 30º C a 35°C, durante un periodo  3 días.
24
 Medio de cultivo Caldo digerido de caseína y soja de Enriquecimiento:
Pseudomonas aeruginosa 9027
- Transferir 1mL de la de la suspensión que se obtenga un recuentro entre 10 a

100 ufc/mL a frascos que contengan 9mL Caldo digerido de caseína y soja.
- Incubar a una temperatura de 30º C a 35ºC, durante un periodo  3 días.
A
IC
- Observar que todos los caldos de cultivo presenten turbidez.
M
UI
Q
 Medio de cultivo caldo Mc Conkey:
O
BI
Y
IA
AC

M

R
FA
- Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100

DE
ufc/ml, a frascos que contengan 9mL caldo Mc Conkey.

CA
- Incubar de 42º C a 44º C durante un periodo de 24 a 48 horas.

TE
- Observar que los frascos inoculados con la cepa de E. coli presenten turbidez
IO
y los frascos con inoculo de Staphylococcus aureus no presenten turbidez.

BL
BI
 Medio de cultivo Caldo Rappaport – Vassiliadis y caldo tetrationato.
Salmonella typhimurium 14028
25

ufc/ml, a frascos que contengan 9mL Caldo Rappaport-Vassiliadis.
- Incubar de 30° C a 35° C durante un periodo de 18 a 24 horas.
- Observar que los frascos inoculados con la cepa de Salmonella typhimurium
presenten turbidez y los frascos con inoculo de Staphylococcus aureus no
presenten turbidez.
 Medio de cultivo Agar Mc Conkey.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
ufc/ml, sembrar por extensión en placa con agar Mc Conkey.
Y
IA
- Incubar la placa de 30º C a 35ºC durante un periodo de 18 a 72 horas.

AC
- Características de las colonias:

M
 Escherichia coli: Colonias de color rojo a rosado y pueden tener una

R
FA
zona de bilis precipitada alrededor.

DE
 Medio de cultivo Agar Xilosa Lisina Desoxicolato:

CA
TE
IO
Salmonella typhimurium 14028

BL
BI

ufc/ml, sembrar por extensión en placa con agar Xilosa Lisina Desoxicolato.
- Incubar de 30º C a 35º C durante un periodo de 18 a 48 horas.
- Característica de las colonias:
 Salmonella typhimurium: Colonias de color rojo, con o sin centro negro.
Bacilos gram negativo.
26
 Medio de Cultivo de Agar Manitol salado:

ufc/ml, sembrar por extensión en placa con agar Manitol salado.
- Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de 18 a 72 horas.
A
IC
 Staphylococcus aureus: Colonias de color amarillo con zonas amarillas.
M
UI
 Escherichia coli: No hay crecimiento de colonias, debido al potente efecto
Q
O
inhibidor de este medio.
BI
Y
 Medio de cultivo Agar Antibiótico N°11

IA
AC
M
R
FA
Staphylococcus epidermidis 12228

DE
- Transferir a placas 1 mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10

CA
TE
a 100 ufc/ml.
- Añadir de 15 a 20 mL de agar antibiótico N°11
IO
BL

BI

- Incubar a una temperatura de 30º C a 35° C, durante un periodo de 18 a 24
horas.
27
 Medio de cultivo Agar Cetrimide:
E. coli 8739
Pseudomona aeruginosa 9027
-
ufc/ml sembrar por extensión en placa con Agar Cetrimide.
- Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de18 a 72 horas.
A
 Pseudomonas aeruginosa: Generalmente son de color verde presencia de
IC
M
fluorescencia verdosa a la luz ultravioleta.
UI
 Escherichia coli: Ausencia o presencia de escasas colonias.
Q
O
BI
Y
 Medio de cultivo Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa:

IA
AC
R M
E. coli 8739
FA

DE
CA
- Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml

TE
sembrar por extensión en placa con agar Violeta Rojo Bilis Glucosa.
IO
- Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de18 a 72 horas.

BL

BI
 Pseudomonas aeruginosa: Colonias incoloras.

 Escherichia coli: Colonias de color rojo purpura con halo de precipitación
rojizo.
28
 Medio de cultivo Caldo Mossel para Enriquecimiento de

Enterobacterias:
E. coli 8739

ufc/ml, a frascos que contengan 9mL de Caldo Mossel para Enriquecimiento
de Enterobacterias.
A
- Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de 18 a 72 horas.
IC
M
- Observar que los frascos inoculados con la cepa de E. coli y Pseudomona
UI
Q
aeruginosa presenten turbidez y los frascos con inoculo de Staphylococcus
O
aureus no presenten turbidez. BI
Y
IA
Resultados:
AC
 Para medios sólidos ensayados, el crecimiento obtenido no debe ser

R M
menor al 70% a partir del valor calculado para un inoculo

FA
estandarizado.
DE
 Para medios líquidos observa un crecimiento claramente visible de

CA
microorganismos (turbidez).
TE
IO
POE: CC-MB.001: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE AMBIENTES 3

BL
Es de suma importancia llevar un control periódico de los ambientes donde se lleva a

BI
cabo la manufactura de los productos farmacéuticos.

El control de ambientes se realiza por el método de exposición de placas.
El control se realizará en dos formas:
 En área ocupada con personal y máquinas operativas.
 En área desocupada sin personal y con máquinas no operativas.
29
Se procede a preparar y autoclavar los medios de cultivo TSA. Una vez autoclavados
dejarlos enfriar hasta 45ºC. En condiciones asépticas y en el área de microbiología
verter 15mL del agar en placas estériles previamente rotuladas con el nombre del agar.
Dejar enfriar y proceder a realizar los controles negativos.
Retirar las placas y revisar que no haya ningún tipo de crecimiento, de ser así descartar
la placa.
El responsable del muestreo ingresa a las áreas a controlar siguiendo estrictamente los
flujos de ingreso y salida en cumplimiento de las instrucciones establecidas en cada
área.
A
El responsable del muestreo hace uso del plano respectivo para ubicar los puntos en el
IC
M
área a controlar, seguidamente procede a rotular las placas indicando fecha de
UI
exposición, área, ubicación de la placa en el plano, nombre del personal que se
Q
O
encuentra en el área laborando, si el área se encuentra vacía se rotula en las condiciones
BI
que se encuentre.
Y
IA
Colocar las placas cerradas en cada punto de control. Levantar casi simultáneamente la
AC
tapa de las placas y exponerlas por 60 minutos.

R M
FA
Transcurrido el tiempo de exposición el responsable del muestreo tapa las placas, las
DE
invierte y ubica en las bandejas de muestreo para su transporte adecuado al área de

Microbiología.
CA
TE
En el área de microbiología se incubara las placas invertidos por 48-72 horas de 30

IO
35 °C para recuento de microorganismos mesófilos viables.

BL
BI
Incubar las placas a 20 - 25°C por 5-7 días para recuento de hongos y levaduras.
Al cabo de este período de tiempo realizar el conteo de ufc por punto de control.
30
3
POE: CC-MB.008: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIE
Medir eficientemente mediante la prueba de hisopado, los niveles bacterianos, de hongos y

levaduras en superficies lisas e irregulares.
Se designa previamente el área y la superficie que va a ser controlada. Según los puntos
establecidos en cada área de producción.
De acuerdo a la zona, equipo a muestrear se escogerá la plantilla, que puede ser: de

10x10; 5 x 5; 2 x 2. Se coge la plantilla de acero inoxidable previamente esterilizada.
Se coloca en la superficie. Con un hisopo estéril embebido en 10 mL de solución
amortiguadora buffer fosfato PH 7,2.se hisopa toda la superficie delimitada teniendo
A
IC
cuidado de no dejar ningún espacio sin hisopar.
M
UI
Se procede al hisopado en forma horizontal, luego vertical y finalmente diagonal,
Q
teniendo en cuenta de cubrir toda la superficie.
O
BI
Inmediatamente introducir el hisopo en el tubo de prueba que contiene los 10 mL de
Y
solución amortiguadora buffer fosfato PH 7,2, tapar y agitar suavemente teniendo
IA
cuidado de no tocar el tapón del tubo.

AC
En el área de microbiología se procede a sembrar por el método de incorporación 1 mL

R M
de la solución en una placa petri previamente rotulada con el nombre del medio, fecha
FA
y zona de control.
DE
Rápidamente se añade aproximadamente 15 mL de agar TSA licuado a 45ºC (para

CA
recuento de mesófilos aerobios viables).

TE
Se homogeniza la placa con 4 movimientos rotatorios en sentido horario, antihorario,

IO
de arriba a abajo y de abajo a arriba.

BL
Se espera que solidifique el agar y se incuba la placa invertida a 30 - 35 ºC por 48 – 72

BI
horas.
Se repite el mismo procedimiento con 1 mL de muestra y se añade Agar Sabouraud
licuado a 45ºC (para recuento de hongos y levaduras) se incuba a 20 - 25º C por 5 – 7
días.
Alternativamente se puede trabajar con TSA para recuento de mesófilos aerobios
viables, hongos y levaduras, para lo cual, se debe rotular la placa como TSA/AS y se
31
deja incubar por 48 – 72 horas de 30 - 35ºC, tiempo después del cual se pasa a incubar
a 20 – 25º C por 5 a 7 días.
Transcurrido el tiempo de incubación, se procede a realizar el recuento de las ufc.
Se realizan los cálculos y expresan los resultados en ufc/cm2.
Los resultados son reportados en el formato correspondiente de cada área.
POE: CC-MB.013: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE PERSONAL3
Establecer y desarrollar los lineamientos para un control adecuado y oportuno del

personal en las distintas áreas y en cada uno de los procesos de la producción.
A
IC
Preparar y autoclavar tubos conteniendo 10 mL de solución amortiguadora buffer PH
M
UI
7,2.
Q
Previo al control del personal y en condiciones asépticas introducir los hisopos en los
O
tubos de modo que éstos se mantengan sumergidos en la solución. BI
Y
Definir el área sometida a control de acuerdo al programa para determinar las áreas
IA
donde realizar el control del personal.

