Villanueva Leon Gesica

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA
A
IC
M
UI
Q
O
INFORME DE TESIS TIPO I BI
Y
IA
“Características farmacognósticas y cuantificación de flavonoides totales del

AC
RM
fruto de Prunus serotina Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de

FA
Agallpampa, provincia de Otuzco, región La Libertad–marzo 2014”

DE
AUTORES:
CA
Villanueva León Gesica Katherine

TE
Zavaleta Delgado Rosmery Jobita

IO
ASESOR:
BL
 Dr. Venegas Casanova, Edmundo Arturo

BI
CO- ASESOR:
 Mg. Aro Díaz, Rubén Jesús
TRUJILLO – PERU
2014
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
PRESENTACIÓN
Dando cumplimiento a lo establecido por reglamentos de trabajos de investigación
de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo,
sometemos a vuestra consideración y elevado criterio profesional el presente
informe de Investigación titulado:
“Características farmacognósticas y cuantificación de flavonoides totales del
A
IC
fruto de Prunus serotina Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de
M
UI
Agallpampa, provincia de Otuzco, región La Libertad – marzo 2014”
Q
O
BI
El cual se elaboró para contribuir a nuestro desarrollo profesional y al de nuestra
Y
alma mater.
IA
AC
Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones

RM
cometidos en la elaboración del presente trabajo, nos sometemos a vuestro

FA
dictamen.
DE
CA
TE
IO
BL
Trujillo, Diciembre del 2014

BI
ii
JURADO CALIFICADOR
A
IC
_______________________________
M
UI
Dr. QF. Segundo G. Ruiz Reyes
Q
O
PRESIDENTE
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
______________________________ _________________________________
TE
IO
Mg. Roger Rengifo Penadillos Dr. QF. Edmundo A. Venegas Casanova

BL
MIEMBRO MIEMBRO
BI
iii
DEDICATORIA
A DIOS
Por darnos la sabiduría necesaria para
lograr satisfactoriamente este trabajo de
investigación y porenseñarnos a valorar la
A
IC
vida.
M
UI
Q
O
BI
Y
A NUESTROS PADRES
IA
AC
Por depositar su confianza en cada uno de

RM
nosotros, brindándonos su apoyo

FA
incondicional y económico para este trabajo

DE
de investigación e incentivarnos a seguir

CA
adelante y no dejarnos vencer en la vida.

TE
IO
BL
BI
ANUESTROS AMIGOS
Que siempre estuvieron presentes
para apoyarnos en todo lo que
necesitábamos así como también
brindándonos su amistad desinteresada.
iv
INDICE
PRESENTACIÓN ............................................................................................................ ii
JURADO CALIFICADOR .............................................................................................. iii
DEDICATORIA .............................................................................................................. iv
A
INDICE ............................................................................................................................. v
IC
M
RESUMEN ...................................................................................................................... vi
UI
Q
O
ABSTRACT.................................................................................................................... vii
BI
Y
I. INTRODUCCIÓN................................................................................................... 1
IA
AC
II. MATERIAL Y METODO ...................................................................................... 7

RM
III. RESULTADOS ..................................................................................................... 23

FA
IV. DISCUSION .......................................................................................................... 26

DE
V. CONCLUSIONES................................................................................................. 28
CA
TE
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .................................................................. 29

IO
BL
VII. ANEXOS ............................................................................................................... 33

BI
RESUMEN
Se realizó el presente trabajo de investigación, con el objetivo de contribuir al
estudio de las características farmacognósticas y cuantificar los flavonoides totales
del fruto de Prunus serotina Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de
Agallpampa, provincia de Otuzco, región La Libertad – marzo 2014. Se trabajó con
el epicarpio Prunus serotina Ehrhart (capulí), se determinó sus características
A
macromorfológicas, se establecieron los parámetros de calidad y luego se realizó el
IC
M
tamizaje fitoquímico en donde se utilizó el método de la Prueba de la Gota de la
UI
Q
Dra. Olga Lock de Ugaz, y finalmente, se cuantificó los flavonoides totales
O
BI
utilizando como patrón quercetina. Los resultados encontrados fueron superficie
Y
lisa, color morado negruzco, olor agradable. Con respecto a los parámetros
IA
AC
farmacognósticos estudiados se encontró que éstos están dentro del rango de

RM
valores que se reportan para las drogas vegetales. Así mismo se identificó la
FA
presencia de flavonoides totales en un porcentaje de 0,29%.

DE
CA
Palabras claves: Prunus serotina Ehrhart, flavonoides, cuantificación.

TE
IO
BL
BI
vi
ABSTRACT
The present research, with the object of contributing to the study of
farmacognósticas characteristics and quantify the total flavonoids of fruit
Prunus serotina Ehrhart (capulí), from Agallpampa district, Otuzco province,
La Libertad region was performed - March 2014. We worked with the
epicarpio Prunus serotina Ehrhart (capulí), its macromorphological
A
characteristics were determined, quality parameters were established and then
IC
M
the phytochemical screening where in the method drop Test was used Dr.
UI
Q
Olga Lock of Ugaz, and finally, quantified total flavonoids using as pattern
O
BI
quercetin. The results were smooth surface, blackish purple color, pleasant
Y
smell. Regarding the studied parameters were found pharmacognostic they
IA
AC
are within the range of values reported for plant drugs. Also, the presence of
RM
total flavonoids in a percentage of 0.29% was identified.

FA
DE
Keywords: Prunus serotina Ehrhart, flavonoids, quantification.

