TRABAJO DE INVESTIGACIÓN DE INTRODUCION A LABORATORIO

Valores de referencia de células sanguineas

alores normales Hombres Mujeres

Eritrocitos 4,5-5,6 mill./µl 4,2-5,4 mill./µl

Reticulocitos 3-18/1.000 eritrocitos 3-18/1.000 eritrocitos

Leucocitos 4.000-11.000/µl 4.000-11.000/µl

Trombocitos 150.000-4000.000/µl 150.000-400.000/µl

Hemoglobina 14-18g/dl 12-16g/dl

Hematocrito 42-52% 37-47%

AVERIGUAR LOS FACTORES DE MULTIPLICACIÓN PARA OBTENER LOS

RESULTADOS PARA GLÓBULOS BLANCOS, GLÓBULOS ROJOS Y
PLAQUETAS

Para globulos blancos 50

Para globulos rojos 100

MEDIOS DE CULTIVO USADOS EN EL ÁREA DE BACTERIOLOGÍA,

MICOLOGÍA, UROLOGÍA

Bacteriología Micología Virulogia

Caldo sangre
Neumococos, estafilococos,
estreptococos
Caldo acida purpura bromo cresol
enterococos
Agar nutritivo
Todos los germenes excepto los
exigentes
Agar sangre
Neumococos, estafilococos,
estreptococos, haemophylus
medio de Thayer Martin Neisserias Medio de Sabourand –
Hongos
Medio de Levine Medio de Lewenstein –
enterobacterias Jensen –
Mycobacterias
Medio de Mac conkey Stone – brink–
Enterobacterias Micobacterias
Medio de acida purpura bromo cresol
enterococos
Medio de S.S.
Salmonellas – Shigellas.
Medio de Wilson Blair
Salmonellas
Medio bilis verde brillante
enterobacterias
Medio endo
Enterobacterias
Medio de Loefler
Corynebacterias
Medio de macleod
Corynebacterias
Medio de Bordet – Gengon
Bordetellas
Agar cetrimide
Pseudomonas
Medio de Baird – Parker
Estafilococos
Medio de Chapman
Estafilococos
Medio de Tioglicolato
Anaeróbicos
Medio de Brewer
Anaeróbicos
Medio Muller – Hintom
Neiseria y Antibiograma
Medio de Korthof
Leptospiras
Medio de Stuart
Para transporte de germenes
Caldo Tarozzi
Anaeróbicos
Agar y caldo soya Tripticasa
Bacterias exigentes
Stone – Brink
Micobacterias
Skirrow
Campilobacterias

Medios de cultivo más utilizados

Agar sangre
El agar sangre es una combinación de un agar base
(agar nutritivo) con el agregado de 5 % de
sangreovina, también puede usarse sangre humana,
para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre
aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa
también para ver la capacidad hemolítica de los
microorganismos patógenos (que es un factor de
virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina
el tipo de hemólisis que posee:

Agar CLED
es un medio de cultivo no inhibitorio usado en el
aislamiento y diferenciación de organismos
urinarios. Al ser deficiente en electrólitos, previene
del crecimiento exagerado de las especies de
Proteus. La cistina promueve la formación de
colonias enanas dependientes de cistina. Los
fermentadores de lactosa producen colonias
amarillas en el agar de CLED; las NO
fermantadoras de lactosa dan colonias azules.
Tiene un pH aproximado de 7.3.
El agar CLED o agar Brolacin tiene la característica de ser semitransparente y por la
acción del azul de bromofenol las colonias de bacterias fermentadoras de lactosa se
tiñen de color amarillo mientras que las no fermentadoras se tiñen de azul
El agar de CLED contiene:
Peptona 4g/l
'LabLemco' powder 3g/l
Triptona 4g/l
Lactosa 10g/l
L-Cistina 128 mg/l
Azul de bromotimol 20 mg/l

Agar MacConkey
es un medio de cultivo específico para bacteriasgram
negativas y cepas que fermenten la lactos
Ingredientes
Los ingredientes necesarios para este medio son los
siguientes: sales biliares (medio inhóspito para el
crecimiento de bacterias Gram positivas, excepto
Enterococcus y algunas especies de Staphylococcus),
Violeta cristal colorante ( Inhóspito para cierto tipo de
bacterias Gram-positivo), colorante rojo neutro (el cual
marca microrganismos que fermenten la lactosa), lactosa, peptona y Cloruro sódico.2

Agar nutritivo
El agar nutritivo es un medio de cultivo usado
normalmente como rutina para todo tipo de bacteria.
Es muy útil porque permanece sólido incluso a
relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo
que se distinguen mejor las colonias pequeñas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una
sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. El agar nutritivo contiene
normalmente (p/v):1
 0,5 % de peptona;
 0,3 % de extracto de carne/extracto de levadura;
 1,5 % de agar;
 0,5 % de cloruro de sodio;
 agua destilada;
 pH casi neutro (6,8) a 25 °C.
El caldo nutritivo se hace exactamente igual, excepto por la omisión del agar.