AC
Definir al personal y las zonas a controlar de éstas dependiendo del trabajo que
R M
realizan en el área:
FA
- Manos: con o sin guantes

DE
- Cabellos: si se evidenciara cabellos sueltos.

CA
- Uniforme: puños, parte delantera.

TE
Rotular los tubos con el nombre del personal y la zona controlada.

IO
Proceder a realizar el hisopado de la zona elegida e introducir dicho hisopo en el tubo

BL
que contiene solución amortiguadora buffer fosfato PH 7,2.; dejar reposar por 15
BI
minutos.
En el área de microbiología y en condiciones asépticas, tomar el hisopo y sembrar en
medios selectivos:
Agar Mac Conkey para determinación de Coliformes.
Agar Manitol Salado para determinación de Staphylococcus aureus y proceder a
incubar de 30 -35 ºC por 24 - 48 horas.
32
Asimismo, se procede a sembrar por el método de incorporación 1 mL de la solución

en una placa petri previamente rotulada con el nombre del medio, fecha y zona de
control.
Rápidamente se añade aproximadamente 15 mL de agar TSA y AS por separado.
Se homogeniza la placa con 4 movimientos rotatorios en sentido horario, antihorario,
de arriba hacia abajo y hacia los costados.
Se espera que el agar solidifique y se incuba la placa invertida de la siguiente manera:
Las placas con TSA de 30º - 35º C por 48 – 72 horas (Recuento de mesófilos aerobios
viables)
Las placas con AS 20º -25º C por 5 – 7 días (Recuento de hongos y levaduras)
A
IC
M
Alternativamente se puede trabajar sólo con TSA para recuento de mesófilos aerobios
UI
viables, hongos y levaduras, para lo cual, se debe rotular la placa como TSA/AS,
Q
O
sembrar y dejar incubar por 48 – 72 horas de 30º - 35ºC, tiempo después del cual se
BI
pasa a incubar de 20º -25ºC por 5 a 7 días.
Y
Al cabo de este período de tiempo, realizar el conteo y expresar los resultados en

IA
AC
ufc/zona en el que se realizó el control del personal (mano, uniforme, etc., según
M
corresponda).
R
FA
DE
CC-MAMB-001: ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUA PURIFICADA 9

CA
La presencia de bacterias en el agua destinada a usarse en la industria farmacéutica es

TE
un riesgo latente que de estar presente puede ser la causa de una serie de problemas de
IO
contaminación en los productos elaborados, por lo que se ha visto la necesidad de

BL
BI
realizar análisis microbiológicos de rutina a partir de diversas procedencias (agua

potable, purificada, destilada).
El método empleado es de filtración por membrana, este método se basa en hacer pasar
la muestra de agua problema a través de un filtro de membrana microporoso en cuya
superficie quedan retenidos los microorganismos. las membranas utilizadas tienen un
tamaño de poro de 0,45 m (la mayoría de los microorganismos a analizar tienen un
diámetro superior a 0,45 m).
33
Luego de esto se incuba la membrana en el medio de cultivo adecuado, a la

temperatura y por el tiempo especificado, para posteriormente contar de forma directa
las colonias sobre la superficie de la membrana.
Análisis propiamente dicho:
-Recuento de Mesófilos Aerobios Viables (Método de Filtración de Membrana)

En condiciones asépticas, armar el equipo de filtración teniendo en cuenta que la
membrana filtrante colocada sea de 0,45 m y cuadriculada para favorecer el recuento.
Filtrar 1 mL de agua purificada a ensayar, agitar suavemente el portafiltro mientras se
A
filtra.
IC
M
Lavar las paredes del portafiltro con 30 mL de solución tamponada estéril, repetir el
UI
lavado dos veces, en el caso de usar el Sistema Microfil no se necesita enjuagar con
Q
O
agua tamponada estéril. BI
Y
Desconectar el vacío y retirar el embudo.
IA
AC
Con una pinza estéril retirar la membrana filtrante y colocarla de manera equidistante
M
en una placa que contenga Agar Plate Count, con la cuadrícula hacia arriba.
R
FA
Invertir la placa e incubar a 30 – 35 C en la incubadora adecuada por 48 – 72 horas.

DE
Cumplido el tiempo, con ayuda de una lupa se procede al recuento de colonias

CA
presentes y se expresa el resultado en ufc/mL o en ufc/100mL.El Límite es <100

TE
ufc/mL
IO
BL
-Análisis de Patógenos: Coliformes y Pseudomona aeruginosa (Método de Filtración

BI
de Membrana)
En condiciones asépticas, armar el equipo de filtración teniendo en cuenta que la

membrana filtrante colocada sea de 0,45 m y con bordes hidrofóbicos.
Se añade al embudo primero 50 mL de solución tamponada estéril y, encima de ella se

vierte 1 mL de agua a filtrar. Agitar suavemente el portafiltro mientras se filtra.
34
Desconectar el vacío y retirar el embudo.
Con una pinza estéril retirar la membrana filtrante y colocarla de manera equidistante
en una placa que contenga Agar MacConkey para Coliformes o Agar Cetrimide para
Pseudomonas según sea el caso.
Invertir la placa e incubar a 30 – 35 ºC en una incubadora adecuada por 48 – 72 horas.
Cumplido el tiempo, se observa las características morfológicas de las ufc en el medio

especificado. La especificación es ausencia para estos microorganismos.
A
POE: CC-MAMB-002: LÍMITE MICROBIANO Y DETERMINACIÓN DE
IC
M
PATÓGENOS.6,8
UI
Q
O
Determinar principalmente si una sustancia farmacéutica o producto farmacéutico
BI
cumple con las especificaciones establecidas de calidad microbiológica.
Y
IA
Asimismo determinar el número de microorganismos aerobios, hongos filamentosos y

AC
levaduras; especies patógenas presentes en productos farmacéuticos semi-terminado,

M
terminados y materias primas

R
FA
El método para preparar la muestra depende de las características físicas del producto a
DE
examinar.
CA
PRODUCTOS SOLUBLES EN AGUA (SÓLIDOS Y LÍQUIDOS MISCIBLES):

TE
Disolver o diluir las muestras del producto a examinar (sólidos, jarabes, suspensiones,
IO
BL
soluciones con vehículos acuosos) directamente en Solución amortiguadora fosfato pH

BI
7,2 o en Caldo digerido de caseína. Preparar diluciones adicionales, con el diluyente

seleccionado si fuera necesario. Para el caso de muestras que necesiten neutralizar los
preservantes, se añadirá al diluyente seleccionado o al medio, preferentemente antes de
la esterilización lo siguiente: 5g de Lecitina ó 4g de polisorbato 80 por cada 100mL.
Si el vehículo de las soluciones orales es alcohólico se deberá tener en cuenta que el

contenido de alcohol no sea mayor de 30% de lo contrario se deberá realizar diluciones
35
en solución amortiguadora fosfato pH 7,2 o en Caldo digerido de caseína hasta alcanzar

una menor concentración de alcohol.
PRODUCTOS NO GRASOS INSOLUBLES EN AGUA: Se puede añadir a la muestra

una cantidad mínima de agente tensoactivo estéril, tal como 1 g de Polisorbato 80/Litro,
para favorecer la suspensión de sustancias poco humectables, el emulsificante sólo se
utiliza en la dilución inicial.
Hacer diluciones si fuera necesario en solución amortiguadora fosfato pH 7,2 o en
Caldo digerido de caseína hasta que la muestra pueda ser pipeteada.
PRODUCTOS GRASOS (UNGÜENTOS, CREMAS Y CERAS): Disolver con una
A
cantidad mínima necesaria de polisorbato 80 estéril (Tween 80) u otro reactivo
IC
M
tensoactivo estéril no inhibitorio. La cantidad de emulsificante a utilizar es 5g de
UI
polisorbato 80 para 100 mL; calentar si fuera necesario, a no más de 40º o, en casos
Q
O
excepcionales, a no más de 45° en baño maría, mezclar cuidadosamente y si fuera
BI
necesario, mantener la temperatura en un baño de agua. Agregar una cantidad suficiente
Y
IA
del diluyente seleccionado precalentado para obtener una dilución 1 en 10 del producto
AC
original. Mezclar cuidadosamente, manteniendo la temperatura durante el menor tiempo

M
necesario para lo formación de una emulsión. Se puede preparar una serie de diluciones
R
FA
decimales adicionales empleando el diluyente seleccionado que contenga una

DE
concentración adecuada de polisorbato 80 estéril u otro reactivo tensoactivo estéril no

inhibitorio.
CA
TE
LIMITE MICROBIANO
IO
BL
Método Recuento en Placa

BI
Aplicar los métodos de recuento en placa al menos por duplicado y usar el recuento
medio del resultado.
36
Procedimiento preparación de muestra
Tomando en cuenta las consideraciones generales por tipo de muestras establecidas y

para el producto terminado se prepara una mezcla de 3 porciones correspondiente a las
muestras de inicio, medio y final por día de envasado y/o blisteado para finalmente
obtener una cantidad de 10 mL o 10g.
Transferir 10g ó 10mL de muestra a un balón que contiene 90 mL de diluyente

seleccionado, (solución amortiguadora de cloruro de sodio-peptona pH 7,0, Solución
amortiguadora fosfato pH 7,2 o en Caldo digerido de caseína y soja) obteniéndose la
dilución 10-1, mezclar la muestra.
A
IC
En un tubo que contiene 9 mL de diluyente seleccionado añadir 1 mL de la dilución
M
10-1 obteniéndose de esta manera la dilución 10 -2.
UI
Q
O
Procedimiento del método de vertido en placa BI
Y
Rotular 8 placas (4 placas para TSA y 4 para AS) con el nombre del producto y/o
IA
materia prima, lote, dilución, fecha y el lote asignado al agar utilizado.