CA
TE
IO
BL
BI
vii
I. INTRODUCCIÓN
Cuando hablamos de plantas, pensamos en aquellas que podemos comer, usar
como combustible o como medicina o para la construcción de viviendas. Pero
sabemos que toda existencia en el planeta depende de las plantas1.
Es indudable la importancia de las plantas para la medicina moderna, durante
mucho tiempo los remedios naturales y las plantas medicinales fueron el
A
IC
principal e incluso el único recurso del que disponía el médico; todas las
M
UI
culturas, a lo largo y ancho del planeta y en todos los tiempos, han usado las
Q
O
plantas medicinales como base de su propia medicina. La diversidad de
BI
plantas medicinales disponible varía según las regiones y los ecosistemas de
Y
IA
cada zona donde habitan2.

AC
RM
En los últimos años un 80% de la población mundial ha recurrido a las

FA
plantas medicinales para tratar diversas enfermedades o afecciones, porque

DE
son accesibles y más baratos que los productos farmacéuticos. 3.

CA
En la diversidad de plantas encontramos a la especie arbórea, dentro ella se

TE
IO
encuentra el capulí, que es originaria de Norte América, aunque también se la

BL
considera endémica de Ecuador, México y Perú, donde sus usos como fruto
BI
comestible datan desde el tiempo de los Incas4.
En América del norte, el fruto del capulí no es valorado como en la Región
Andina, ya que su tamaño es menor a 10 mm en comparación con el fruto de
nuestra región que puede llegar a medir hasta 3.5 cm de diámetro. Se piensa
que esta diferencia de tamaño surgió por la domesticación y selección por
nativos en América4.
En cuanto a su clasificación taxonómica, capulí pertenece a la familia
A
Rosaceae. Se compone de 5 subespecies botánicas que han sido establecidas
IC
M
en base a características morfológicas de hojas, flores y frutos, clasificación
UI
Q
que ha sido ampliamente discutida por su ambigüedad. En los primeros años
O
BI
de crecimiento es delgado y crece en forma piramidal, más tarde la copa del
Y
árbol se expande4.
IA
AC
El árbol puede llegar a medir 15 metros de altura en Ecuador, mientras que en

RM
México y América Central es de tan solo 10 metros, también es común que se

FA
presente en forma arbustiva. Según algunos autores, el capulí fue introducido

DE
de México en el siglo XV, con amplia distribución actual en la Sierra del

CA
TE
Perú. Se le encuentra a niveles de 2100 - 3100 m.s.n.m., mientras que en

IO
Junín fructifica hasta los 3400 m.s.n.m. y llega en forma arbustiva (sin flores)
BL
BI
hasta los 3900 m.s.n.m. Conforme se asciende en altura se reduce su tamaño y
pierde capacidad de producción de fruto, salvo en el caso de la ribera del
Lago Titicaca por la influencia amortiguadora del agua5.
Las hojas son oblongas, lanceoladas y acuminadas en el ápice con un tamaño
entre 7 a 12 centímetros, su borde es aserrado, y se distinguen por un color
verde oscuro y brillante. Las flores nacen en racimos, son blancas y suelen
desprender una fragancia distintiva. El ovario de las flores es libre y sésil,
unilocular con dos óvulos, el estilo es simple con estigma peltado4.
El fruto es una drupa globosa que se da en racimos delgados, cuando se
A
encuentra maduro suele tener un color negro, con una cáscara delgada, la
IC
M
pulpa es jugosa y con un sabor entre dulce y amargo. La producción de
UI
Q
semillas es abundante, y su dispersión por aves es amplia, el sistema radicular
O
es superficial4. BI
Y
IA
El capulí ha tenido usos medicinales desde tiempos prehispánicos,

AC
específicamente para enfermedades como diarrea e inflamaciones

RM
respiratorias asociadas con la tos. Probablemente el uso del capulí en estas

FA
enfermedades se debe a la gama de compuestos fenólicos como taninos y

DE
flavonoides, de los que se conoce sus propiedades antioxidantes,

CA
TE
antimicrobianas. Dos antocianinas ya reportadas en capulí son la cianidina-3-

IO
glucósido y la cianidina-3-rutinosido4.
BL
BI
Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales y que
protegen al organismo del daño producido por agentes oxidantes, como los
rayos ultravioletas, la polución ambiental, sustancias químicas presentes en
los alimentos, etc6,7.
Los flavonoides contienen en su estructura química un número variable de
grupos hidroxilo fenólicos y excelentes propiedades de quelación del hierro y
otros metales de transición, lo que les confiere una gran capacidad
antioxidante. Por ello, desempeñan un papel esencial en la protección frente a
los fenómenos de daño oxidativo y tienen efectos terapéuticos en un elevado
número de patologías. También se le considera secuestradora de radicales
libres, además de la inhibición de las oxidasas: lipooxigenasas,
A
IC
ciclooxigenasas, mieloperoxidasas y la xantina oxidasa; evitando la
M
UI
formación de especies reactivas de oxígeno y de hidroperóxidos orgánicos7.
Q
O
BI
Se han realizado diversos estudios referentes al capulí; en un estudio
Y
realizado por Pacheco Uribe, G. et al sobre “Estudio Farmacológico,
IA
AC
Toxicidad y Perfil Fenólico del Fruto “Capulí” (Prunus serotina)” los

RM
resultados que obtuvieron proporcionan bases científicas para el uso

FA
etnomédico del capulí y revelan que este fruto posee efectos benéficos en la
DE
salud para el tratamiento de hipertensión, además de que la decocción del

CA
fruto resultó no ser toxica8.

