Nombre de la técnica Fundamento Aplicación

Enzimas de restricción -Presentan actividad endonucleasa, son de origen •Son una herramienta primordial para la ejecución de
bacteriano y cortan los enlaces fosfodiéster del ADN en diversos ensayos útiles en investigación clínica, desde la
una secuencia especifica denominada secuencia diana. Las determinación de polimorfismos de longitud de fragmentos
cuales estas enzimas sirven como herramienta de restricción.
biotecnológica surgió de la necesidad de cortar las largas
cadenas de ADN genómico para manipularse y analizarse •Así como en la construcción de vectores con ADN
en fragmentos más pequeños. recombinante y clonación de secuencias de ADN
provenientes de humano, virus, bacterias y demás
microorganismos de interés para la generación de
conocimiento o para su aplicación en el área de la medicina.
Vectores de colación - La introducción de un fragmento de ADN denominado •Este proceso puede emplearse para la producción de
inserto dentro de una molécula de ADN denominada proteínas eucariotas en bacterias (proteínas recombinantes),
vector, que puede replicarse de manera autónoma e como hormonas, antibióticos, vacunas.
independiente del genoma de la célula hospedera. El
resultado es la obtención de millones de copias de una •Generación de cultivos transgénicos resistentes a plagas o
molécula recombinante o clona molecular compuesta por sequías.
ADN proveniente del inserto y del vector.
• Producción de animales transgénicos capaces de producir
-Los vectores de clonación o vector molecular son en su leche proteínas recombinantes. así como para el
moléculas transportadoras que transfieren y replican establecimiento de librerías genómicas o genotecas, que han
fragmentos de ADN que llevan insertados mediante permitido secuenciar por completo el genoma humano y el
técnicas de ADN recombinante. Para que sirva de vector, de otros organismos.
una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el
fragmento de ADN que transporta.

Sondas • Las sondas son segmentos de ADN o ARN de cadena •Una sonda es una secuencia de ADN o ARN de cadena
sencilla marcados con moléculas reporteras, como enzimas simple que se utiliza para encontrar su secuencia
o radioisótopos, que permiten su fácil detección, es decir, complementaria en el genoma de una muestra.
su secuencia nucleotídica, es lo que le permitirá, entre
miles de fragmentos que forman parte del genoma de un ser •Pueden sintetizarse y purificarse con relativa facilidad por
humano, identificar “un solo gen” o “el fragmento de un instrumentos comerciales disponibles en la actualidad.
gen”. En términos generales las sondas se obtienen a partir de
síntesis química o de plásmidos, que se clonan con la sonda
 de interés. La especificidad de la síntesis de la sonda
Las técnicas de hibridación molecular se basan en el
Técnicas de hibridación: estudio de secuencias específicas del ADN o ARN tanto en
su identificación como para su eventual cuantificación.
Se parte de sondas que son secuencias de ADN o ARN
complementarias a aquellas que se quieren detectar.
Para localizar fragmentos específicos se utiliza la técnica de
hibridación de ácidos nucleídos.
Southerblot -Esta técnica se utiliza para determinar la presencia de un •La técnica de ha sido de gran utilidad para identificar genes
gen o fragmentos del ADN específicos en una mezcla de asociados con enfermedades de transmisión.
ácidos nucleicos previamente extraídos.
• Genética, e identificar mutaciones, como rearreglos,
elecciones y dosis génica en caso de portadores.

• También se utiliza para detectar polimorfismos en los

fragmentos de restricción de diversos genes.
Northerblot •Es una técnica que permite la identificación de •Permite observar el patrón de expresión de un gen
secuencias específicas de ARN, en general ARNm. particular entre tejidos, órganos, etapas de desarrollo,
niveles de estrés ambiental, infección por patógenos y
durante el tratamiento.

•La técnica se ha utilizado para mostrar la sobreexpresión de

oncogenes y la regulación negativa de los genes supresores
de tumores en células cancerosas en comparación con el
tejido "normal", así como la expresión de genes en el
rechazo de órganos trasplantados.
Slot/Dotblot Tras el aislamiento y separación de los ácidos nucleicos,
éstos se aplican directamente a la membrana sin •Sirve para la detecciones no sólo cualitativas (positivo o
separarlos, según su peso molecular; es decir, no se realiza negativo) sino también cuantitativas, utilizando como patrón
electroforesis. La fijación se hace generalmente con vacío y diluciones seriadas de concentraciones conocidas del
en un molde cuyo pocillo puede tener forma de punto (dot genoma que se está determinando.
blot) o ser lineal (slot blot).
Hibridación in situ Es una técnica de laboratorio que consiste en marcar una • Permite la localización de secuencias génicas a nivel
hebra sencilla de ARN o ADN denominada sonda y cromosómico, con lo que se pueden detectar translocaciones
permitir que se empareje con su secuencia complementaria y otras alteraciones cromosómicas, así como el estudio de
en el ARN o el ADN presente en una muestra de tejido o de expresión de genes (ARNm) a nivel celular y subcelular.
cromosomas. La sonda está marcada con una sustancia
trazadora química o radiactiva por lo que su unión puede
ser visualizada • Las principales aplicaciones son la identificación de
infecciones virales en tejidos, así como el mapeo
cromosómico.
Microarrays El método más utilizado es el de los microarrays de DNA, • Se usan para identificar genes cuya expresión se modifica
que permite el análisis simultáneo de la expresión de miles en respuesta a patógenos u otros organismos comparado la
de genes. Se marca el ARN o el ADN copia (cDNA) de una expresión génica de la célula infectada, con la no infectada.
población celular con fluorescencia o radioactividad, y se
usa esta preparación para hibridar con el ADN de la • Evaluación del tejido del genoma de diferentes especies.
micromatriz. Los microarrays de DNA permiten elaborar
mapas finos de transcripción y proporcionan información • Verifican la identificación de organismos en alimentos y
indirecta de los niveles de proteínas. cultivos.