AC
M
Verter a la placa 1mL de la dilución 10 -1 en cada una de las 4 placas (2 para TSA y 2
R
FA
para AS).
DE
Del tubo conteniendo la dilución 10 -2 transferir 1 mL en 4 placas previamente

CA
rotuladas (2 para TSA y 2 para AS).

TE
Agrupar las placas que llevaran el agar TSA y AS

IO
BL
Añadir entre 15 mL a 20mL de agar TSA y AS según corresponda manteniendo la

BI
temperatura de ambos medios a no más de 45º, homogeneizar el contenido con

movimientos rotatorios en sentido antihorario (4 veces), sentido horario (4 veces), de
arriba hacia abajo (4 veces), hacia los costados (4 veces), dejar que solidifique.
Se incuba las placas invertidas de la siguiente manera:
Las placas con TSA a una temperatura entre 30º y 35º durante un periodo de 3 a 5
días (Recuento total de microorganismos aerobios)
37
Las placas con AS a una temperatura entre 20º y 25º durante un periodo de 5 a 7 días
(Recuento total de hongos filamentosos y levaduras)
Transcurrido el tiempo de incubación se procede a observar las placas y escoger las

placas correspondientes a una dilución determinada y que muestren el mayor número
de colonias, menor de 250 para el recuento total de microorganismos aerobios y 50
para el recuento total combinado de hongos y levaduras, realizar el recuento de ufc
desarrolladas con la ayuda de un contador de colonias o una lupa. Tomar la media
aritmética de los recuentos por cada medio de cultivo.
Una vez realizado el recuento se procede a hacer los cálculos en ufc/mL o ufc/g; del
A
producto para ello se multiplica la cantidad de ufc obtenidas por placa y se
IC
M
multiplica por el inverso de la dilución, es decir:
UI
Q
DILUCIÓN 10-1: No de ufc x 10
O
BI
DILUCIÓN 10-2: No de ufc x 100
Y
IA
AC
M
Interpretación de los Resultados

R
FA
El recuento total de microorganismos aerobios se considera equivalente al número de

DE
ufc encontrado usando TSA; si se detectan colonias de hongos en este medio

CA
contarlas como parte del recuento total de microorganismos aerobios.

TE
El recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras se considera

IO
BL
equivalente al número de ufc encontrado empleando AS; si se detectan colonias de

BI
bacterias en este medio contarlas como parte del recuento total combinado de hongos
filamentosos y levaduras.
Cuando el recuento total combinado de hongos filamentosos exceda el criterio de

aceptación debido al crecimiento bacteriano, se puede usar Agar sabouraud dextrosa
que contenga antibióticos.
38
Cuando se indica un criterio de aceptación para la calidad microbiológica, éste se

interpreta de la siguiente manera:
- 101 ufc: recuento máximo aceptable =20;

y así sucesivamente.
DETERMINACIÓN DE PATÓGENOS: Identificación de Escherichia coli,
A
Salmonella, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans y
IC
Bacterias Gram-Negativas Tolerantes a la bilis.
M
UI
Q
Preparación de muestra e incubación previa
O
BI
Inocular 10mL de la solución preparada según lo descrito ítem preparación de
Y
muestra en método recuento en placa en 90mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja
IA
(Caldo TSB), mezclar e incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un periodo
AC
de 18 a 24 horas. Después de transcurrido este tiempo usar este medio para las
R M
pruebas de identificación de patógenos.

FA
DE
Escherichia coli
CA
TE
Selección y subcultivo
IO
Agitar el balón y transferir 1mL del Caldo Digerido de Caseína y Soja a 100mL de
BL
Caldo MacConkey e incubar de 42º a 44º durante un periodo de 24 a 48 horas.

BI
Transcurrido el tiempo Subcultivar (sembrar) en placas conteniendo Agar

MacConkey, y en condiciones asépticas con el mechero encendido, calentar el asa de
siembra hasta la incandescencia, enfriar al aire cerca del mechero, destapar el balón
cerca a la llama del mechero y flamear la boquilla con la llama, introducir el asa de
siembra esterilizada al cultivo líquido, tras tomar la muestra flamear la boquilla del
balón antes de cerrarlo, destapar la placa de Petri, mantener la tapa en la mano
abriéndola sólo lo necesario; con el asa estéril realizar la siembra de agotamiento por
39
estrías sobre la superficie de la placa con el agar especificado, cerrar la placa e

incubar invertida a una temperatura de 30º a 35º durante un periodo de 18 a 72 horas.
Interpretación: El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli.

Esto se confirma mediante las pruebas de identificación.
EL producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias o si los resultados de
las pruebas de identificación son negativos.
Salmonella
A
IC
M
Transferir 0,1mL del Caldo Digerido de Caseína y Soja y transferirlos a un tubo
UI
conteniendo 10mL de Caldo Rappaport-Vassiliadis para Enriquecimiento de
Q
O
Salmonella e incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un periodo de 18 a 24
BI
horas.
Y
IA
Transcurrido el tiempo Subcultivar (sembrar) en placas conteniendo Agar Xilosa

AC
Lisina Desoxicolato y en condiciones asépticas con el mechero encendido, calentar

M
el asa de siembra hasta la incandescencia, enfriar al aire cerca del mechero, destapar
R
FA
el tubo cerca a la llama del mechero y flamear la boquilla con la llama, introducir el
DE
asa de siembra esterilizada al cultivo líquido, tras tomar la muestra flamear la

boquilla del tubo antes de cerrarlo, destapar la placa de Petri, mantener la tapa en la
CA
mano abriéndola sólo lo necesario; con el asa estéril realizar la siembra de

TE
agotamiento por estrías sobre la superficie de la placa con el agar especificado,

IO
BL
cerrar la placa e incubar invertida a una temperatura de 30º a 35º durante un periodo
BI
de 18 a 48 horas.
Interpretación: El crecimiento de colonias bien desarrolladas de color rojo, con o

sin centros negros indica la posible presencia de Salmonella. Esto se confirma
mediante las pruebas de identificación.
EL producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos
o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.
40
Pseudomonas aeruginosa
Transcurrido el tiempo de incubación del Caldo Digerido de Caseína y Soja,
Subcultivar (sembrar) en placa de Agar Cetrimida, y en condiciones asépticas con el
mechero encendido, calentar el asa de siembra hasta la incandescencia, enfriar al aire
cerca del mechero, destapar el balón cerca a la llama del mechero y flamear la
boquilla con la llama, introducir el asa de siembra esterilizada al cultivo líquido, tras
tomar la muestra flamear la boquilla del balón antes de cerrarlo, destapar la placa de
A
IC
Petri, mantener la tapa en la mano abriéndola sólo lo necesario; con el asa estéril
M
realizar la siembra de agotamiento por estrías sobre la superficie de la placa con el
UI
agar especificado, cerrar la placa e incubar invertida a una temperatura de 30º a 35º
Q
O
durante un periodo de 18 a 72 horas. BI
Y
IA
Interpretación: El crecimiento de colonias indica la posible presencia de P.

AC
aeruginosa. Esto se confirma mediante las pruebas de identificación.

M

R
FA
las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.

DE
Staphylococcus aureus
CA
TE
IO
BL
Transcurrido el tiempo de incubación del Caldo Digerido de Caseína y Soja,

BI
Subcultivar (sembrar) en placa de Agar Manitol Salado, y en condiciones asépticas

con el mechero encendido, calentar el asa de siembra hasta la incandescencia, enfriar
al aire cerca del mechero, destapar el balón cerca a la llama del mechero y flamear la
41
durante un periodo de 18 a 72 horas.
Interpretación: El crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas de una

zona amarilla indica la posible presencia de S. aureus. Esto se confirma mediante las
pruebas de identificación.
EL producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos
o si los resultados de las pruebas de identificación confirmatorias son negativos.
Candida albicans
A
IC
Preparación de muestra e incubación previa
M
Inocular 10mL de la solución preparada según lo descrito ítem preparación de
UI
muestra en método recuento en placa en 100mL de Caldo Sabouraud Dextrosa y
Q
O
mezclar. Incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un periodo de 3 a 5 días.
BI
Y
IA
AC
Transcurrido el tiempo de incubación del Caldo Sabouraud Dextrosa, Subcultivar

M
(sembrar) en placa de Agar Sabouraud Dextrosa, y en condiciones asépticas con el

R
FA
mechero encendido, calentar el asa de siembra hasta la incandescencia, enfriar al aire

DE
cerca del mechero, destapar el balón cerca a la llama del mechero y flamear la
CA
TE
IO
BL

BI
durante un periodo de 24 a 48 horas.
Interpretación: El crecimiento de colonias blancas puede indicar la presencia de C.

albicans. Esto se confirma mediante las pruebas de identificación.
las pruebas de identificación confirmatorias resultan negativos.
42
Bacterias Gram-Negativas Tolerantes a la bilis
Procedimiento preparación de muestra e incubación previa

Tomando en cuenta las consideraciones generales por tipo de muestras establecidas
en ítem 3 y para el producto terminado se prepara una mezcla de 3 porciones
correspondiente a las muestras de inicio, medio y final por día de envasado y/o
blisteado para finalmente obtener una cantidad de 10 mL o 10g.
A
Transferir 10g de muestra a un balón que contiene 10 mL de Caldo digerido de
IC
caseína y soja, mezclar e incubar a una temperatura de 20° a 25° durante un periodo
M
UI
suficiente para resucitar las bacterias pero que no estimule la multiplicación de los
Q
organismos (por lo general 2 horas pero no más de 5 horas).
O
BI
Y
IA
Prueba de ausencia Inocular 1mL de la preparación de muestra e incubación previa

AC
en 9mL de Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias, mezclar. Incubar

M
a una temperatura de 30º a 35º durante un período de 24 a 48 horas.

