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Técnicas de identificación

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Francisco Javier Castillo Miguel Salavert

University of Zaragoza Hospital Universitari i Politècnic la Fe
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 Capítulo

3 Técnicas de identificación

J. L. López-Hontangas, F. J. Castillo y M. Salavert

1.   Introducción

El propósito fundamental del diagnóstico microbiológico clínico es optimizar

la asistencia que se presta al paciente. Para alcanzar este objetivo es esen- 3
cial obtener y comunicar, lo antes posible, al médico responsable del mismo
resultados útiles para su manejo y tratamiento, usando eficientemente los
recursos disponibles. Conjugar estos objetivos, con el máximo rigor científico
y una creciente demanda asistencial, es lo que se persigue en los Servicios de
Microbiología Clínica.
El diagnóstico etiológico directo de las enfermedades infecciosas pretende
demostrar la presencia del microorganismo causal en productos patológicos ade-
cuados obtenidos del paciente e incluye, entre otros procedimientos, el cultivo,
el cual persigue el aislamiento del microorganismo causante de la infección.
Cuando es factible, el cultivo se considera el método diagnóstico de elección,
porque permite la identificación del microorganismo implicado, el estudio de su
sensibilidad a los antimicrobianos apropiados y facilita la aplicación de marcadores
epidemiológicos.
Una vez aislado el microorganismo de la muestra, se procede a su identi-
ficación, es decir, a clasificarlo dentro de un grupo o taxón ya establecido, con
el que tenga la mayor semejanza. La complejidad de este proceso depende del
nivel de precisión o discriminación que se pretende conseguir.
Aunque en los últimos años se ha asistido a un crecimiento importante en
la oferta de métodos genotípicos aplicados al diagnóstico microbiológico, en
la mayor parte de los procesos de identificación se siguen utilizando métodos
fenotípicos, puesto que su realización, lectura y coste los hacen más asequibles.
En este capítulo se revisan las técnicas de identificación de las bacterias
patógenas. Los métodos clásicos para la tipificación de las bacterias se basan
en sus características morfológicas y metabólicas. Las pruebas diagnósticas se
seleccionan en una base empírica, con el fin de proporcionar información sufi-

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ciente para hacer posible la discriminación entre los géneros y especies. Además,
hoy en día, las técnicas de biología molecular (basadas en la caracterización de
genes específicos o segmentos de ellos) son cada vez más comunes y utilizadas
en Microbiología Clínica.

2.  Objetivos Y utilidad DE LAS TÉCNICAS DE identificación

La identificación de una bacteria sospechosa de ser la causa de una infec-
ción es uno de los instrumentos principales del diagnóstico y tratamiento de
las enfermedades infecciosas. Diferenciar un microorganismo patógeno per se,
potencialmente patógeno o contaminante, y deducir sus posibles mecanismos
de resistencia, facilita el tratamiento de la enfermedad infecciosa con la mayor
eficiencia posible. También permite realizar un seguimiento y control de las infec-
ciones hospitalarias, detectar un posible brote infeccioso y establecer una política
de antibióticos coherente y apropiada en concordancia con el centro hospitalario
o el área asistencial, lo que traerá consigo una disminución de las infecciones
nosocomiales y/o comunitarias, y una menor generación de resistencias en los
microorganismos.
Para poder ser clínicamente útil, la identificación de un microorganismo debe
ser lo más rápida posible. La economía y la práctica dictan el uso de un número
mínimo de pruebas diagnósticas. Por necesidad, la identificación en Microbiología
Clínica representará siempre un compromiso entre la exactitud y precisión, por
una parte, y la rapidez y la economía por otra. Cómo se logra este compromiso
es lo que determina la calidad diagnóstica en Microbiología.