Agar Sabouraud
El agar Sabouraud es un tipo de medio de
cultivoselectivo que contiene peptonas. Es utilizado
para el cultivo de hongos, especialmente dermatofitos,
aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo
de bacterias filamentosas tales como Nocardia.234
Fue utilizado por primera vez por Raymond Sabouraud
en 1892. Más tarde Chester W. Emmons mejoró el
medio acercando el pH al neutro y disminuyendo el
nivel de glucosa para permitir el crecimiento de otros
subcultivos de hongos.
Composición
 40 g/L glucosa
 10 g/L pluripeptona
 15 g/L agar
 0,05 g/L [cloranfenicol]
 pH 5.6

Tetrationato Caldo Base

Uso
Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella
spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, y carbonato de calcio que neutraliza y adsorbe metabolitos
tóxicos.
La selectividad está dada por la presencia de sales biliares y tetrationato (compuesto
generado en el medio de cultivo al reaccionar El tiosulfato de sodio con la solución
iodo-iodurada) que inhiben el desarrollo de microorganismos Gram positivos y
algunas enterobacterias.
Salmonella spp.
Contiene la enzima tetrationatoreductasa y puede crecer satisfactoriamente en el
medio de cultivo debido a que no la afecta la toxicidad del tetrationato.
Para evitar la proliferación de especies de Proteusspp., se recomienda agregar 40
mg/l de Novobiocina previo al agregado de la solución iodo iodurada
INDICAR QUE MEDIOS DE CULTIVO SON USADOS PARA LAS SIGUIENTES
MUESTRAS BIOLÓGICAS
Clasificación de los medios de cultivo
Por el estado solido
a) Medios de cultivo líquidos
Aquellos que son fluidos, libres de agar (caldos, etc)

b) Medios de cultivo solidos

Aquellos que poseen en su composición un solidificante (agar) que se halla en
una concentración de 1% o mas

c) Medios de cultivo semisólidos

Aquellos que poseen en su constitución agar pero en una concentración inferior al
1%

 Orina
Agar nutritivo, agar sangre, agar mackonkey, saburo, tetrationato

 Heces fecales
Tetrationato, mackonkey, MB, saburo, agar sangre, salmonella

 Secreción faríngea
Saburo, tetrationato, agar sangre, mackonkey, MB
 Secreción vaginal
Saburo, tetrationato, agar sangre, mackonkey, MB

 Secreción uretral
Saburo, tetrationato, agar sangre, mackonkey, MB

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

 Orina
Llamado también urocultivo, es un examen microbiológico de una muestra de orina.
Esta se ha de hacer desde un punto de vista cuantitativo y cualitativo

Microorganismos patógenos que afectan al aparato urinario

 Escherichiacoli  Klebsiellapneumonias
 Proteusmirabilis  Streptococcusfeacalis
 Staphylococcusaureu  Candidaalbicans
s  Otras enterobacterias
 Staphylococcuscoagu
alasa negativos

Cultivo
Se utilizan los siguientes medios de cultivo
Agar Cled
Agar sangre
Agar Mac Conkey
Agar XLD
Agar nutritivo

Agar Cled
Procedimiento
 Primero agitar la muestra para homogeneizarla.
 En los medios de agar sangre, agar macconkey y agar XLD se
siembra por el método de saturación de superficie, utilizando una
asa calibrada con la capacidad de contener 0.01 ml. Esta asa nos
servirá para obtener el factor en el recuento de colonias de
colonias
 Luego introducir en la orina una tira de papel esterilWatman (6
mm de ancho por 8 cm de largo con una marca en 14 mm),
escurriendo el exceso en las paredes del frasco
 Inocular la muestra tocando esta tira de papel al agar Cled por
algunos segundos y luego desechar la tira de papel.
 Repetir la operación en otra parte del mismo agar Cled
 Incubar a 35ªC a 37ªC durante 24 a 48 horas.