R
FA
DE
Transcurrido el tiempo de incubación del Caldo Mossel para enriquecimiento de
CA
Enterobacterias, Subcultivar (sembrar) en placa de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa,

TE
e incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un periodo de 18 a 24 horas.

IO
BL
Interpretación: EL producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias.

BI
Prueba cuantitativa
Transferir 1mL de la preparación muestra e incubación previa a un tubo que contiene
9 mL Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias, mezclar se obtiene una
cantidad 0,1g o 0,1mL del producto a examinar. En un tubo que contiene 9 mL de
Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias, añadir 1 mL de la dilución
43
anterior obteniéndose de esta manera la cantidad de 0,01g o 0,01mL del producto a

examinar. En un tubo que contiene 9 mL de Caldo Mossel para enriquecimiento de
Enterobacterias, añadir 1 mL de la dilución anterior obteniéndose de esta manera la
cantidad de 0,001g o 0,001mL del producto a examinar. Incubar a una temperatura
de 30º a 35º durante un período de 24 a 48 horas.
Transcurrido el tiempo de incubación del Caldo Mossel para enriquecimiento de
Enterobacterias, Subcultivar (sembrar) en placa de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa,
calentar el asa de siembra hasta la incandescencia, enfriar al aire cerca del mechero,
destapar el tubo cerca a la llama del mechero y flamear la boquilla con la llama,
introducir el asa de siembra esterilizada al cultivo líquido, tras tomar la muestra
A
IC
flamear la boquilla del tubo antes de cerrarlo, destapar la placa de Petri, mantener la
M
tapa en la mano abriéndola sólo lo necesario; con el asa estéril realizar la siembra de
UI
agotamiento por estrías sobre la superficie de la placa con el agar especificado,
Q
O
cerrar la placa e incubar a una temperatura de 30º a 35º durante un periodo de 18 a
BI
24 horas.
Y
IA
Interpretación: EL crecimiento de colonias constituye un resultado positivo. Indicar

AC
la menor cantidad del producto que produce un resultado positivo y la mayor

M
cantidad que produce un resultado negativo. Determinar la cantidad probable de

R
FA
bacterias a partir de la tabla 2.

DE
Tabla N°2 Interpretación de Resultados

CA
Resultados para cada cantidad del producto Cantidad probable de

TE
Bacterias por g o mL
IO
0,1g o 0,1mL 0,01g o 0,01mL 0,001g o 0,001mL del producto

BL
+ + + Más de 103
BI
+ + - Menos de 103 y más de

102
+ - - Menos de 102 y más de
10
- - - Menos de 10
Leyenda:
+: Positivo
- : Negativo
44
RESULTADOS
Los resultados se reportan por duplicado en el formato F-CC.016 “REPORTE DE
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO”; el original se adjunta al archivo técnico del
producto fabricado, en el caso de materias primas y/o productos provenientes
estudios de estabilidad se entrega al responsable del cada área y la copia es archivada
en el área de microbiología.
CC-EMPT-D-01: VALORACIÓN MICROBIOLÓGICA- METODOLOGÍA
A
ANALÍTICA DE GENTAMICINA .10
IC
M
DOSAJE DE GENTAMICINA
UI
Método Microbiológico: Excavación-Placa-Cultivo
Q
O
Se fundamenta en la difusión del antibiótico a través de una capa de agar solidificado y
BI
contenido en una placa Petri, formando a su alrededor una zona de inhibición del
Y
IA
crecimiento del microorganismo sensible.

AC
Procedimiento:
R M
FA
Preparación de la solución Buffer Fosfato 0,1M pH 8,0 ± 0,1

DE
Disolver con agua 16,73g de fosfato dibásico de potasio y 0,523g de fosfato

CA
monobásico de potasio y enrasar con mismo disolvente hasta 1 000 mL. Ajustar el pH
TE
de ser necesario con ácido fosfórico 18 N o hidróxido de potasio

IO
BL
10 N a pH 8,0 +/- 0,1. Someter a esterilización.

BI
Preparación de la Solución Salina estéril
Disolver 9,0 g de cloruro de sodio en agua para obtener 1000 mL. Someter a
esterilización.
Preparación de la Solución Stock
45
Pesar exactamente un aproximado a 25000 UI de Gentamicina sulfato estándar

(equivalente aproximadamente a 25000/ Pot) en lo posible en una atmósfera de baja
humedad, disolver en buffer fosfato 0,1M pH 8,0 y completar a 25 mL en una fiola de
ese volumen. Esta solución se puede guardar en refrigeración por un mes.
Preparación de la Solución Estándar
Diluir 3mL de la Solución Stock con buffer fosfato 0,1M pH 8,0 en una fiola de 25mL
Disponer estérilmente de una serie de fiolas en la forma siguiente:
Reactivos/Fiolas Nº S1 S2 S3 S4 S5
A
IC
Solución Estándar 32 L 40 L 50,0 L 50 L 63 L
M
UI
Buffer fosfato 0,1M pH 8,0 csp 25 mL csp 25 mL csp 25 mL csp 20 mL csp 20 mL
Q
O
BI
Efectuar las diluciones especificadas en el medio, comenzando con la solución
Y
estándar y luego el buffer fosfato.
IA
AC
M
Preparación de la solución problema

R
FA
Pesar aproximadamente la misma cantidad del estándar en una fiola de 25 mL y diluir

DE
a volumen con solución buffer fosfato 0,1M pH 8,0; de esta solución tomar
CA
volumétricamente 3 mL a una fiola de 25 mL, diluir volumen, luego transferir 50L a

TE
una fiola de 25 mL y diluir a volumen con buffer fosfato 0,1M pH 8,0.

IO
Preparación de la Solución Inóculo

BL
BI
A partir de un cultivo en tubo inclinado de 20-24 horas a 37ºC de la cepa

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, en Agar No 11, se obtiene una suspensión
con 2-3 mL de solución salina estéril.
Diluir esta suspensión con solución salina estéril para obtener 25% de tramitancia a
580 nm de longitud de onda, en un espectrofotómetro UV-VIS.
46
Preparación del Agar inoculado
A cada 100 mL del medio Agar No 11 fundido y mantenido a 45ºC en baño de agua,
se le agrega 100 µL de la suspensión de inóculo. Se agita suavemente el frasco con el
propósito de homogenizar la suspensión.
Preparación de las Placas Petri
- Preparar 18 placas petri estériles.

- Agregar estérilmente en cada placa 21 mL del Agar No 11 fundido y mantenido a
45ºC, dejar solidificar; luego se añade 4 mL de Agar No 11 inoculado y mantenido
a 45ºC procurando cubrir toda la superficie, dejar solidificar.
A
- Esperar que solidifique.
IC
M
- Dejar caer 6 cilindros con ayuda de una pinza estéril en cada placa.
UI
Valoración propiamente dicha
Q
O
BI
- Con una micropipeta incluir en cada cilindro correspondiente, 280L de las
Y
diluciones del estándar.
IA
- Incubar en la estufa entre 35º -37º C en una superficie completamente plana por 18
AC
a 24 horas.
R M
- Luego de la incubación realizar la medición de los diámetros obtenidos en cada

FA
dilución y en la muestra (en mm) con ayuda de un vernier calibrado.

DE
Los halos obtenidos y los cálculos se reportaran en el formato F-CC.015

CA
AGAR No 11 (MEDIO Nº 11 Según USP 39)

TE
IO
Peptona………………………………………………………………....6,0 g
BL
Digesto pancreático de caseína…………………..………................... 4,0 g

BI
Extracto de levadura ………………………..………………………….3,0 g

Extracto de carne ……………………………………………………….1,5 g
Dextrosa ………………………………………………………………1,0 g
Agar……………………………………………………………………..15,0 g
Agua …………………………………………………………………..1000 mL
pH final : 8,3 +/- 0,1
47
IV. PRESENTACIÓN DE RESULTADOS DE LA PRÁCTICAS PRE

PROFESIONALES
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
48
F-CC.013 V2
DEPARTAMENTO DE CONTROL DE CALIDAD

CONTROL DE ESTERILIZACION
PRODUCTO: Medios de cultivo - 1500915

CICLO DE ESTERILIZACION
TEMPERATURA TIEMPO PRESION
121°C 15 minutos 15 psi
CARGA: -
A
FECHA: 11/09/2015 HORA T°/PRESION OPERADOR OBSERVACION
IC
INICIO OPERACIÓN 09:04 24°C / 0 psi
M
LPL -
UI
INICIO DE CICLO 09:22 121°C / 15 psi LPL -
Q
CONTROL DE CICLO 09:26 121°C / 15 psi LPL -
O
BI
FINAL DE CICLO 09:37
Y
121°C / 15 psi LPL -
IA
FINAL DE OPERACIÓN 09:50 40°C / 0 psi LPL -
AC
R M
PRODUCTO: -
FA
CICLO DE ESTERILIZACION
TEMPERATURA TIEMPO PRESION
DE
2 horas -
CA
CARGA: Material de vidrio

TE
FECHA: 11/09/2015 HORA T°/PRESION OPERADOR OBSERVACION

IO
INICIO OPERACIÓN 10:40 13°C HV -

BL
INICIO DE CICLO 12:52 180°C HV -

BI
CONTROL DE CICLO 13:28 180°C HV -

FINAL DE CICLO 14:52 180°C HV -
FINAL DE OPERACIÓN 15:14 52°C HV -
OBSERVACIONES:_____________________________________________________________________
-
_____________________________________________________________________________________
49
F-CC.022
CONTROLES POSITIVOS Y NEGATIVOS
MEDIO DE CULTIVO: Agar digerido de caseína y soja CEPA PATRON: Staphylococcus aureus
ATCC: 6538
TEMPERATURA: 30°C - 35°C TIEMPO DE INCUBACION: 24 horas
FECHA DE RESULTADOS REALIZADO SUPERVISADO