• Detección de SNP
PCR punto final Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Permite la • La clonación de ADN para secuenciación, clonación y
amplificación de una secuencia especifica de ADN manipulación de genes, mutagénesis de genes.
mediante nucleótidos trisfosfatados y un ADN polimerasa
termoestable.Llevan a cabo la síntesis de la nueva cadena • Construcción de filogenias basadas enADN , o análisis
de ADN emparejando los desoxirribonucleótidos trifosfato funcional de genes.
con los desoxirribonucleótidos complementarios
correspondientes del ADN molde. • Diagnóstico y seguimiento de enfermedades hereditarias.

• Análisis de huellas genéticas para perfiles de ADN (por

ejemplo, en ciencias forenses y pruebas de parentesco ).

• Detección de patógenos en pruebas de ácidos nucleicos

para el diagnóstico de enfermedades infecciosas.
 • La PCR permite el aislamiento de fragmentos de ADN a
partir del ADN genómico por amplificación selectiva de una
región específica de ADN.
PCR tiempo real Una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real se •La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo
basa en la PCR punto final. Controla la amplificación de real se utiliza para la detección y cuantificación específicas
una molécula de ADN dirigida durante la PCR, es decir, en y sensibles de ácidos nucleicos diana.
tiempo real, y no al final, como en la PCR convencional.
Se añade un componente fluorescente que permite medir la
luz. A más luz, más cantidad del ADN detectado.
RT-PCR Esta técnica es útil para el análisis de la expresión del •Usos diagnósticos.- Se aplica para detectar rápidamente
transgén en el ARNm. Es una modificación de la PCR que ácidos nucleicos que son diagnósticos de, por ejemplo,
incluye una extracción de ARN, una retrotranscripción enfermedades infecciosas, cáncer y anomalías genéticas. Y
mediante transcriptasa inversa, la formación de un ADN de se implementa como una herramienta para detectar
doble cadena y, posteriormente, la PCR con primers enfermedades emergentes, tales como nuevas cepas de la
específicos para el transgén. Por último, se realiza el gripe , en pruebas de diagnóstico.
análisis del fragmento amplificado mediante electroforesis
en gel de agarosa. • Usos microbiológicos .- Es utilizada por los microbiólogos
que trabajan en los campos de la seguridad alimentaria, el
deterioro de los alimentos y la fermentación y para la
evaluación de riesgos microbianos de la calidad del agua
(agua potable y recreativa) y en la protección de la salud
pública.
Western blot • Este método permite analizar la expresión del transgén • Prueba de VIH, se usa como prueba confirmatoria.
en la proteína. La proteína transgénica se separa de la
mezcla proteica celular mediante la técnica de • Prueba definitiva para encefalopatía espongiforme bovina,
electroforesis en gel de poliacrilamida. Las proteínas “vacas locas”
separadas por peso molecular .Posteriormente, se añade un
anticuerpo marcado específico contra la proteína. La • Confirmación para la infección por Hepatitis B y la
proteína de interés se detecta por autorradiografía o infección por HSV-2 (Herpes Tipo 2).
fluorescencia
Inmunocitoquímica Implica el proceso de identificación selectiva de antígenos • Esta técnica utiliza principalmente fluoróforos para
(proteínas) en las células de una sección de tejido visualizar la ubicación de los anticuerpos.
explotando el principio de unión de anticuerpos
específicamente a antígenos en tejidos biológicos. •Es la aplicación más común de inmunotinción.
inmunofluorescencia Son técnicas observadas en luz de microscopía con un •Con pruebas de inmunofluorescencia, es posible
microscopio de fluorescencia y se utiliza principalmente en demostrar, en algunas mujeres infértiles,
microbiológicos muestras. Utiliza la especificidad de los
anticuerpos contra su antígeno para dirigir colorantes • La presencia de Acs contra los espermatozoides,
fluorescentes a objetivos específicos de biomoléculas
dentro de una célula y, por lo tanto, permite la •Identificación de carcinomas, enfermedad de Hodgkin,
visualización de la distribución de la molécula objetivo a leucemia, cancer de próstata, de mama, carcinoma renal y
través de la muestra. gastrointestinal.
ELISA • Este método permite analizar la expresión del transgén en •Se trata de un examen de laboratorio comúnmente usado
la proteína y se fundamenta en una reacción antígeno- para detectar anticuerpos en la sangre.
anticuerpo, entre un anticuerpo específico contra la
proteína que genera el transgén. Al añadir la mezcla
proteica, el anticuerpo reconoce la proteína de interés y,
mediante una serie de reacciones químicas, se forma un
metabolito detectable que genera un cambio de color. • Este
producto indica de manera indirecta la presencia de la
proteína, lo que permite su cuantificación