Extracción de Clorofila

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Cuestionario extracción de espinaca

1. Explique brevemente el fundamento de la cromatografía

La Cromatografía es una técnica analítica que se utiliza para la separación, determinación e


identificación de los componentes en mezclas complejas. Hoy en día es muy utilizada en
laboratorios de criminología, farmacéuticos, etc. Debido que este método de separación es
el más fuerte y más completo para estos casos.
Para que este se pueda utilizar de buena manera, los componentes de la mezcla se
distribuyen en 2 fases. La Fase estacionaria, se ubica fijamente en una columna y
corresponde a un sólido en el cual ocurre la absorción en su superficie, por otro lado
tenemos la Fase Móvil la cual mayoritariamente es un disolvente que puede estar en estado
gaseoso o líquido. La cromatografía comienza cuando una de las sustancias es más
fuertemente retenida por la fase estacionaria que la otra.

2. ¿Qué es y cuál es la fórmula de la sílica gel?

La sílica gel es una sustancia químicamente estable, presenta características porosas,


cristalinas, inertes, inodoras y no presenta toxicidad. También es insoluble en la mayoría de
las sustancias (excepto el Álcali y el Ácido fluorhídrico). Presenta una alta capacidad de
absorción, funcionamiento termal estable y una fuerza mecánica relativamente alta.
Su fórmula química molecular es SiO2 nH2O

3. Dibuje con un software apropiado las estructuras de la clorofila y el betacaroteno.


¿cuál molécula es apolar y cuál polar?

La clorofila es polar debido a la distribución desigual de electrones entre los átomos de


diferentes elementos, aparecen cargas ligeramente positivas (δ +¿¿)y ligeramente negativas (
δ −¿¿ )en distintas partes de la molécula.
El β−¿caroteno por su parte es apolar debido a que comparten electrones de manera más o
menos equitativa.
Figura 1: estructura de esqueleto de la clorofila, se forman por complejos de derivados de
porfirina que tienen un átomo central, como magnesio (Mg). Este compuesto es una
estructura macrocíclica asimétrica totalmente insaturada constituida por cuatro anillos de
pirrol, en el enlace C-R el sustituyente cambia respectos a la clorofila a y b. En la clorofila a
del anillo de porfirina que contiene un grupo metilo (CH 3 ) y en la clorofila b contiene un
grupo aldehído. Su fórmula es C55H72O5N4Mg
Programa utilizado: biomodel

Figura 2: Estructura 3D molecular de la clorofila. Las esferas gris corresponden a carbonos,


rojas a el oxígeno, azules a nitrógenos, blancas a los hidrógenos, verde al magnesio y fucsia
al sustituyente que te da característica de clorofila a ó b
Programa utilizado: biomodel

Figura 3: Estructura de esqueleto del β−caroteno. El betacaroteno es un carotenoide que


pertenece a las composiciones del isoprenoid, que son poliinsaturados con las propiedades
antioxidantes. La fórmula para el betacaroteno es C40H56 y puede existir como cis o
transisómeros.
Programa utilizado: biomodel
Figura 4: Estructura 3D molecular de la β−¿caroteno, las esferas gris representan a los
carbonos y las blancas a los hidrógenos.
Programa utilizado: biomodel

4. Sin recurrir a la cromatografía ¿de qué otra forma cree usted que sea posible extraer
el betacaroteno separado de la clorofila de las hojas de espinaca?
- La cromatografía es un método muy eficaz a la hora de extracción de β−¿caroteno, se
utilizó hexano para la extracción de este, sin embargo hoy en día existen otros métodos
tecnológicos como; extracción asistida con ultrasonido, extracción asistida con microondas,
extracción con solvente acelerado, y la extracción con fluidos supercríticos. Estos procesos
disminuyen el consumo de solvente y brindan un mejor rendimiento de extracción .

5. Si en un embudo de decantación un alumno mezcla dos disolventes inmiscibles entre sí


¿cómo saber cuál se deposita en la zona inferior y cuál en la superior del embudo?

A partir de la mezcla se dos disolvenes inmiscibles (distinta polaridad ) o se formarán dos


fases en el embudo de decantación, aquel que tenga una mayor densidad decantara
quedando en la zona inferior y por consiguiente el de menor densidad quedará en la zona
superior del embudo. Generalmente, uno de los disolventes es agua y el otro, un disolvente
orgánico poco polar, o inmiscible con agua.