LOTE
PREPARACION CONTROL NEGATIVO FECHA CONTROL POSITIVO FECHA OBS. POR POR
03/07/2015 1400715 Conforme 04/07/2015 Conforme 04/07/2015 - HV -
17/07/2015 1420715 Conforme 18/07/2015 Conforme 18/07/2015 - LPL -
A
IC
M
UI
Q
O
BI
02/10/2015 1531015 Conforme 03/10/2015 Y
Conforme 03/10/2015 - LPL -
IA
AC

M

R
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
50
F-CC.151
AREA DE MICROBIOLOGIA
CONTROL DE USO DE CEPAS PATRON
CEPA: Pseudomona aeruginosa
A
IC
ATCC: 9027 LOTE: 484-
558
M
UI
Q
O
FECHA CODIGO DE MEDIO BIREALIZA REVISAD OBSERVACI
SEMANAL CULTIVO N° DE DO POR: O POR: ÓN
Y
PLACA CULTIVO
IA
2015-07-20 CP-9027-001075 I TSA LPL - -

AC
2015-07-27 CP-9027-001075 II TSA LPL - -

M
2015-08-03 CP-9027-001075 III TSA HV - -

R
FA
2015-08-10 CP-9027-001075 IV TSA LPL - -

DE
2015-08-17 CP-9027-002085 I TSA LPL - -

2015.08-24 CP-9027-002085 II TSA LPL - -
CA
2015-08-31 CP-9027-002085 III TSA HV - -

TE
2015-09-07 CP-9027-002085 IV TSA HV - -

IO
2015-09-14 CP-9027-003095 I TSA HV - -

BL
2015-09-21 CP-9027-003095 II TSA HV - -

BI
2015-09-28 CP-9027-003095 III TSA LPL - -
51
F-CC.140-V2

ÁREA DE MICROBIOLOGÍA
A
IC
REGISTRO DE PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO
M
UI
MEDIO DE CULTIVO: Agar Manitol Salado MARCA: Merck
Q
LOTE DE MEDIO DE CULTIVO DESHIDRATADO: VM643764 FECHA DE EXPIRA: 2017-08-10
LOTE DE MEDIO DE CULTIVO PREPARADO: 1480815
O
PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO (P)
BI
Tiempo/Lectura de crecimiento
DEL INÓCULO Medios sólidos Medio líquidos
Y
Especificación: No menor a 70%
FECHA DE Especificación:
CEPAS Concentracón del control (-) Clasificación del
ENSAYO Dilución de Crecimiento
IA
inóculo(10 a 100 18 h 24 h 48 h 72 h 4 días 5 días % crecimiento
trabajo Recuento en microbiano
UFC/mL) Recuperación Resultado microbiano
( turbidez )*
AC
placa
obtenido
Cepa Staphylococcus aureus
M
Nº Lote 485-221 Abundante (+++)
29/08/2015 10−7 85 UFC/ mL X Conforme 72 UFC/ mL 84,7% Conforme -
Codigo de cultivo CP-6538-002085
R
Nº Placa IV
FA
Cepa Escherichia coli Poco (++)
Nº Lote 483-393
29/08/2015 10−6 92 UFC/ mL X Conforme 76 UFC/ mL 82,6% Conforme -
Codigo de cultivo CP-8739-002085
Nº Placa IV DE Escaso ( + )
Cepa
Nº Lote
No crecimiento ( -
Codigo de cultivo
)
CA
Nº Placa
* Los medios líquidos son adecuados si se produce un crecimiento claramente visible de microorganismos comparable al obtenido anteriormente con una partida de medio previamente analizada y aprobada.
TE
APROBADO x RECHAZADO -
IO
BL
BI
52
F-CC.093-V6
REPORTE DE CONTROL DE AMBIENTES N° 120/15
AREA DE SEMISOLIDOS
METODO DE CONTROL : EXPOSICION DE PLACAS FECHA DE LECTURA DE BACTERIAS : 2015-10-10

FECHA DE ANALISIS : 2015-10-07 FECHA DE LECTURA DE HONGOS : 2015-10-12
A
TIEMPO DE EXPOSICION : 1 hora LOTE DEL MEDIO DE CULTIVO : 1521015
IC
SECCION FABRICACION ENVASADO C A
RECEPCION DE
M INSUMOS
PRODUCTO Área limpia Área limpia
ESCLUSA
MONTACARGAS
LOTE -
UI
-
B
- -
Q
A
OPERARIOS - -
FABRICACION
C
O
- -
SEMI-SOLIDOS
HONGOS BACTERIAS HONGOS BACTERIAS B
BI
D
ESPECIFICACION
CORREDOR
10 ufc/placa 20 ufc/placa 10 ufc/placa 20 ufc/placa C
MAQ
MAQ
A
RESULTADOS A 0 5 0 2
Y
B 0 10 0 1
ENVASADO
IA
C 1 4 0 0 D B
D 0 0 0 0
AC
LAVADERO
B
CORREDOR
A
SECCION RECEPCION DE INSUMOS LAVADERO
M
PRODUCTO Área limpia Área limpia
VESTUARIO
R
LOTE - -
- -
FA
Arriba
OPERARIOS - -
- - DE
HONGOS BACTERIAS HONGOS BACTERIAS Inyectores de Aire
ESPECIFICACION
10 ufc/placa 20 ufc/placa 15 ufc/placa 30 ufc/placa Extractores de Aire
A 1 0 0 0
CA
B 2 6 0 4
RESULTADOS
C 0 12 0 0 OBSERVACIONES : Áreas limpias
TE
D 0 0 0 2
FECHA DE EMISION : 2015-10-12
IO
BL
BI
53
F-CC.017

REPORTE DE ANALISIS MICROBIOLOGICO DE AGUA N°
SOLICITADO POR: Materia Prima
FECHA DE MUESTREO: 15/09/2015 FECHA DE ANALISIS: 15/09/2015
TIPO DE AGUA Purificada
ENSAYOS RESULTADOS
A
CONCLUSION OBSERVACIONES
IC
Mesófilos aero- Recuento Pseudomona
PUNTO DE MUESTREO
bios viables coliformes aeruginosa
M
P38 24 UFC/ mL Ausente Ausente Conforme -
UI
P39 15 UFC/ mL Ausente Ausente Conforme -
Q
P40 18UFC/ mL Ausente Ausente Conforme -
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
ESPECIFICACIONES
Mesófilos aero- Recuento Pseudomona
bios viables coliformes aeruginosa
CA
< 100 UFC / mL Ausenre Ausenre

TE
IO
FECHA DE EMISION: 2015-09-18

BL
ANALISTA: LPL
BI
54
F-CC.016-V3

REPORTE DE ANALISIS N°: 464 / 15
SOLICITADO POR: Producción
X PRODUCTO - INSUMO
NOMBRE: Limonada Purgante Markos Solución
LOTE:109355 BOLETIN: -
A
FECHA DE RECEPCION: 2015-09-17 FECHA DE ANALISIS: 2015-09-17
IC
ENSAYO ESPECIFICACIONES RESULTADOS
M
UI
Recuento de mesófilos aerobios viables Máximo < 102 UFC / mL < 10 UFC / mL
Q
Recuento de hongos y levaduras Máximo < 101 UFC / mL < 10 UFC / mL
O
Recuento total de coliformes - -
BI
Escherichia coli Ausente Ausente
Salmonella sp. Y
Ausente Ausente
IA
Staphylococcus aureus Ausente Ausente
AC
Pseudomona aeruginosa Ausente Ausente

M
Esterilidad - -
R
Endotoxinas bacterianas - -
FA
Clostridium sporogenes - -
DE
Candida albicans - -
CA
Medio de cultivo utilizado TSA AS MS CM MC XLD

N° Lote Medio Deshidratado VM584458 VM676538 VM643764 VM579284 VM496465 VM651887
TE
N° Lote Preparación de Medio 1500915 1500915 1480815 1480815 1480815 1480815

Cepa control utilizada S. aureus C. albicans S. aureus P. aeruginosa E. coli Salmonella sp.
IO
N° Lote de Cepa Control 485-221 443-418 485-221 484-558 483-393 363-190

BL
Codigo de cultivo/Nº Placa CP-6538-002085 CP-10231-002085 CP-6538-002085 CP-9027-002085 CP-8739-002085 CP-14028-002085

BI
APROBADO X RECHAZADO -
FECHA DE EMISION: 2015-09-22
OBSERVACIONES: -
ANALISTA: LPL
55
F-CC.015
ÁREA DE CONTROL DE CALIDAD
VALORACION MICROBIOLÓGICA DE GENTAMICINA SULFATO - MATERIA PRIMA