TE
IO
Otro estudio realizado sobre capulí fue el de M. Jiménez. et al sobre

BL
“Actividad antioxidante y antimicrobiana de Extractos de capulí (Prunus

BI
serotina, Ehrhart subsp. Serotina (capulí)” concluyeron que de los extractos
de acetona, metanol y etanol, el extracto de etanol presentó la actividad más
antioxidante y la actividad más antimicrobiana frente a Proteus mirabilis,
Salmonella typhimurium, Escherichia coli y Pseudomons aeruginosa que son
gram (-) y en contra de la gramo (+) Staphylococcus aureus9.
Así también el estudio realizado por Ibarra Alvarado, C. et al sobre
“Cuantificación de compuestos fenólicos y actividad vasodilatadora”
determinaron que la cáscara del fruto del capulí (Prunus serotina) contiene
niveles elevados de fenoles y flavonoides, similares a los niveles de dos frutos
consumidos mundialmente (uva y ciruela). De manera inesperada, la cáscara
de Prunus serotina presentó una mayor cantidad de proteína con respecto a
los niveles de proteína encontrados en la cáscara de los otros dos frutos
A
IC
utilizados como control. La cáscara del capulí también resulto ser más rica en
M
UI
minerales que las cáscaras de los tres frutos estudiados10.
Q
O
BI
Teniendo en cuenta los estudios mencionados y que se han realizado pocos
Y
trabajos sobre cuantificación de flavonoides totales en el fruto de capulí
IA
AC
(Prunus serotina), así como el conocimiento de los beneficios aportados por

RM
estos metabolitos, nos motiva a la investigación aquí descrita, en la que se

FA
evaluará las características farmacognósticas y el contenido de flavonoides

DE
totales en el fruto Prunus serotina, Ehrhart subsp. serotina (capulí),

CA
proveniente del distrito de Agallpampa, provincia de Otuzco, región La

TE
Libertad – marzo 2014.

IO
BL
BI
PROBLEMA
¿Qué características farmacognósticas y qué concentración de flavonoides
totales tiene el fruto de Prunus serotina Ehrhart (capulí) proveniente del
distrito de Agallpampa, provincia de Otuzco, región La Libertad?
HIPÓTESIS
Implícita
OBJETIVOS
 Determinar las características farmacognósticas del fruto de Prunus
serotina Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de Agallpampa,
provincia de Otuzco, departamento La Libertad.
 Cuantificar los flavonoides totales presentes en el fruto de Prunus
serotina Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de Agallpampa,
A
provincia de Otuzco, departamento La Libertad.
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
II. MATERIAL Y METODO
1. MATERIAL
Material Biológico:
Se utilizará el fruto de Prunus serotina (capulí) proveniente del
distrito de Agallpampa, provincia de Otuzco, región La Libertad,
recolectados en el mes de marzo del 2014.
A
IC
Materiales de Laboratorio:
M
UI
 Material de vidrio de uso común
Q
O
 Mortero y pilón de metal
BI

Y
Tubos de ensayo con tapa rosca de capacidad de 10 mL
IA
 Espátula de acero inoxidable

AC

RM
Papel filtro Whatman N° 01

FA
 Papel aluminio 8 m x 0,30 m.

DE
Solventes:
CA
 Agua destilada.
TE
 Diclorometano Merck para análisis.

IO
BL
 Cloroformo Merck p.a.

BI
 Alcohol etílico de 96º GL.
 Alcohol metílico, calidad Merck
 Hidrato de cloral
 Éter de petróleo
 Éter dietílico
Reactivos:
 Ácido acético glacial 99,8% de pureza
 Ácido clorhídrico 37% de pureza
 Ácido nítrico 65% de pureza
 Ácido sulfúrico 98% de pureza
 Anhídrido acético 98% de pureza
A
 Cloruro férrico hexahidratado 97% de pureza
IC
M
 Cloruro de mercurio (II) 99,5% de pureza
UI
Q
 Cloruro de Sodio 99,5% de pureza
O
 Hidróxido de sodio 98% de pureza BI
Y
IA
 Magnesio metálico
AC
 Yoduro de bismuto
RM
 Gelatina from porcin skin

FA

DE
Tolueno 99,5% de pureza

CA
Yoduro de potasio 99% de pureza

TE
Equipos:
IO
 Balanza Triple Brazo

BL
BI
 Balanza Analítica
 Estufa
 Estereoscopio
 Espectrofotómetro
 Horno Mufla
 Tamiz
2. MÉTODO
A. De la droga vegetal
a) Recolección
Se recolectó frutos maduros de la especie objeto de estudio de una
misma población en el mes marzo del 2014, período de maduración
A
del fruto, en el distrito de Agallpampa, provincia de Otuzco región La
IC
M
Libertad.
UI
Q
b) Selección
O
BI
Y
Una vez realizada la recolección de la muestra se procedió a hacer la
IA
selección de la materia vegetal con el objetivo de realizar una

AC
RM
separación de las partes deterioradas y evitar la mezcla con otra

FA
especie.
DE
c) Identificación taxonómica
CA
TE
La planta seleccionada, se llevó al Herbario Truxillensis de la

IO
Universidad Nacional de Trujillo para su identificación Taxonómica.

BL
BI
d) Desecación
Para evitar cualquier tipo de alteración que pudiera afectar a la
composición de la planta, la droga fue convenientemente desecada.
Los epicarpios seleccionados se colocaron sobre papel kraft en un
lugar fresco y seco durante 24 horas. Luego se pasó a bolsas hechas de
papel kraft y se llevó a estufa a una temperatura de 40 ºC, durante
aproximadamente 48 horas.
e) Molienda
Una vez desecado el material vegetal, se procedió a su molienda en
mortero de porcelana hasta tamaño de partícula adecuado. El material
así pulverizado, se almacenó adecuadamente en frascos ámbar en un
A
lugar desprovisto de humedad y luz directa, hasta su posterior
IC
M
utilización.
UI
Q
Caracterización macromorfológica11
O
f)
BI
Y
Se llevó acabo analizando los siguientes caracteres: Forma, textura,
IA
AC
superficie, color, olor, condición y dimensiones; los cuales fueron

RM
contrastados con las bibliografías correspondientes.