Agar nutritivo
31 gr. De agar nutritivo para un litro de agua

Procedimiento
En un matraz el agar nutritivo debe disolverse en el agua
completamente. Llevar a la estufa hasta lograr que se disuelva
completamente, pero sin que ebullicione. Una vez concluida este
procedimiento llevar al autoclave. Asegurar un tapón, elaborado con
algodón, gasa y sellarlo con papel madera. Mientras este en el
autoclave, preparar las cajas petri. Una vez que salga del autoclave

Agar sangre
40 gr. De agar sangre para un litro de agua

El mismo procedimiento pero añadiendo sangre dependiendo de la

preparación

Agar mackonkey
51.5 gr de agar mackonkey para un litro de agua

MB
36 gr. De MB para un litro de Agua

Tetrationato
46 gr. De tetrationato para un litro de agua

 Heces fecales
Coprocultivo
Es un examen bactereologico en el cual se investiga la presencia de
bacterias patógenas (que produce enfermedad) en materia fecal. Que
comprende la siembra, aislamiento e identificación de las bacterias
existentes en dicha muestra para establecer el diagnostico de
infecciones bacterianas intestinales.
Bacterias causantes de infección del tracto digestivo
 estomago
o Helicobacter pylori
 Intestino delgado
o Salmonella typhi
o Salmonella paratyphi
o Salmonella entereditis
o Shigella en sus diferents serotipos
o Escherichia coli en sus diferents serotipos
o Vidrio cholerae
o Campylobacter spp
o Yersinia enterocolitica
 Intestino grueso
o Shigella spp
Diagnostico bacteriológico
 Con un asa bacteriológica tomar aproximadamente 1 gramo de
heces o si esta fuese liquida 1 ml. Elegir la parte mucosa purulenta
o con sangre
 Introducir las heces con cuidado, evitando tocar las paredes del
tubo de ensayo que contiene 3 ml de solución fisiológica
 Con el asa bacteriológica, tomar del tubo de mucus lavado con la
solución fisiológica. Si no existiera mucus una azada del liquido.
 Hacer dos extendidos sobre los portaobjetos, distribuyendo el
mucus en círculos concéntricos y en forma homogénea
 Dejar secar a medio ambiente
 Uno colorear con gram y el otro con giemsa

Observación al microscopio
Coloración giemsa. Observar con el objetivo de 100x, 20 campos
microscópicos e informar la cantidad de leucocitos por campo.
Coloración gram. observar con el objetivo de 100x, observar la
forma, coloración y disposición de las bacterias mencionando la
cantidad aproximada de las bacterias.
 Secreción faríngea.
o La recomendación de todo cultivo es que antes de la toma
de muestra, el paciente no haya estado con tratamiento
antimicrobiano
o Paciente en ayunas
o Identificar tres portaobjetos y los medios de cultivo, agar
chocolate, agar sangre, mac conkey y agar sangre con
telurito de potasio para difteria solo en caso de solicitud.
o Tomar en cuenta los datos proporcionados en el diagnostico
presuntivo a fin de utilizar los medios de aislamiento
adecuados y añadir los medios de rutina, los medios
especiales si se requiere.
o Colocarse barbijo
o Colocar al enfermo en posición comoda, dirigiendo la luz de
la lámpara o linterna hacia la faringe.
o Hacer pronunciar la letra “A”
o Bajar suavemente la lengua con un baja lenguas.
o No tocar con el hisopo la mucosa bucal,la uvula del paladar,
ni la lengua.
o Utilizar un hisopo esteril, introducir este directamente a la
faringe, posteriormente un raspado de arriba hacia abajo,
frotando con firmeza pero con suavidad en ambas caras de
las amígdalas y los lugares donde se observe exudados,
inflamación o ulceraciones paraqué todo el hisopo quede
empapado en el exudado faríngeo.
o Cuando la muestra ha sido tomada fuera del laborarotio
esta se puede transportar utilizando un medio de transporte
como Stuart
o Con el hisopo depostar primero en los medios de cultivo y
hacer un extendido.
Procesamiento de la muestra
Primer dia
o Estriar la muestra sobre los medios de cultivo, agar sangre y
agar chocolate incubar los medios a 35° - 37°C,
proporcionando al medio de CO2 al 5 – 10% (método de la
vela), el medio de mac conkey no necesita este método.
o Colorear el portaobjeto con gram para la observación de
leucocitos, cocos gram positivos, bacilos gram negativos,
cocos gram negativos.
o De la tinción del extendido informar los leucitos de acuerdo
al siguiente criterio.
 Menos de un leucocito por campo :
ocacionales leucocitos
  1 a 4 leucocitos por campo : escasos
leucocitos
 5 a 10 leucocitos por campo :
moderados leucocitos
 Mas de 10 leucocitos por campo :
abundantes leucocitos
o Informar también la cantidad de bacterias encontradas por
campo microscópico.