LOTE: 00107255 Fecha: 2015-08-12
A
REPETICIÓN ESTANDAR S3 ZONA 2 ZONA 4 ZONA 6 MEDIA
ESTANDAR CONC. µg/mL MEDIA SD RSD
IC
POR PLACA ZONA 1 ( mm) ZONA 3 (mm) ZONA 5 (mm) MEDIA SD RSD % (mm) (mm) (mm) CORREGIDA
1 13.85 13.15 13.95 11.60 11.30 10.70
M
ST1 0.1536 2 13.30 14.05 13.15 13.928 0.629 4.5 11.20 12.55 11.50 11.139 0.700 6.3 10.861
3 14.50 14.80 14.60 10.40 10.45 10.55
UI
1 13.45 13.85 13.50 11.55 12.30 11.20
ST2 0.1920 2 13.85 13.60 13.75 13.567 0.229 1.7 12.60 12.50 12.60 11.967 0.774 6.5 12.050
Q
3 13.60 13.30 13.20 11.70 12.75 10.50
O
1 13.55 13.25 12.35 16.75 15.40 14.75
ST4 0.3000 2 14.65 13.45 14.00 13.628 0.674 4.9 15.70 16.70 17.10 16.222 0.780 4.8 16.244
BI
3 13.20 14.05 14.15 16.50 16.85 16.25
1 13.30 13.95 12.60 17.95 18.90 17.15
Y
ST5 0.3780 2 13.60 13.60 13.55 13.478 0.415 3.1 18.70 18.00 18.40 18.389 0.719 3.9 18.561
3 13.65 13.90 13.15 18.05 18.65 19.70
IA
MUESTRA
1 13.75 12.60 12.50 12.45 13.85 13.15
AC
M1 X 2 12.50 12.75 11.85 12.706 0.594 4.7 12.95 13.8 13.35 12.956 0.632 4.9 13.900
3 13.55 12.55 12.30 12.50 12.50 12.05
M
1 13.10 12.95 13.15 12.75 13.00 12.70
M2 X 2 12.50 11.35 12.65 12.661 0.538 4.3 12.70 12.80 13.85 12.989 0.359 2.8 13.978
R
3 12.65 12.90 12.70 13.10 12.90 13.10
FA
13.650 PUNTO DE CORRECIÓN ST3 REFERENCIA 0.2400 µg/mL
Datos del estandar primario USP:
w (mg): 38.52 Pot: 649 ug/mg 𝑊𝑠𝑡 649
25
x 1
𝑥
3
25
DE
Datos de muestra:
Concentracion teórica: Pot declarada: 612 ug/mg
CA
M1 (mg) 38,50 0.22620 µg/mL 𝑊𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 3 0.05 612

𝑥 x 𝑥 20.000
M2 (mg) 38.45 0.22590 µg/mL 25 25 25 1
18.000 y = 8.72401041ln(x) + 26.70952507
TE
R² = 0.97958252
ESTANDAR µg/mLMEDICIONES CORREGIDA 16.000
ST1 0.1536000 10.861 Logaritmo muestra: (U-a)/b 14.000
IO
ST2 0.1920000 12.050 U: mm corregido de la muestra 12.000

ST3 0.2400000 13.650 a: intercepto de la curva
BL
10.000
ST4 0.3000000 16.244 b: pendiente de la curva
ST5 0.3780000 18.561 8.000
BI
log. Muestra 6.000

Cu: e
INTERCEPTO 26.70952507 Cu: concentracion muestra 4.000
PENDIENTE 8.72401041 2.000
r2 97.96 % 0.000
Log M 1: -1.468306945 Log M 2: -1.459366102 0.0000000 0.1000000 0.2000000 0.3000000 0.4000000
Concentración: M 1: 0.2303 µg/mL M 2: 0.2324 µg/mL
% : 101.8126 % : 102.8774
PROMEDIO 102.35 % Gentamicina tal cual

DSR 0.74 %
56
V. CONCLUSIÓN
1. Se realizó los controles microbiológicos a los productos farmacéuticos no

estériles manufacturados en Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A.,
evidenciándose que estos están acorde con las especificaciones de la
Farmacopea de los Estados Unidos.
VI. RECOMENDACIONES
1. El analista debe estar capacitado en el manejo de cepas microbiana.

2. El analista debe utilizar su equipo de protección personal cuando amerite el
A
IC
caso.
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
56
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Organización Mundial de la Salud. Buenas Prácticas de la OMS para

laboratorios de microbiología farmacéutica. Documento Técnico Nº 11. 2013.
2. Castro N., Curtis María L. Laboratorio de Microbiología-Control
Microbiológico de Materias Primas y Productos Farmacéuticos No Estériles.
2002. [Fecha de acceso: 25/10/2016]. Disponible en:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_C
ontrol_Microbiol%C3%B3gico_PNE.pdf
3. Farmacopea de los Estados Unidos de América-USP 39. Óptimas Prácticas de
A
Laboratorio Microbiológico. Capítulo 1117. 2016.
IC
4. DIGEMID. Manual de Buenas Practicas de Laboratorio para el control de
M
UI
calidad de productos farmacéuticos. AnexoN°2: Laboratorio de Microbiología.
Q
2013.
O
5. Farmacopea de los Estados Unidos BI
de América-USP 39. Examen
Y
Microbiológico de Productos No Estériles: Criterios de Aceptación para
IA
preparaciones farmacéuticas y sustancias de uso farmacéutico. Capítulo 1111.

AC
2016.
R M
6. Farmacopea de los Estados Unidos de América-USP 39. Examen

FA
Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Microorganismos

DE
Específicos. Capítulo 62. 2016.

CA
7. Farmacopea de los Estados Unidos de América-USP 39. Caracterización,

TE
Identificación y Tipificación de Cepas Microbianas. Capítulo 1113. 2016.

IO
8. Farmacopea de los Estados Unidos de América-USP 39. Examen

BL
Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano.

BI
Capítulo 61. 2016.

9. Farmacopea de los Estados Unidos de América-USP 39. Determinación de la
actividad de Agua en producto farmacéuticos no estériles. Capítulo 1112. 2016.
10. Farmacopea de los Estados Unidos de América-USP 39. Antibióticos –
Valoraciones Microbiológicas. Capítulo 81. 2016.
57
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
ANEXOS
CA
TE
IO
BL
BI
58
ANEXO N° 1
LISTA DE PRODUCTOS FARMACÉUTICOS NO ESTÉRILES
A
IC
MANUFACTURADOS EN EL AÑO 2015
M
UI
LABORATORIOS FARMACÉUTICOS MARKOS SAC
Q
O
MES N° PRODUCTO FARMACÉUTICO BI LOTE
Y
Enero 25 Gynoval Ovulos 101255
IA
AC
Enero 26 Gynoval Ovulos 101265

R M
Enero 27 Dexabron NF Jarabe 101275

FA
DE
Enero 28 Urobac Forte Comprimido Recubierto 101285

CA
Febrero 29 Maldex Compuesto Jarabe 102015

TE
Febrero 30 Maldex Compuesto Jarabe 102025

IO
BL
Febrero 31 Urobac Forte Comprimido Recubierto 102035

BI
Febrero 34 Gynoval Ovulos 102065
59
Febrero 36 Mystol 200mcg Tabletas 102085
Febrero 37 Amigdazol NF Trociscos 102095
Febrero 38 Amigdazol NF Trociscos 102105
Febrero 39 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 102115
Febrero 40 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 102125
Febrero 41 Dexabron NF Jarabe 102135
Febrero 42 Dexabron Nueva Formula Cápsulas 102145
A
IC
Febrero 43 Limonada Purgante Solución 212155
M
Markos
UI
Q
O
Markos BI
Y
IA
AC

M
Febrero 47 Hepavit B Complex Cápsulas 102195

R
FA
Febrero 48 Penetro Ungüento 102205

DE
Febrero 49 Cipromax 500 mg Comprimido Recubierto 102215

CA
TE
Febrero 50 Claritrox 250mg/5mL Polvo para suspensión 102225

IO
Polvo para suspensión

BL
Febrero 51 Dermazol Crema 102235

BI

Markos Libre de Calorias
marzo 54 Urobac Forte Comprimido Recubierto 103015
60
marzo 56 Urotan D Capsulas 103035
marzo 58 Dexabron NF Jarabe 103055
marzo 59 Dexabron Nueva Formula Cápsulas 103065
marzo 60 Gynoval Ovulos 103075
A
IC
M
UI
marzo 64 Aproxol 1000 Tabletas 103115
Q
O
marzo 65 Aproxol 1000 Tabletas
BI 103125
Y
marzo 66 Uromax Forte Cápsulas 103135
IA
AC
marzo 67 Urotan 100mg Tabletas 103145

R M
marzo 68 Limonada Purgante Solución 103155

FA
Markos
DE

CA
Markos
TE
marzo 70 Cortafan Comprimido Recubierto 103175

IO
BL
marzo 71 Cortafan Suspensión Oral Suspensión 103185

BI
marzo 72 Amigdazol NF Trociscos 103195
marzo 73 Amigdazol NF Trociscos 103205
marzo 74 Vitaveran B12 CIP Jarabe 103215
marzo 75 Hemocyton Jarabe 103225
61

Markos
Markos
marzo 78 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 103255
marzo 79 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 103265
marzo 80 Ergenil 320mg Cápsulas 103275

Markos
A
IC
M
UI
Markos
Q
O
BI
Y
IA

AC
M

R
FA
marzo 87 Vitaveran B12 CIP Jarabe 103345

DE
marzo 88 Parasitel 200mg Tabletas 103355

CA

TE
IO
Markos
BL
marzo 90 Broncodex Comp. Sol. Gotas 103375

BI
Gotas
Abril 92 Novotrim Balsámico Suspensión 104015
Abril 93 Urotan D Capsulas 104025
62
Abril 95 Cortafan Comprimido Recubiertos 104045
Abril 96 Divonal 50mg Tabletas 104055
Abril 97 Dolomeloflex Forte Comprimido Recubierto 104065
Abril 98 Venux 100mg Tabletas Recubiertas 104075
Abril 99 Limonada Purgante Solución 104085

Abril 100 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 104095
Abril 101 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 104105
A
IC
M
Abril 102 Amigdazol NF Trociscos 104115
UI
Q
Abril 103 Amigdazol NF Trociscos 104125
O
Abril 104 Cortafan
BI
Suspensión 104135
Y
IA
Abril 105 Prostal Cápsulas 104145

AC
Abril 106 Parasitel Suspensión 104155

R M
FA
Abril 107 Hepavit B Complex Cápsulas 104165

DE
Abril 108 Hemocyton Jarabe 104175

CA
Abril 109 Broncodex Compuesto Jarabe 104185

TE
IO
Abril 110 Kallozil Solución 104195

BL
BI

Markos
Markos
Abril 113 Gripalert Plus NF Tabletas 104225
Abril 114 Aproxol Plus Tableta Recubierta 104235
63
Abril 116 Caramelos Penetro Caramelos 104255