3.   Identificación BACTERIANA

La taxonomía bacteriana tiene como objetivo la construcción de sistemas
que permitan clasificar a las bacterias. Dentro de la clasificación taxonómica,
las categorías y definiciones más utilizadas son familia (un grupo de géneros
relacionados entre sí), género (un grupo de especies relacionadas entre sí),
especie (un grupo de cepas relacionadas entre sí), tipo (grupos de cepas in-
terrelacionados dentro de las especies; por ejemplo, biotipo, serotipo) y cepa
(aislamiento concreto de una especie en particular).
Uno de los factores clave para identificar a las bacterias como agentes
patógenos depende de su aislamiento en cultivo puro. Una colonia en cultivo
puro está compuesta por un solo tipo de microorganismo y procede de una
sola célula original. Las pruebas de identificación se deben hacer siempre con
colonias únicas procedentes de cultivos puros.

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La taxonomía bacteriana convencional permite la identificación de géneros y

especies mediante la aplicación de diversos criterios, como los que se resumen
a modo de ejemplo en la tabla 1.

3.1.   Métodos rápidos de identificación bacteriana

El término de “método rápido” en microbiología engloba una amplia varie-
dad de procedimientos y técnicas que permiten obtener resultados en menos
tiempo que las pruebas diagnósticas convencionales. Existen métodos rápidos
aplicables a la microscopía, técnicas de identificación bioquímicas, pruebas de
detección de antígenos y de anticuerpos. Incluso en las técnicas de diagnóstico
molecular existe una gradación de celeridad, siendo algunas de estas pruebas
tan “rápidas” como la PCR “a tiempo real”.
Los procedimientos microscópicos que utilizan tinciones estándar y/o
anticuerpos fluorescentes para detectar microorganismos específicos se consi-
deran métodos rápidos y se utilizan para la diferenciación inicial o la identifica-
ción presuntiva de ciertos grupos de microorganismos. La identificación rápida
de los cultivos clínicos también incluye equipos de identificación comerciales
e instrumentos o sistemas robóticos e informáticos completamente automa-
tizados.
Los equipos comercializados son habitualmente sistemas de pruebas mi-
niaturizadas que utilizan sustratos cromogénicos o fluorogénicos para estudiar
las enzimas preformadas. Las reacciones buscadas pueden ser obtenidas en un

 Criterios y ejemplos metodológicos aplicados a la identificación

Tabla 1.
bacteriana
Criterio Metodología de ejemplo

Observación macroscópica Observación e inspección de colonias: disposición, tamaños,

textura, formas, pigmentos, etcétera
Observación microscópica Tinciones: formas, agrupación, esporas, cápsula, flagelos, etcétera
Metabolismo Baterías bioquímicas: uso de sustratos (oxidación/fermentación),
producción de metabolitos secundarios, etcétera
Otras propiedades Resistencia a antibióticos: antibiograma y antibiotipos, ribotipos,
fagotipos, estudio de las concentraciones mínimas inhibitorias,
estudio de sinergias o antagonismos, etcétera

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 30 Microbiología aplicada al paciente crítico Técnica

tiempo de 2 a 6 horas de incubación, aunque algunas de ellas pudieran requerir

una incubación ampliada hasta el día siguiente. Las capacidades y prestaciones
de estos equipos y sistemas son muy variables y suelen incorporar sistemas
de lectura mecanizada y automatizada mediante espectrofotómetros, códigos
numéricos y bases de datos computarizadas, realizando de forma secuencial la
incubación, lectura e interpretación de los resultados de las pruebas.