 Secreción vaginal y uretral

El cultivo de este tipo de muestras corresponde a un estudio
microbiológico para la identificación del agente causal de una
infección de transmisión sexual.
Microorganismos patógenos que afectan al aparato genital
 Neiseeria  Tricomonas
gonorrhoeae vaginalis
 Treponema  Candida albicans
pallidum  Estafilococo
 Gardnerella aureus
vaginalis  VIH
 Hemophilus  Algunas
ducreyi enterobacterias
 Chlamidia
trachomatis
Toma de muestra
La toma de muestra destinada para el diagnostico de ITS, es el paso
mas importante y fundamental en al identificación de la misma.
Uretra.- para la toma de muestra se recomienda. No higiene de los
genitales externos por los menos 24 horas y que le paciente no haya
orinado por lo menos 3 horas antes. Debido a que la orina arrastra
todo el material que se hubiese acumulado.
Examen directo
o Con una pinza apretar el hisopo con secreción sobre las
paredes del tubo de homolisis con solfis, para extraer la
secreción y todo el liquido que pudiera haber absorbido.
o Depositar una gota de la suspensión sobre un portaobjeto y
colocar sobre ella un cubre objeto.
o Con aumento de 40x observar la presencia o no de
tricomonas vaginalis, levaduras y células epiteliales en cuya
superficie se encuenran adheridas gran cantidad de
bacterias
Test de aminas
Consiste en colocar tres gotas de KOH al 10% en el tubo de hemolisis
que contiene la muestra, luego de agitarlo brevemente desprende un
olor a pescado si la prueba es positiva.
Tinción de gram
Una vez coloreado el extendido observar con el objetivo de 100%
buscando diplococos gram negativos, intra y extra celulare
(gonococos), células clave y cocobacilos gram negativos (supuestas
gardnerellas), levaduras cocos gram positivos (E. aureus), bacilos
gran negativos (enterobacterias) y bacilos gram positivos
(lactobacilos).
Procesamiento de cultivos
Primer dia
 Ordenar los medios de cultivo necesarios para gonococos, pueden
utilizarse cualquiera de los medios siguientes: thayer martin y agar
chocolate
 Para Gardnerella vaginalis: CNA (colicistina Acido Nalidixico) o
agar sangre
 Para candida albicans: sabourand glucosado
 Colocar las cajas petri en latas de leche con una vela encendida
junto con un algodón húmedo (método de la vela), excepto el
Sabourand
 Incubar de 35 a 37°C por 24 horas
Segundo dia
Búsqueda de neisseria gonorrhoeae
 Comenzar observando el medio para gonococos, en busca de
colonias pequeñas, transparente, convexas como gotas de rocio
 Con ellas realizar un gram buscando diplococos gram negativos
 Luego realizar la prueba de la oxidasa (resultado positivo)
 Con estas características ya se puede clasiicar presuntivamente
como Neisseria gonorrhoeae
 El mismo dia se realiza la prueba de fermentación de azucares,
betalactamasa y el antibiograma
Búsqueda de gardnerella vaginalis
Continua la observación del CNA, en busca de colonias diminutivas,
claras a grises circulares con beta hemolisis, de estas colonias
realizar:
 Tinción de gram para observar cocobacilos gram negativos
 Realizar la prueba de catalasa, siendo catalasa negativos
 Realizar la prueba de la oxidasa, siendo oxidasa negativas
 Con estas características además del test de aminas positivas,
presencia de células clave, flujo vaginal con pH de 4,5 se concluye
que se trata de Gardnerella vaginalis
Búsqueda de candida albicans
Si en el medio de Sabourand, desarrollan colonias pequeñas,
cremosas blanquesinas realizar:
 Test de filamentacion: consiste en colocar dos colonias a un tubo
que contiene 0,5 ml de suero sanguíneo, incubar a 37°C durante 2
a 4 horas.
 Luego de este tiempo observar entre porta y cubre una gota de la
muestra incubada
 La observación de levaduras con pseudomicelios indica la
presencia de candida albicans
 La presencia solo de levaduras indica que se trata de candida spp
(saprofita)
Tercer día
 Si el segundo dia se efectuaron las reacciones bioquímicas para
Neisserias, leer estas:
 Si se identifica Gardnerella vaginalis, no es necesario realizar el
antibiograma, porque esta bacteria es sensible al metronizadol
 Leer el resultado de las pruebas bioquímicas y el antibiograma si
es que se hubiera realizado

 Esputo
Los procesos infecciosos a nivel de los alveolos y en general a nivel
del parénquima pulmonar se denominan neumonía
El esputo es la muestra mas utilizada para el diagnostico de
infecciones del aparato respiratorio inferior, principalmente de
neumonías y tuberculosis

Microorganismos patógenos
 Estreptococo pneumoniae
 Haemophilus influenzae
 Estafilocco aureus
 Psedomonas (en pacientes hospitalizados)
 Mycobacterium tuberculosis