FA
g) Determinación de materias extrañas11,12,13

DE
CA
Se pesó 1 g de droga, se colocó en una placa petri y con la ayuda del

TE
estereoscopio se procedió a separar la materia extraña manualmente.

IO
Pesar el material separado y determinar su porcentaje en base al peso

BL
BI
de la muestra ensayo.
Los límites para las materias extrañas, se establecen en las
monografías o especificaciones de calidad de cada droga en particular.
10
El porciento de materia extraña ( ) se calcula mediante la fórmula
siguiente:
( )
Donde:
Masa inicial de la muestra de ensayo (g).
A
IC
Masa de materia extraña (g).
M
UI
Factor matemático para los cálculos.
Q
O
h) Determinación de humedad 11,12,13
BI
Y
 Método Gravimétrico:
IA
AC
Este análisis se realizó por triplicado. Se colocó la cápsula durante

RM
al menos 1 hora en la estufa a la temperatura de secado del

FA
producto. Empleando pinzas, se trasladó la cápsula al desecador y

DE
se dejó enfriar durante 30 min. Luego se pesó la cápsula en una

CA
TE
balanza analítica con una aproximación de 0,1 mg.

IO
Se pesó 0,5 g de muestra previamente homogeneizada y se colocó

BL
BI
la muestra con la cápsula en la estufa a la temperatura y tiempo
recomendado, 105ºC x 3 horas.
Con una pinza se sacó la cápsula con la muestra de la estufa y se
llevó a enfriar en desecador durante 30min.
Se repitió el procedimiento de secado por una hora adicional,
volviéndose a pesar, hasta que se obtuvo una masa constante.
11
( )
Donde:
Hg = Pérdida de masa por desecación (%)
Masa de la cápsula con la muestra de ensayo (g).
Masa de la cápsula con la muestra de ensayo desecada (g).
A
IC
Masa de la cápsula vacía (g).
M
UI
Factor matemático para los cálculos.
Q
O
i) Determinación de cenizas totales11,13,14,15BI
Y
IA
Se pesó de 0,5 g de la droga pulverizada y tamizada con una

AC
RM
desviación permisible de 0,5 mg en un crisol de porcelana

FA
previamente tarado. Se calentó suavemente la porción de ensayo

DE
aumentando la temperatura hasta carbonizar y posteriormente se

CA
incineró en un horno mufla a temperatura de 700 a 750 °C durante 2 h.

TE
Se enfrió el crisol en una desecadora a temperatura ambiente y se

IO
BL
pesó, repitiéndose el proceso hasta que dos pesadas sucesivas no

BI
difieran en más de 0,5 mg por gramo (masa constante).
Para obtener la masa constante los intervalos entre calentamiento y
pesada fueron de 30 min. El residuo presentó trazas de carbón, se le
añadió unas gotas de solución de peróxido de hidrógeno concentrado,
y se calentó hasta evaporar los solventes. Al enfriar el crisol el residuo
debe ser de color blanco o casi blanco.
12
La cantidad de cenizas totales ( ) en base anhidra se calcula por la
fórmula siguiente:
( )
Donde:
Cenizas totales en base hidratada.
A
IC
Masa del crisol vacío (g).
M
UI
Q
Masa del crisol con la muestra de ensayo (g).
O
BI
Masa del crisol con la ceniza (g).
Y
IA
AC
100 = Factor matemático para los cálculos.

RM
% humedad.
FA
DE
j) Determinación de sustancias solubles11,13,14,15

CA
Se basa en la extracción de las sustancias en agua, alcohol o una

TE
mezcla hidroalcohólica, mediante maceración y evaporación hasta

IO
BL
sequedad de una alícuota del extracto.

BI
Procedimiento:
Se pesó 4 muestras de 5 g de la droga previamente pulverizada y
tamizada, luego se transfirió a un frasco cónico con tapa de 250 mL,
se añadió 100 mL de alcohol de 30º GL, 50º GL, 70º GL y agua a cada
frasco respectivamente a temperatura ambiente, respectivamente, se
agitó durante 6 h y se dejó en reposo hasta el día siguiente;
13
posteriormente se agitó 30 min, se dejó reposar alrededor de 30 min;
después se filtró por papel. Finalmente, se evaporó a baño maría una
alícuota de 20 mL, se desecó a 105 °C en una estufa durante 3 h, se
dejó enfriar y posteriormente se pesó.
El porcentaje de sustancias solubles en base anhidra (SS) se calculó
mediante la fórmula siguiente:
A
IC
( )
( )
M
UI
Q
Donde:
O
H = Humedad de la muestra (%). BI
Y
IA
AC
R = Residuo de la muestra (g).

RM
M = Masa de la muestra (g).

FA
DE
500 y 100 = Factores matemáticos para los cálculos.

CA
El ensayo se realizó por duplicado. Se informó el promedio de las dos

TE
determinaciones del porciento de sustancias solubles.

IO
BL
BI
14
k) Tamizaje Fitoquímico de la droga: “Prueba de la Gota”13,14,15,16
Se pesó 1 g del material de estudio, y se le agregó 10 mL del solvente
(para extracto Diclorometánico, Etanólico, Acuoso ácido y Acuoso).
Se mantuvo a reflujo controlado por 10 minutos en baño maría. Luego
se dejó enfriar y se filtró. Finalmente se realizó los ensayos
correspondientes para cada extracto.
A
IC
1. Extracto diclorometánico: Se identificó compuestos de muy baja
M
UI
polaridad como: Esteroles, Quinonas.
Q
O
a. Ensayo de Liebermann-Burchard: Se midió X gotas del
BI
Y
extracto y se agregó X gotas de Anhídrido acético, XX gotas
IA
AC
de Ácido Acético y I gota de ácido sulfúrico concentrado y se

RM
mezcló suavemente. La reacción es positiva si aparece

FA
coloración azul, verde o naranja.