Abril 118 Yodil Compuesto Ungüento 104275
Abril 119 Vitaveran B12 CIP Jarabe 104285
Abril 120 Hemocyton Jarabe 104295
A
IC
Markos
M
UI
Q
Markos
O
Abril 123 Urobac Forte BI
Comprimido Recubierto 104325
Y
Abril 124 Urobac Forte Comprimido Recubierto 104335

IA
AC
mayo 125 Cortafan Comprimido Recubierto 105015

R M
mayo 126 Cortafan Comprimido Recubierto 105025

FA
mayo 127 Amigdazol NF Trociscos 105035

DE
CA

TE
mayo 129 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 105055

IO
mayo 130 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 105065

BL
BI
mayo 131 Meloflex Comprimido 105075
mayo 132 Urotan D Capsulas 105085
mayo 133 Urotan D Capsulas 105095
mayo 134 Gynoval Ovulos 105105
64
mayo 137 Hepavit B Complex Cápsulas 105135
mayo 138 Novotrim Balsámico Forte Tabletas 105145
mayo 139 Dermazol Crema 105155
mayo 140 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 105165
mayo 141 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 105175
mayo 142 Cortafan Suspensión 105185
mayo 143 Limonada Purgante Solución 105195
A
IC
Markos
M
mayo 144 Limonada Purgante Solución 105205
UI
Q
Markos
O
mayo 145 Limonada Purgante Solución
BI 105215
Y
IA
mayo 146 Mystol 200mcg Tabletas 105225

AC
mayo 147 Gripalert Plus NF Tabletas 105235

R M
FA
mayo 148 Gripalert Plus NF Tabletas 105245

DE
mayo 149 Urobac Forte Comprimido Recubierto 105255

CA
mayo 150 Urobac Forte Comprimido Recubierto 105265

TE
mayo 151 Uromax Forte Cápsulas 105275

IO
BL

BI
mayo 154 Gripalert Plus NF Jarabe Pediátrico 105305
mayo 155 Maldex Compuesto Jarabe 105315
mayo 156 Maldex Compuesto Jarabe 105325
mayo 157 Parasitel 200mg Tabletas 105335
65
mayo 160 Nisolan Solución 105365
mayo 164 Urotan 100 Tabletas 105405
junio 165 Limonada Purgante Solución 106015
A
IC
Markos
M
junio 166 Hepavit B Complex Cápsulas 106025
UI
Q
junio 167 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 106035
O
BI
junio 168 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 106045
Y
IA
AC
junio 169 Neoenzimax NF Capsulas 106055

M
junio 170 Urobac Forte Comprimido Recubierto 106065

R
FA

DE

CA
TE
junio 173 Yodil Compuesto Ungüento 106095

IO
junio 174 Yodil Compuesto Ungüento 106105

BL
BI
Junio 175 Aproxol Plus Tableta Recubierta 106115
junio 176 Aproxol Plus Tableta Recubierta 106125
junio 177 Amigdazol NF Trociscos 106135
junio 178 Doloparamidol Comprimido Recubierto 106145
66
junio 179 Doloparamidol Comprimido Recubierto 106155
junio 180 Dexabron NF Jarabe 106165
junio 181 Dexabron NF Jarabe 106175
junio 182 Mystol 200mcg Tabletas 106185
junio 185 Urotan D Capsulas 106215
A
IC
junio 186 Urotan D Capsulas 106225
M
UI
Q
O
junio 188 Amigdazol NF Trociscos
BI 106245
Y
IA
AC

R M
junio 191 Cetirimax D Jarabe 106275

FA
DE
junio 192 Aproxol 1000 Tabletas 106285

CA
junio 193 Gynoval Ovulos 106295

TE

IO
BL

BI
junio 196 Dermazol Crema 106325
junio 197 Hepavit B Complex Cápsulas 106335
junio 198 Neoenzimax NF Capsulas 106345
junio 199 Vitaveran B12 CIP Jarabe 106355
67
junio 200 Dexabron Plus Tabletas 106365
junio 201 Claritrox Comprimido Recubierto 107015
julio 202 Limonada Purgante Solución 107025

Markos
Markos
julio 204 Cortafan Suspensión Oral Suspensión 107045
julio 205 Parasitel 200mg Tabletas 107055
A
IC
M
UI
Q
O
julio 208 Dexabrón Plus Tabletas Tabletas 107085
BI
Y
julio 209 Uromax Forte Cápsulas 107095
IA
AC
julio 210 Neoenzimax NF Capsulas 107105

M
julio 211 Gynoval Ovulos 107115

R
FA

DE
julio 213 Miofedrol Relax Plus C.R. 107135

CA
TE
julio 214 Miofedrol Relax Plus C.R. 107145

IO
BL
julio 215 Hemocyton Jarabe 107155

BI
julio 216 Dexabron NF Jarabe 107165
julio 217 Urobac Forte CR CR 107175
julio 219 Magacid Suspensión 107195
68
julio 220 Magacid Suspensión 107205
julio 221 Broncodex Compuesto Jarabe 107215
julio 222 Dexabron Nueva Formula Cápsulas 107225
julio 223 Amigdazol NF Trociscos 107235
julio 224 Amigdazol NF Trociscos 107245
julio 225 Dermazol Crema 107255
A
IC
julio 227 Dexabron NF Jarabe 107275
M
UI
julio 228 Dexabron Nueva Fórmula Cápsulas 107285
Q
O
julio 229 Limonada Purgante Solución
BI 107295
Markos
Y
IA
julio 230 Cortafan Suspensión Oral Suspensión 107305

AC

R M
FA

DE

CA
Markos L. C.
TE
julio 234 Hepavit B Complex Capsulas 107345

IO
BL
julio 234 Hepavit B Complex Capsulas 107345

BI
julio 235 Doloaproxol Dual Forte C.R. 107355
julio 236 Doloaproxol Dual Forte C.R. 107365
Agosto 237 Maldex Compuesto Jarabe 108015
Agosto 238 Gripalert Plus NF Tabletas 108025
69
Agosto 239 Hemocyton Jarabe 108035
Agosto 240 Gynoval Ovulos 108045
Agosto 242 Dermazol Crema 108065
Agosto 243 Broncodex Compuesto Jarabe 108075
Agosto 244 Broncodex Comp. Sol. Gotas 108085

Gotas
Agosto 245 Cortafan Comprimido Recubierto 108095
A
IC
M
Agosto 246 Espasmosedil Compuesto Comprimido Recubierto 108105
UI
Q
Agosto 247 Doloparamidol Comprimido Recubierto 108115
O
Agosto 248 Doloaproxol Dual Forte
BI
Comprimido Recubierto 108125
Y
IA
Agosto 249 Amigdazol NF Trociscos 108135

AC

R M
FA

DE

CA

TE
IO

BL
BI
Agosto 256 Urotan D Capsulas 108205
Agosto 257 Urotan D Capsulas 108215
Agosto 258 Vitaveran B12 CIP Jarabe 108225
Agosto 259 Limonada Purgante Solución 108235

Markos
70

Markos
Markos
Agosto 262 Kallozil Solución 108265
Agosto 263 Broncodex Comp. Sol. Gotas 108275

Gotas
Agosto 264 Hepavit B Complex Cápsulas 108285
Agosto 265 Penetro Ungüento 108295
A
Agosto 266 Urotan 100mg Tabletas 108305
IC
M
UI
Q
O
Agosto 269 Ergenil 320mg
BI
Cápsulas 108335
Y
IA
Agosto 270 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 108345

AC
Agosto 271 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 108355

R M
Agosto 272 Divonal 50mg Tabletas 108365

FA
Agosto 273 Venux 100mg Tabletas Recubiertas 108375

DE
Agosto 274 Venux 50mg Tabletas Recubiertas 108385

CA
TE

IO
Markos
BL

BI
Agosto 278 Proxidol 550mg Tabletas Recubiertas 108425

Markos Libre de calorias
setiembre 280 Vitaveran B12 CIP Jarabe 109015
71
Setiembre 281 Hemocyton Jarabe 109025
Setiembre 282 Cipromax 500 mg Comprimido Recubierto 109035
Setiembre 283 Dexabron Plus Tabletas 109045
Setiembre 284 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 109055
Setiembre 285 Meloflex Comprimido 109065
Setiembre 286 Neoenzimax NF Capsulas 109075
Setiembre 287 Amigdazol NF Trociscos 109085
A
IC
M
UI
Q
O
Setiembre 290 Urotan D Capsulas
BI 109115
Y
Setiembre 291 Urotan D Capsulas 109125
IA
AC

R M

FA
DE

CA

TE

IO
BL
Setiembre 297 Uromax Forte Cápsulas 109185

BI
Setiembre 298 Urobac Forte Comprimido Recubierto 109195
Setiembre 301 Magacid Suspensión 109225
72
Setiembre 302 Maldex Compuesto Jarabe 109235
Setiembre 303 Parasitel 200mg Tabletas 109245
Setiembre 304 Adeprost 0,4mg Capsulas 109255
Setiembre 305 Hepavit B Complex Cápsulas 109265
Setiembre 306 Mystol 200mcg Tabletas 109275
Setiembre 307 Gripalert Plus NF Jarabe Pediátrico 109285
Setiembre 308 Maldex Compuesto Jarabe 109295
A
IC
Setiembre 309 Gynoval Ovulos 109305
M
UI
Q
O
Setiembre 310 Gynoval Ovulos BI 109315
Y
IA
AC

