Conceptos Básicos para El Estudio Histológico

CONCEPTOS BÁSICOS PÁRÁ EL ESTUDIO
HISTOLOGICO
PREPARECIÓN DEL TEJIDO:
1) FIJACIÓN: Mediante una sustancia química, habitualmente la FORMALINA (solución acuosa de

formaldehído al 37%) o una mezcla de estas, realizamos este primer paso que CONSERVA DE FORMA
PERMANENTE LA ESTRUCTURA DEL TEJIDO PARA TRATAMIENTOS POSTERIORES. El formaldehido no
altera la estructura tridimensional y las proteínas mantienen su capacidad de reaccionar con
anticuerpos específicos. Dicha propiedad es importante para las posteriores técnicas de
inmunocitoquímica (por ejemplo: marcar tipos de linfocitos). Sin embargo, la principal limitante, es
que NO REACCIONA CON LOS LÍPIDOS, por lo cual es un mal fijador de las membranas celulares. Las
muestras se extraen del organismo e inmediatamente se coloca el fijador. Después de la fijación la
muestra se lava y se deshidrata con soluciones alcohólicas. Los objetivos son:
- EVITAR EL METABOLISMO CELULAR
- EVITAR DEGRADACIÓN ENZIMÁTICA DE CÉLULAS Y TEJIDOS
- DESTRUIR MICROORGANISMOS PATÓGENOS
- ENDURECER EL TEJIDO
2) INCLUSIÓN EN PARAFINA: La muestra se infiltra con PARAFINA, la cual se endurece y permite realizar
cortes muy finos por una máquina llamada micrótomo.
3) TINCIÓN: La parafina es incolora, por lo cual debemos colorear el cote histológico. Se extrae la
parafina y rehidratamos el tejido. Los cortes resultantes se colocan sobre un portaobjetos,
inicialmente se tiñe con hematoxilina, se vuelve a deshidratar la pieza y finalmente se añade el
colorante de contraste, la eosina. Luego de la tinción, a la muestra se le coloca un adhesivo como:
resina.
La hematoxilina-eosina (H-E) es una tinción muy útil pero no permite ver de forma adecuada ciertos
componentes como: fibras elásticas, fibras reticulares, membranas basales y lípidos. Por lo tanto, para ver
estos componentes debemos recurrir a otros procedimientos de tinción (métodos selectivos) como: orceína
y fucsina-resorcina para fibras elásticas e impregnación argéntica para fibras reticulares y membranas
basales.
HISTOLOGIA- BIOFISICA. La Academia

Natalia Núñez 091006156
HISTOQUIMICA Y CITOQUIMICA:
HEMATOXILINA-EOSINA
La EOSINA ES UN COLORANTE ÁCIDO (carga negativa) → Reacciona con componentes catiónicos (con carga
negativa, básicos) de las células y los tejidos. A esta propiedad se le denomina acidófilia o eosinofilia
(afinidad por lo ácido). El citoplasma, filamentos citoplasmáticos y algunas fibras extracelulares se van a
teñir con este colorante.
La HEMATOXILINA ES UN COLORANTE BÁSICO (carga positiva) → Reacciona con componentes aniónicos

(con carga negativa, ácidos) de las células y los tejidos. A esta propiedad se le denomina basofilia (afinidad
por lo básico). El ARN, ADN, núcleo, nucléolo, RER, ribosomas y materiales extracelulares sulfatados
(matriz cartilaginosa) se van a teñir con este colorante.
METACROMASIA:
Cuando los tejidos se tiñen con una solución colorante básica
concentrada, como el azul de toluidina, las moléculas de colorante están
muy cerca y forman aglomerados. Las estructuras celulares y tisulares
con altas concentraciones de grupos sulfato y fosfato, como los gránulos
de heparina del mastocito o el RER del plasmocito exhiben
metacromasia. Por tanto el azul de toluidina aparece de color rojo muy
intenso cuando se tiña estos componentes.

REACTIVO DE SCHIFF (PAS):
La reacción de ácido periódico-reactivo de Schiff (PAS)
tiñe carbohidratos y macromoléculas con abundancia. Se
usa para demostrar presencia de glucógeno en las
células, moco, membrana basal del epitelio y fibras
reticulares del tejido conjuntivo.
INMUNOCITOQUÍMICA:
Los anticuerpos, o inmunoglobulinas, son glucoproteínas que se producen por los plasmocitos en respuesta a
un antígeno. En el laboratorio, los anticuerpos pueden extraerse de la sangre y asociarse con un colorante
fluorescente. Este colorante emite una luz que puede ser verde, amarilla o roja. Los anticuerpos pueden, por
lo tanto, unirse con el antígeno específico, y emitir una luz fluorescente cuando se observa con un
microscopio de fluorescencia. Esta técnica es muy utilizada para diferenciar tipos de linfocitos o proteínas
específicas presentes en una célula.