DE
b. Ensayo de Bortranger: Se midió X gotas del extracto y se

CA
llevó a sequedad, luego se agregó XX gotas de tolueno y XX

TE
IO
gotas de NaOH 10 %. Se agitó mezclando las fases y se dejó

BL
en reposo hasta su ulterior separación. Si la fase acuosa

BI
alcalina (superior) se coloreó de rosado o rojo, el ensayo se
consideró positivo.
2. Extracto etanólico: Se identificó compuestos de polaridad muy
variada, como: Esteroides, Alcaloides, Flavonoides y Taninos.
15
a. Ensayo de Liebermann-Burchard: se midió X gotas del
extracto y se llevó a sequedad en baño de agua. Luego se
agregó X gotas de Anhídrido acético, XX gotas de Ácido
Acético y I gota de ácido sulfúrico concentrado y se mezcló
nuevamente. La reacción es positiva si aparece coloración
azul, verde o naranja.
A
b. Ensayo de Shinoda: se midió X gotas del extracto, se agregó
IC
M
limadura de magnesio seguido por gotas de HClcc., las
UI
Q
coloraciones roja (flavonas), roja a crimson (flavonoles),
O
BI
crimson a magenta (flavanonas) y algunas veces azul o verde,
Y
son consideradas positivas.
IA
AC
c. Ensayo de Tricloruro férrico: se midió X gotas del extracto y

RM
luego se añadió II gotas de Cloruro Férrico, la aparición de un

FA
color azul-negro, nos indica la presencia de Tanino derivados

DE
del Ácido Gálico y la aparición de un color verde indica la

CA
presencia de Taninos derivados del Catecol.

TE
IO
d. Ensayo de Gelatina: se midió XX gotas del extracto y se llevó

BL
BI
a sequedad en baño de agua y el residuo se redisolvió en XX
gotas de agua; luego se añadió I gota de solución reactiva de
gelatina 1 %. Un precipitado blanco nos indica la presencia de
Taninos.
16
e. Ensayo de Dragendorff: se midió XX gotas del extracto y se
llevóa sequedad en baño de agua y el residuo se redisolvió con
XX gotas de solución de ácido clorhídrico al 1 %. Luego se
agregó II – III gotas de reactivo. Este reactivo (yoduro de
bismuto y potasio) da con los alcaloides en solución
débilmente acidulada, precipitados de color rojo o anaranjado.
A
f. Ensayo de Mayer: se midió XX gotas del extracto y se llevó a
IC
M
sequedad en baño de agua y el residuo se redisolvió en XX
UI
Q
gotas de solución de ácido clorhídrico al 1%. Luego se agregó
O
BI
III – IV gotas de reactivo. Este reactivo da con casi todas las
Y
soluciones de alcaloides, precipitados de color blanco, blanco
IA
AC
amarillento o amarillo limón claro.

RM
3. Extracto acuoso - ácido: Se identificó compuestos básicos, como:

FA
Alcaloides.
DE
CA
a. Ensayo de Dragendorff: se midió XX gotas del extracto y se

TE
agregó II a III gotas de reactivo. Este reactivo (yoduro de

IO
BL
bismuto y potasio) da, con los alcaloides en solución

BI
débilmente acidulada, precipitados de color rojo o anaranjado.
b. Ensayo de Mayer: se midió XX gotas del extracto y se agregó
III – IV gotas de reactivo. Este reactivo da con casi todas las
soluciones de alcaloides, precipitados de color blanco, blanco
amarillento o amarillo limón claro.
17
c. Ensayo de Wagner: se midió XX gotas del extracto y agregar
II – III gotas de reactivo. Este reactivo es muy sensible y da
con los alcaloides, precipitados floculentos que varían del
color café claro al rojo o pardo oscuro.
4. Extracto acuoso: Se identificó compuestos de alta polaridad,
como: Flavonoides, Leucoantocianidinas, Saponinas, Taninos.
A
IC
a. Ensayo de Shinoda: se midió XX gotas del extracto y se llevó
M
UI
a sequedad en baño de agua y el residuo se redisolvió en XX
Q
O
gotas de solución de etanol, luego se agregó unos trocitos de
BI
cinta de magnesio seguido por gotas de HClcc; las
Y
IA
coloraciones roja (flavonas), roja a crimson (flavonoles),

AC
crimson a magenta (flavanonas) y algunas veces azul o verde,

RM
son consideradas positiva.

FA
DE
b. Ensayo de Rosenhein: se midió XX gotas del extracto y se

CA
llevó a sequedad; luego se agregó X gotas de solución de ácido

TE
clorhídrico La reacción es 2N/1-propanol. Se hirvió de 15 – 30

IO
BL
min. La aparición de una coloración roja en la fase acuosa, nos

BI
indica la presencia de leucoantocianidinas.
c. Ensayo de Espuma: se midió XX gotas del extracto. Se agitó
vigorosamente por 30 seg., se esperó 15 min. en reposo. La
persistencia de la espumo nos indica la presencia de saponinas.
18
d. Ensayo de Gelatina: se midió XX gotas del extracto y se
añadió I gota de solución reactiva de gelatina 1 %. Un
precipitado blanco nos indica la presencia de Taninos.
l) Extracción y Cuantificación Espectrofotométrica de Flavonoides
Totales.17,18,19
Extracción de los Flavonoides Totales por Soxhlet:
A
IC
Para la extracción de flavonoides totales se colocó 10 g. de muestra,
M
UI
la cual se humectó con 20 mL de etanol al 50 % V/V por 24 h y se
Q
O
trasladó la muestra al cartucho de extracción del equipo Soxhlet.
BI
Y
Luego se adicionó 100 mL de ácido sulfúrico al 10 % P/V y 100 mL
IA
AC
de etanol al 50 % V/V en el balón de 500 mL. El tiempo de