6. ¿Cuál es la función del cloruro de calcio anhidro, por qué es necesario adicionarlo a la fase
orgánica? Nombre y escriba la fórmula de otras sustancias ocupadas en química orgánica
que cumplan la misma función que el cloruro de calcio.

El cloruro de calcio anhidro (CaCl2) es un agente desecante, estos se eligen dependiendo de


la sustancia que deseamos secar, pudiendo así ser de tipo ácidas, neutras o básicas. Entre
todos los agentes desecantes que existen los más frecuentes que suelen ser los desecantes
para desecadores y los desecantes para disoluciones. El cloruro de anhidro es un desecante
para disoluciones debido a su higroscopia el cual absorber el exceso de agua que pudo
haber quedado de la decantación.

Los desecantes más frecuentes:

Desecante para disoluciones


- sulfato de magnesio anhidro (MgSO4)
-sulfato de sodio anhidro (Na2SO4)
Desecantes para desecadores
-óxido de fósforo(V) (P2O5)
-hidróxidos de sodio o potasio (NaOH o KOH)
-gel de sílice (SiO2 tratado de manera especial)
- ácido sulfúrico (H2SO4)

7. ¿Por qué es necesario eluir la columna con diclorometano primeramente y luego acetona,
por qué no eluir solo con acetona?
Porque el diclorometano es una molécula apolar la cual disolverá al β−carotenodebido a
que ambas son apolares, quedando en la columna la clorofila que fue absorbida por la silica
gel, ambas polares; por consiguiente para retirara la clorofila de la columna se tendrá que
emplear un compuesto polar (acetona) para disolver logrando así la separación de la
clorofila y el β−carotenoa partir de la espinaca.

Si se aludiera solo con acetona se extraería la clorofila, pero para que se logre una
separación exitosa la fase estacionaria se debería cambiar a una molécula apolar para
absorber el β−caroteno.

8. Si usted quisiera obtener completamente seco y en estado sólido el betacaroteno


obtenido en el práctico ¿qué procedimiento haría a continuación?

Para poder obtener un buen resultado respecto al betacaroteno, en este caso luego de
realizar toda la obtención de este, lo que se podría hacer es el proceso llamado
Osmodeshidratación y secado, con aire caliente. Este mecanismo nos podría dar buenos
resultados de rendimiento de materia seca estable, siempre cuando se manipule cuidadosa
y protectoramente. A qué me refiero con eso, a cierta temperatura y tiempo.

9. A parte de hexano, ¿qué otro disolvente ocuparía en un comienzo de la columna


cromatográfica en términos generales?

Para saber qué disolvente se puede utilizar en la cromatografía es muy importante


incrementar la polaridad de la fase móvil o eluyente. Para estos casos este puede ser un
disolvente único o dos miscibles de distinta polaridad. A parte del hexano se pueden utilizar
otros disolventes con gran fuerza eluyente y que tengan bajos puntos de ebullición y
viscosidad, así permitiéndole moverse con mayor rapidez. Algunos de los más comunes
utilizados son el tetraclorometano, cloroformo, diclorometano, acetato de etilo, entre otros.

10. ¿Qué es la técnica HPLC (High-performance liquid chromatography)? Explique


brevemente.

Dentro de la cromatografía, el uso de la cromatografía líquida dió la posibilidad de


conseguir grandes aumentos en la eficacia de la columna disminuyendo el tamaño de las
partículas de los rellenos(su eficiencia depende del tamaño de la partícula de relleno y el
tamaño de la muestra que se utiliza).
La técnica de cromatografía de líquidos de alta resolución presenta una bomba por la
cual pasa la mezcla de analitos en un sistema disolvente(fase móvil), luego pasa a través de
la columna cromatográfica, donde se encuentra la fase estacionaria con un flujo específico.
La interacción entre los compuestos y las fases representan la base general de esta técnica.
Los disolventes más utilizados son el agua, el acetonitrilo y el metanol.

Bibliografía

Nivia Maria Streit ; Liana Pedrolo Canterle ; Marta Weber Canto ; Helen
Louise, Hychecki Hecktheuer . (junio 2005). The Chlorophylls. 10 de junio del
2019, de Scielo Sitio web: http://www.scielo.br/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0103-84782005000300043

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