R M

FA
DE
Setiembre 312 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 109335

CA
Setiembre 313 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 109345

TE
Setiembre 314 Limonada Purgante Solución 109355

IO
Markos
BL
BI

Markos
Markos
Setiembre 317 Dexabron NF Jarabe 109385
Setiembre 318 Yodil Compuesto Ungüento 109395
73
Setiembre 319 Uromax Forte Cápsulas 109405
Setiembre 320 Cortafan Comprimido Recubierto 109415
Setiembre 321 Aproxol 1000 Tabletas 109425
A
IC
M
UI
Q
O
Setiembre 327 Gynoval Ovulos BI 109485
Y
IA
AC
Setiembre 328 Hepavit B Complex Cápsulas 109495

R M
octubre 329 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 110015

FA

DE
CA
octubre 331 Claritrox Comprimido Recubierto 110035

TE
octubre 332 Dexabron Nueva Formula Cápsulas 110045

IO
octubre 332 Dexabron Nueva Formula Cápsulas 110045

BL
BI
octubre 333 Paramidol Jarabe 110055
octubre 334 Espasmosedil Compuesto Comprimido Recubierto 110065
octubre 335 Gripalert Plus NF Tabletas 110075
octubre 336 Cortafan Comprimido Recubierto 110085
octubre 337 Gynoval Ovulos 110095
74
octubre 339 Vitaveran B12 CIP Jarabe 110115
octubre 342 Cortafan Suspensión 110145
octubre 343 Limonada Purgante Solución 110155
A
IC
Markos Libre Cal.
M
UI
octubre 344 Limonada Purgante Solución 110165
Q
Markos
O
octubre 345 Limonada Purgante BI
Solución 110175
Y
Markos
IA
octubre 346 Amigdazol NF Trociscos 110185

AC
M
octubre 347 Broncodex Compuesto Jarabe 110195

R
FA
octubre 348 Hemocyton Jarabe 110205

DE
octubre 349 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 110215

CA
octubre 350 Miofedrol Relax Plus Comprimido Recubierto 110225

TE
IO
octubre 351 Urotan D Capsulas 110235

BL

BI
octubre 353 Venux 100mg Tabletas Recubiertas 110255
octubre 354 Zitrozin 500mg Tabletas Recubiertas 110265
75
octubre 355 Dermazol Crema 110275
octubre 355 Dermazol Crema 110275
octubre 356 Novotrim Balsámico Suspensión 110285
octubre 359 Broncodex Adultos Jarabe 110315

30mg/5mL
octubre 360 Broncodex Pediátrico Jarabe 110325
A
15mg/5mL
IC
M
octubre 361 Zitrozin 500mg Tabletas Recubiertas 110335
UI
Q
octubre 362 Dexabron Plus Tabletas 110345
O
octubre 363 Uromax Forte BI
Cápsulas 110355
Y
octubre 363 Uromax Forte Cápsulas 110355

IA
AC
octubre 364 Espasmosedil Compuesto Comprimido Recubierto 110365

R M
octubre 365 Penetro Ungüento 110375

FA
octubre 366 Vitaveran B12 CIP Jarabe 110385

DE
CA

TE

IO

BL
BI
noviembr 371 Urobac Forte Comprimido Recubierto 111015

e
76

e
noviembr 373 Neoenzimax NF Capsulas 111035
e
noviembr 373 Neoenzimax NF Capsulas 111035
e
noviembr 374 Limonada Purgante Solución 111045
e Markos Libre de Calorias
noviembr 375 Gynoval Ovulos 111055
e
A
IC
M
e
UI
Q
O
e BI
Y
IA
e
AC

M
e
R
FA

DE
e
CA
e Markos Libre de Calorias

TE
noviembr 379 Amigdazol NF Trociscos 111095

IO
BL
e
BI
noviembr 380 Amigdazol NF Trociscos 111105

e
noviembr 381 Cortafan Suspensión 111115
e
noviembr 382 Hepavit B Complex Cápsulas 111125
e
77
noviembr 383 Hemocyton Jarabe 111135

e
noviembr 384 Prostal Cápsulas 111145
e
noviembr 385 Cortafan Comprimido Recubierto 111155
e
noviembr 386 Dexabron Nueva Formula Cápsulas 111165
e
noviembr 387 Kallozil Solución 111175
e
A
IC
noviembr 388 Parasitel 200mg Tabletas 111185
M
e
UI
Q
O
e BI
noviembr 390 Claritrox 250mg/5mL Polvo para suspensión 111205
Y
IA
e Polvo para suspensión

AC
noviembr 391 Yodil Compuesto Ungüento 111215

M
e
R
FA
noviembr 392 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 111225

DE
e
CA
e
TE

IO
BL
e
BI

e
e
e
78

e
e
noviembr 398 Dexabron Plus Tabletas 111285
e
noviembr 399 Dexabron Plus Tabletas 111295
e
noviembr 400 Urotan D Capsulas 111305
e
A
IC
M
e
UI
Q
O
e BI
Y
IA
e
AC

M
e
R
FA

DE
e
CA
e Markos
TE

IO
BL
e Markos
BI

e Markos
e
e
79

e Markos
e
e
e
e
A
IC
M
e
UI
Q
O
e BI
Y
IA
e
AC

M
e
R
FA

DE
e
CA
e
TE

IO
BL
e
BI

e
noviembr 420 Dermazol Crema 111505
e
noviembr 420 Dermazol Crema 111505
e
80

e Markos
Diciembre 422 Maldex Compuesto Jarabe 112015
Diciembre 423 Limonada Purgante Solución 112025

Markos
Markos
Diciembre 425 Doloparamidol Comprimido Recubierto 112045
Diciembre 426 Doloaproxol Dual Forte Comprimido Recubierto 112055
A
IC
M
UI
Q
O
Diciembre 429 Nisolan 5mg/5ml BI
Solución 112085
Y
Diciembre 430 Espasmosedil Compuesto Comprimido Recubierto 112095

IA
AC

R M
Markos
FA

DE
Markos
CA
Diciembre 433 Diosmin H 500mg Comprimido Recubierto 112125

TE
Diciembre 434 Parasitel Suspensión 112135

IO
BL
Diciembre 435 Amigdazol NF Trociscos 112145

BI
Diciembre 436 Cortafan Comprimido Recubierto 112155
Diciembre 437 Vitaveran B12 CIP Jarabe 112165
Diciembre 438 Cortafan Suspensión 112175
Diciembre 439 Hemocyton Jarabe 112185
81
Diciembre 440 Urotan D Capsulas 112195
Diciembre 441 Urotan D Capsulas 112205
A
IC
M
UI
Q
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BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
82

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Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

TÍTULO DE QUÍMICO FARMACÉUTICO

“CONTROL MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS

FARMACEUTICOS NO ESTÉRILES EN LA INDUSTRIA

Br. Pelaez Loyola Lizeth Margoth

Mg. Q.F. Rengifo Penadillos Roger Antonio

Agradezco a Dios por guiarme

en su camino y siempre permanecer

conmigo en cada momento de mi vida.

gracias a ustedes. Los amo

Un cordial agradecimiento al personal

que labora en el Laboratorio Farmacéutico Markos por su

apoyo incondicional para la realización de este

Informe de prácticas pre profesionales

El objetivo del presente informe de prácticas pre-profesionales es realizar los

productos tienen una óptima calidad microbiológica.

Palabras claves: control microbiológico, cepas, medios de cultivo, productos

farmacéuticos no estériles, Farmacopea de los Estados Unidos.

The aim of this report pre-professional practice is to perform microbiological

Keywords: microbiological control, strains, culture media, non-sterile pharmaceutical

III. Actividades desarrolladas…………………………………………………..8

IV. Presentación de resultados de la prácticas pre profesionales………………47

VII. Referencias bibliográficas…………………………………………………57

La presencia de ciertos microorganismos en preparaciones no estériles puede tener el

potencial efecto de reducir y hasta inactivar la actividad terapéutica del producto y de

baja biocarga de formas farmacéuticas terminadas mediante la implementación de las

cuanto al aspecto, olor, color, sabor, consistencia, descomposición, intolerancia,

disminución de su actividad y otros.1

Los productos no estériles son susceptibles de contaminarse con microorganismos

productos son adecuados para el uso al que están destinados.2

Las buenas prácticas en un laboratorio microbiológico consisten en actividades que

dependen de varios principios: técnicas asépticas, control de medios, control de cepas

así como capacitación del personal de laboratorio.

Debido al riesgo inherente de variabilidad de los datos microbiológicos, la

confiabilidad y la reproducibilidad dependen de la utilización de los métodos

aceptados y reconocidos como métodos farmacopeicos validados y del

Chávez A. Luis, 1987. Trabajo de investigación en el Control microbiológico de

Guevara V. Marlon, 1999. Informe de prácticas desarrollado en Control

García C. Juan. 2012. Estudio desarrollado en la Determinación y Cuantificación de

Gentamicina sulfato en Multiderm crema de Laboratorios Farmacéuticos

Farmindustria S.A por potencia antibiótica, mediante el método microbiológico

cilindro-placa determino la potencia antibiótica de Gentamicina y demostró la

efectividad y confiabilidad del método

estériles y dietéticos elaborados por la Industria farmacéutica nacional. evaluó la

calidad microbiológica de 81 productos no estériles determinando que todos los

productos cumplen con los criterios de aceptación.

2. Realizar los análisis microbiológicos respectivos a los medios de cultivo y cepas

Descripción del Informe

farmacopeicas USP .4,5

II. LA INSTITUCIÓN O EMPRESA

Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A. es una empresa dedicada a la

elaboración de productos farmacéuticos, que fue fundada en el año 1977, bajo la

Laboratorios farmacéuticos Markos S.A. inicia sus actividades como empresa

El flujo de producción obedece a una secuencia adecuada, desde el ingreso de la

Actualmente Laboratorios farmacéuticos Markos S.A. cuenta con la certificación

medicamentos de calidad. Comprometidos con la plena satisfacción de nuestros

clientes, apoyados en la competencia de nuestro recurso humano, innovación,