RM
extracción se contó a partir del momento en el cual la mezcla de

FA
solventes del balón empezó a hervir. Después de 2 h de extracción,

DE
cada una de las muestras se enfrió y se filtró con ayuda de una bomba
CA
de vacío. El residuo se lavó con 150 mL de etanol al 50 % V/V para

TE
IO
finalmente desecharlo; se evaporó el filtrado en baño maría hasta la

BL
mitad del volumen inicial, se enfrió sobre baño de hielo durante 1 h,

BI
luego se filtró, lavando el precipitado formado con cuatro porciones
de 10 mL de agua destilada helada. Se eliminó el filtrado y los
lavados, y el residuo tanto del filtro como del recipiente se lavó con
agua helada, el residuo se llevó a estufa a 40 °C, luego se disolvió
con 70 mL de etanol al 70% V/V calentando previamente a 50 °C, la
19
solución se pasó a una fiola de 100 mL siendo aforada con etanol al
70% V/V.
Purificación de flavonoides totales:
Llevar el extracto etanólico a baño maría hasta disminuir
aproximadamente a 50 % del volumen, enfriar y llevar a refrigeración
durante 1 hora.
A
Filtrar el extracto etanólico refrigerado al vacío sobre embudo büchner
IC
M
previamente acondicionado a una temperatura menor a 15 ºC, luego
UI
Q
lavar el residuo con 3 volúmenes sucesivos de 50 mL de agua
O
destilada helada. BI
Y
Llevar el papel filtro que contiene los flavonoides totales, en forma de
IA
AC
cristales, a la estufa a 40 ºC durante 2 h.

RM
Solubilizar los cristales obtenidos con 100 mL de etanol de 96 ºGL y

FA
100 mL de agua destilada y llevar a baño maría hasta disminuir a 50

DE
% del volumen y repetir los pasos anteriores por 3 veces hasta obtener
CA
los cristales purificados.

TE
IO
BL
BI
20
m) Cuantificación de Flavonoides Totales Expresados como
Quercetina
Preparación de solución patrón
Como patrón se pesó 80 mg de Quercetina, y se disolvió con c.s.p.
100 mL de etanol al 70 % V/V, para obtener una concentración de
800 ppm.
A
IC
M
80 mg quercetina x = 100 mL
UI
Q
O
Preparación de soluciones diluidas de la muestra patrón para la
curva de calibración
BI
Y
IA
AC
De la Solución Patrón se midió volúmenes de 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0;

RM
1,2 ml y se aforó a 100 ml con etanol de 70 % V/V, para obtener

FA
concentraciones de 1,6; 3,2; 4,8; 6,4; 8,0; 9,6 ppm respectivamente.

DE
A continuación se realizó 3 lecturas de absorbancias de las

CA
concentraciones conocidas, en el espectrofotómetro UV-Visible a una

TE
longitud de onda de 256 nm para obtener la ecuación de la recta.

IO
BL
Preparación de la Solución Blanco:

BI
Se preparó etanol a 70 % V/V como solución blanco, se midió una
alícuota de 3 mL aproximadamente para la calibración del
espectrofotómetro UV-Visible.
21
Preparación de la solución problema
- De la muestra que forma parte de la solución problema se toma un
volumen de 5 mL y aforar a 100 mL con etanol al 70 °G.L., se
realizó una segunda dilución tomando un volumen de 1 mL y
aforar a 50 mL; de éste aforo se realizaron 6 lecturas de
absorbancias a 256 nm en el espectrofotómetro UV-Visible .
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
22
III. RESULTADOS
Tabla 1: Características organolépticas del epicarpio de Prunus serotina
Ehrhart (capulí).
CARACTERÍSTICAS
RESULTADOS
ORGANOLÉTICAS
Textura Firme
A
Superficie Lisa
IC
M
Color Morado negruzco
UI
Q
Olor Agradable
O
Sabor
BI
Ligeramente acida
Y
1,2 cm. de largo y 1,4 cm. de ancho
IA
Dimensiones
AC
RM
Tabla 2: Parámetros farmacognósticos del epicarpio de Prunus serotina

FA
Ehrhart (capulí).
DE
CA
PARÁMETROS RESULTADOS (%)

TE
FARMACOGNÓSTICOS PROMEDIO
IO
BL
Humedad relativa 22,6

BI
Humedad residual 6,0
Materias extrañas 2,0

Sustancias solubles
15,0
(por reflujo)
Cenizas totales 0,81
23
Tabla 3: Tamizaje fitoquímico del epicarpio de Prunus serotina Ehrhart
(capulí).
ENSAYOS METABOLITOS MUESTRA RESULTADO

Extracto diclorometano
Liebermann- Triterpenos/esteroles Droga -
Burchard
Bornträger Quinonas Droga -
Extracto etanólico
A
IC
Liebermann- Triterpenos/esteroles Droga -
M
Burchard
UI
Bornträger Quinonas Droga -
Q
O
Shinoda Flavonoides Droga +
Gelatina Taninos BI
Droga +
Y
Cloruro férrico Polifenoles Droga +
IA
AC
Espuma Saponinas Droga -