MICROSCOPÍA:
El poder de resolución es la capacidad de una lente de microscopio para obtener imágenes separadas de
objetos que están muy cerca unos de otros. La resolución depende del lente, de la longitud de onda de la luz,
del espesor del preparado, calidad de la fijación e intensidad de la tinción.
El poder de resolución del ojo humano, es decir, la distancia a la que deben estar dos objetos para que se
vean por separado es de 0,2mm. La función del microscopio es ampliar una imagen que estaría por debajo
del límite de resolución del ojo humano. Por lo tanto, la RESOLUCIÓN dependerá del microscopio utilizado,
de las lentes objetivo y el condensador. Se calcula con la siguiente ecuación:
= 1,4
Dónde:
d = Es el poder de resolución (en nm)
0,61 = Es la constante de proporcionalidad
= Es la longitud de onda de la luz utilizada proyectada por el microscopio (por lo general 0,5m para una
luz amarilla)
AN = Es la abertura numérica. Se calcula como el índice de refracción del medio que separa la muestra de la
lente objetivo (n) multiplicado por el seno de la mitad del ángulo limitado por los rayos que llegan a la lente
objetivo. El ancho máximo es 180° (el sen de 180° = 0, pero el sen de 90° = 1) con un valor máximo de 1. La
apertura numérica habitualmente viene especificada en el lente objetivo.
Si realizamos el cálculo del poder de resolución, el valor oscila en 0,217m
AUMENTO TOTAL = AUMENTO DEL OBJETIVO x AUMENTO DEL OCULAR

= 4 0 x 1 0 = 400
Los aumentos del objetivo dependen del fabricante, pero en general son x4, x10, x40 y x100. Mientras que el
aumento del ocular es x10.

MICROSCOPIÍA ÓPTICA DE CAMPO CLARO:
- Fuente luminosa: Es la lámpara en la base del microscopio para la iluminación de la muestra.

- Lente condensador: Concentra los rayos de luz para enfocar la muestra.
- Platina: Superficie sobre la que se coloca el portaobjetos.
- Lente objetivo: Primera lente, recoge la luz que ha atravesado la muestra y nos da una imagen
aumentada del objeto.
- Lente ocular: Segunda lente,
donde el observador puede ver
directamente la imagen
aumentada formada por la lente
objetivo.

Para que una muestra pueda examinarse con el microscopio de campo claro, debe ser lo suficientemente
fina para que la luz pase a través de ella.
La realización de un preparado histológico requiere de una serie de pasos que ya fueron abordados
anteriormente, que incluyen la recolección de la muestra y colocación en un portaobjetos. Sin embargo, en
cada paso pueden ocurrir “errores” en este proceso de preparación, mejor conocidos como ARTEFACTOS.
Los artefactos de una técnica aparecen cuando el preparado está terminado y se deben a que la fallos en la
metodología, en el equipo, las técnicas de coloración (fijaciones, reactivos y/o colorantes), por ello es
importante conocer los artefactos más comunes.
* Microscopio de campo oscuro: La lente objetivo no capta luz directa proveniente de la fuente luminosa. En
la práctica clínica se utiliza para la detección de cristales de la orina, como los de ácido úrico y oxalato y en la
identificación de bacterias específicas, como espiroquetas; en particular, Treponema pallidum, el
microorganismo causante de la sífilis.
*Microscopio de fluorescencia: Aprovecha la capacidad de ciertas moléculas de fluorescer bajo la luz

ultravioleta.
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (MET): El MET utiliza un haz

de electrones en lugar de un haz de luz como el microscopio óptico. Con lo
cual a partir de una muestra extraída con la misma técnica que para
microscopios ópticos pero mucho más refina, este tipo de equipos permite la
visualización de imágenes 2.000 -100.000 veces más pequeñas.

CRIOFRACTURA: es una técnica especial de preparación de muestras para microscopía electrónica de
transmisión. Rápidamente se congela el tejido y se coloca en el aparato de criofractura, que posee una
cámara de vacío, y se percute con el borde de una cuchilla o navaja. La fractura resultante de la membrana
plasmática produce dos superficies nuevas. La superficie de la membrana que atrás tiene el espacio
extracelular se llama cara E; la cara que tiene atrás el citoplasma se denomina cara P.
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB): El MEB muestra imágenes que

son tridimensionales y permiten ver la estructura superficial de una muestra
examinada. Permiten revelar estructuras anatómicas submicroscópicas. Se
distingue la superficie de las células, pero no las estructuras internas de las mismas
y su aumento no pasa de 20.000.


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CONCEPTOS BÁSICOS PÁRÁ EL ESTUDIO

1) FIJACIÓN: Mediante una sustancia química, habitualmente la FORMALINA (solución acuosa de

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La HEMATOXILINA ES UN COLORANTE BÁSICO (carga positiva) → Reacciona con componentes aniónicos

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Si realizamos el cálculo del poder de resolución, el valor oscila en 0,217m

AUMENTO TOTAL = AUMENTO DEL OBJETIVO x AUMENTO DEL OCULAR

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- Fuente luminosa: Es la lámpara en la base del microscopio para la iluminación de la muestra.

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*Microscopio de fluorescencia: Aprovecha la capacidad de ciertas moléculas de fluorescer bajo la luz

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (MET): El MET utiliza un haz

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MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB): El MEB muestra imágenes que

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