RM
Dragendorf Alcaloides Droga -

Mayer Alcaloides Droga -
FA
Extracto acuoso acido

DE
Dragendorf Alcaloides Droga -

CA
Mayer Alcaloides Droga -

TE
Wagner Alcaloides Droga -

IO
Extrato acuoso
BL
Shinoda Flavonoides Droga +

BI
Espuma Saponinas Droga -

Rosenhein Leucoantocianinas Droga +
Gelatina Taninos Droga +
Leyenda: + : Positivo
- : Negativo
24
Tabla 4: Cuantificación de flavonoides totales expresados como quercetina del
epicarpio de Prunus serotina Ehrhart (capulí) mediante espectrofotometría UV-
visible.
Gramos de droga Contenido de flavonoides

totales
100 g 0,29 g
expresados como quercetina
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
25
IV. DISCUSION
El estudio farmacognóstico, la identificación de fitoconstituyentes y el análisis físico-
químico del extracto de una droga vegetal; permiten agrupar parámetros para
identificarlos o bien para establecer su origen.
En la tabla 1 se muestra las características organolépticas las cuales son olor agradable,
sabor ligeramente ácido, color morado negruzco, superficie lisa, dimensiones de 1,2 cm
A
de largo, 1,4cm. de ancho, estos coinciden con la literatura obtenida y cumplen con los
IC
M
parámetros de calidad.
UI
Q
O
Con respecto a la superficie lisa se le considera como un indicador de fruto fresco y un
BI
Y
factor determinante de su aceptabilidad; su color se debe a la concentración de
IA
antocianidinas presente en el fruto de esta especie; en relación al olor se caracteriza por

AC
RM
la presencia de compuestos como ésteres, cetonas, alcoholes, aldehídos y terpenos20,21.

FA
En la tabla 2 el porcentaje de humedad relativa de 22,6. El proceso de secado del

DE
material vegetal fue satisfactorio y de buena calidad, ya que la textura de las cascaras
CA
permitió su adecuada pérdida de agua sin alterar la estabilidad de los metabolitos

TE
IO
secundarios. El porcentaje de humedad residual de la droga en estudio fue del 6 %.

BL
BI
Según farmacopea el rango oscila entre 8 y 14%, los valores altos en el contenido de
humedad (> 14 %) ocasiona el deterioro del material vegetal almacenado, con pocas
excepciones como en cortezas, tallos y raíces, nuestra droga cumple con los parámetros
técnicos presentes en la farmacopea 22.
26
El 2 % de la muestra fue equivalente a las materias extrañas, encontrando que estos
están dentro de los rangos normales. Se entiende por materias extrañas aquellas partes
de la droga que no corresponden a las exigencias que señala la monografía en cuanto a
color, tamaño, estado y grado de pulverización, mezclas de otras partes de la planta o de
otras plantas, como el polvo, arena, piedra y otras sustancias minerales23.
El porcentaje de sustancias solubles fue de 15 %; observando que la muestra colocada a
reflujo da un mayor porcentaje, debido a que el calor acelera la reacción y así se
A
IC
extrae una mayor cantidad de sustancias solubles.
M
UI
Q
El porcentaje de cenizas totales, fue de 0,81 % el cual está dentro del rango según la
O
BI
Norma Ramal Cubana. Las cenizas totales permiten determinar la cantidad de materia
Y
IA
remanente después de la ignición: cenizas fisiológicas, derivados de los tejidos de la

AC
planta y cenizas no fisiológicas, que son el residuo después de la ignición de la materia

RM
extraña adherida a la superficie de la droga. Cuando los valores obtenidos para las
FA
cenizas totales son elevadas (>5%), es necesario conocer si las mismas están
DE
compuestas por metales pesados.

CA
TE
En la tabla 3 se muestra los resultado obtenidos en el Tamizaje Fitoquímico del

IO
BL
epicarpio de Prunus serotina Ehrhart (capulí) y se observó la presencia de flavonoides

BI
mediante la reacción de Shinoda.
En la Tabla 4 se observa que 100 g de epicarpio de Prunus serotina Ehrhart (capulí)
contienen 0,29 g de flavonoides totales expresados como quercetina. La cuantificación
se llevó a cabo mediante espectrofotometría UV/Visible a 256 nm, debido a que todos
lo flavoniodes en etanol en etanol presenta una banda más o menos intensa a 200-
270nm.Los flavonoides se extraen de forma eficiente con alcoholes de baja masa
molecular, en particular metanol y etanol 23.
27
V. CONCLUSIONES
1) Las características organolépticas del fruto Prunus serotina Ehrhart
(capulí) son textura firme superficie lisa, color morado negruzco, olor
agradable, sabor ligeramente ácida, dimensiones 1,2 cm de largo 1,4 cm
de ancho.
2) Los parámetros farmacognósticos del epicarpio son humedad relativa
A
22,6 %, humedad residual 6,0 %, materias extrañas 2,0 %, sustancia
IC
M
solubles 15 % y cenizas totales 0,81 %
UI
Q
3) En el epicarpio de la especie estudiada se encuentran flavonoides en un
O
porcentaje de 0,29 %. BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
28
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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Varela.2012. La Habana. Cuba. pp:122-127

BL
BI
32
VII. ANEXOS
IDENTIFICACION TAXONOMICA EN EL HERBARIO TRUXILLENSIS
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
33
SELECCIÓN Y DESECACIÓN DE LA MUESTRA
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
FIG. 1: Pelado de capulí (se separó el hollejo)
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
FIG. 2: Se extendió en papel kraft y se puso a secar cuidando

que no le dé la luz directamente. Luego se guardó en sobres y
se llevó a estufa para terminar el secado.
34
CARACTERIZACIÓN MACROMORFOLÓGICA
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
FIG. 3: Se observa características físicas como color,

RM
olor apariencia, dimensiones físicas.

FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
35
DETERMINACIÓN DE CENIZAS TOTALES
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
FIG 4: Se pesó 0.5 g de la muestra pulverizada.

RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
FIG 5: Se carbonizo las muestras.
36
A
IC
M
UI
Q
O
BI
FIG 6: Se llevó a mufla a temperatura de 700 a 750°C
Y
IA
durante 2h.
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
FIG 7: Muestra incinerada
37
TAMIZAJE FITOQUÍMICO
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
FIG 8: Los extractos utilizados son agua, alcohol, acuoso

ácido y diclorometano.
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
FIG 9: Se agrega los extractos a cada frasco respectivamente.
38
A
IC
M
FIG 10: Utilización de reactivos
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
FIG 12: Reacción positiva a tricloruro férrico.
39
A
IC
M
UI
Q
FIG 13: Reacción positiva a rosemhein.
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
FIG 14: Reacción positiva a shinoda.
40
Cuantificación de Flavonoides Totales del extracto fluido de Prunus serotina

Ehrhart (capulí) mediante espectrofotometría UV-visible.
Curva de calibración para patron Quercetina

1.2
y = 0.0793x - 0.0192
1.0
R² = 0.999
0.8
Absorbancia
0.6
Series1
0.4
A
Lineal (Series1)
IC
0.2
M
0.0
UI
0.0 5.0 10.0 15.0
Q
CC (ug/mL)
O
BI
Y
IA
Concentracion Flavonoides Totales del extracto fluido de Prunus serotina Ehrhart

AC
(capulí) mediante espectrofotometría UV-visible.en la muestra problema

RM
# NOMBRE ABS<256NM> QUERCETINA(UG/ML)

FA
1 Flavonoides Capulí 0.281 3.7919

DE

CA

TE

IO

BL

BI
Promedio 0.277 3.7393
41
Concentración de Flavonoides Flavonoides Totales del extracto fluido de Prunus

serotina Ehrhart (capulí) mediante espectrofotometría UV-visible.
W Papel filtro = 0,467 g
W Papel filtro + flavonoides = 0,542 g
W Flavonoides = 0,075 g
X Promedio = 3.7393µg
3.7393447296µg----------------- 1mL
A
IC
x ----------------- 50 mL
M
UI
x = 186.96723648 µg/mL
Q
O
BI
Y
186.96723648 µg/mL---------- 5 mL
IA
AC
y ---------------- 100 mL
RM
y = 3739.3447296µg/mL
FA
3739.3447296µg/mL---------- 0.016g
DE
z --------------- 0.075 g
CA
z = 17528.17842 µg/mL
TE
IO
17528.17842µg/mL 60 g Droga capulí

BL
X 100 g Droga capulí

BI
X = 29213.6307 µg
X = 0.029 % Quercetina / 100 g de Capulí
42

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Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y

“Características farmacognósticas y cuantificación de flavonoides totales del

fruto de Prunus serotina Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de

Agallpampa, provincia de Otuzco, región La Libertad–marzo 2014”

Villanueva León Gesica Katherine

Zavaleta Delgado Rosmery Jobita

 Dr. Venegas Casanova, Edmundo Arturo

Dando cumplimiento a lo establecido por reglamentos de trabajos de investigación

de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo,

sometemos a vuestra consideración y elevado criterio profesional el presente

informe de Investigación titulado:

“Características farmacognósticas y cuantificación de flavonoides totales del

Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones

cometidos en la elaboración del presente trabajo, nos sometemos a vuestro

Trujillo, Diciembre del 2014

Mg. Roger Rengifo Penadillos Dr. QF. Edmundo A. Venegas Casanova

Por darnos la sabiduría necesaria para

lograr satisfactoriamente este trabajo de

investigación y porenseñarnos a valorar la

Por depositar su confianza en cada uno de

nosotros, brindándonos su apoyo

incondicional y económico para este trabajo

de investigación e incentivarnos a seguir

adelante y no dejarnos vencer en la vida.

Que siempre estuvieron presentes

para apoyarnos en todo lo que

necesitábamos así como también

brindándonos su amistad desinteresada.

JURADO CALIFICADOR .............................................................................................. iii

II. MATERIAL Y METODO ...................................................................................... 7

III. RESULTADOS ..................................................................................................... 23

IV. DISCUSION .......................................................................................................... 26

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .................................................................. 29

VII. ANEXOS ............................................................................................................... 33

Se realizó el presente trabajo de investigación, con el objetivo de contribuir al

estudio de las características farmacognósticas y cuantificar los flavonoides totales

del fruto de Prunus serotina Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de

Agallpampa, provincia de Otuzco, región La Libertad – marzo 2014. Se trabajó con

el epicarpio Prunus serotina Ehrhart (capulí), se determinó sus características

farmacognósticos estudiados se encontró que éstos están dentro del rango de

presencia de flavonoides totales en un porcentaje de 0,29%.

Palabras claves: Prunus serotina Ehrhart, flavonoides, cuantificación.

The present research, with the object of contributing to the study of

farmacognósticas characteristics and quantify the total flavonoids of fruit

Prunus serotina Ehrhart (capulí), from Agallpampa district, Otuzco province,

La Libertad region was performed - March 2014. We worked with the

epicarpio Prunus serotina Ehrhart (capulí), its macromorphological

total flavonoids in a percentage of 0.29% was identified.

Keywords: Prunus serotina Ehrhart, flavonoids, quantification.

Cuando hablamos de plantas, pensamos en aquellas que podemos comer, usar

como combustible o como medicina o para la construcción de viviendas. Pero

sabemos que toda existencia en el planeta depende de las plantas1.

Es indudable la importancia de las plantas para la medicina moderna, durante

mucho tiempo los remedios naturales y las plantas medicinales fueron el

cada zona donde habitan2.

En los últimos años un 80% de la población mundial ha recurrido a las

plantas medicinales para tratar diversas enfermedades o afecciones, porque