3.2.   Tinciones rápidas

El examen de las muestras debe iniciarse con la inspección visual ordinaria

y proceder al nivel de magnificación necesario para visualizar el patógeno o de-
terminar la ausencia del mismo. En la mayoría de los Servicios de Microbiología
se realiza un examen macroscópico de la muestra mediante la inspección visual
en el momento de realizar la extensión sobre el portaobjetos, la preparación de
los cultivos y, posteriormente, un examen microscópico mediante las tinciones
elegidas (Tabla 2); por lo tanto, el microscopio es el instrumento más necesario
para un microbiólogo, dado que permite la observación de microorganismos que
no pueden ser apreciados con detalle a simple vista.
Las muestras pueden prepararse de diferentes formas para hacer a los
microorganismos más fácilmente visibles y mostrar sus características estruc-
turales. Las suspensiones en fresco permiten valorar algunos elementos, como
motilidad bacteriana, recuento de leucocitos, detección de parásitos o protozoos
o visualización de estructuras fúngicas; por otra parte, las tinciones microbioló-
gicas permiten observar a los microorganismos en función de la capacidad de
los mismos para retener, o no, determinados colorantes (Tabla 3).
Las tinciones pueden realizarse siguiendo distintos métodos, siendo las más
usadas las tinciones diferenciales, que permiten distinguir a los microorganis-
mos por alguna de sus características tintoriales peculiares:

• Tinción de Gram: es de gran importancia en Microbiología, ya que permite

hacer diferenciaciones taxonómicas, separando dos grandes grupos de bac-
terias (gram-positivas, de color violeta azulado, y gram-negativas, de color
granate o rojo-rosado), según se comporten ante esta tinción.
• Tinción ácido-alcohol resistente: se basa en que ciertos microorganismos
no pierden la coloración por una mezcla de ácido y alcohol si han sido pre-
viamente teñidos con fucsina fenicada. Se dice que son microorganismos
ácido-alcohol resistentes.
• Otras: hematoxilina férrica, tricrómica, May Grunwald-Giemsa, Wright-­Giemsa.

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Tabla 2.  Sistemas de observación de los microorganismos patógenos

Herramienta Magnificación (x) Aplicación
Ojo humano 0 Examen visual ordinario
Lupa o gafa-lupa 5 Examen visual ordinario con precisión
Examen y manipulación visual precisa y
Microscopio de disección 2,5-30
detallada
Microscopio óptico:
– De campo claro 100-1.000 Células teñidas
Células no fácilmente teñidas para visua­
– De campo oscuro 100-400
lización en campo claro
– Contraste de fases 100-400 Células vivas y/o no teñidas
Preparaciones usando tinciones con fluo­
rocromos, los cuales pueden teñir direc­
Microscopio de fluorescencia 100-1.000
tamente las células o pueden acoplarse a
anticuerpos que se fijan a las células
Microscopio electrónico:
Determina la ultraestructura de los orgá­
– De transmisión 150 a 100 millones
nulos celulares
Determina las formas y estructuras de la
– De barrido 20-10.000
superficie celular

La tinción más utilizada en microbiología es, sin lugar a dudas, la tinción

de Gram, que proporciona información sobre los siguientes aspectos:

• T axonómico: permite la clasificación inicial de las bacterias usando crite-

rios morfológicos (tamaño, forma, agrupación, carácter tintorial).
• Clínico: permite un diagnóstico presuntivo de bacteriuria significativa,
también un diagnóstico etiológico orientativo del líquido cefalorraquídeo
(LCR) de un paciente con sospecha de meningitis, etcétera.
• Control de calidad y validez de la muestra remitida para cultivo, como
sucede con los esputos y otras muestras del tracto respiratorio.
• Guía para el procesamiento de la muestra: orienta sobre la elección
de los medios de cultivo, temperaturas y atmósferas de incubación,
requerimientos nutricionales adicionales, etc. más apropiados según los
microorganismos observados en la tinción.

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Tabla 3. Tinciones y métodos microscópicos para la detección rápida de microorganismos en muestras y materiales
 
infectados
Tinción o método Aplicación Resultados esperados Comentarios

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LBA, preparaciones de Tzanck, muestras Morfología general de las estructuras Permite visualizar bacterias, levaduras,
Wright-Giemsa
con fondo celular complejo ce­lulares parásitos e inclusiones virales
Gránulos metacromáticos de corinebac­ Morfología general y seleccionada Corynebacterium diphteriae
Azul de metileno
terias
Permite hacer diagnóstico presuntivo, Detección de leucocitos, reconocimiento Requiere experiencia para valoración
sobre todo, en neumonía y meningitis de la morfología de bacterias comunes adecuada; no incluye otros agentes in­-
Gram
bacteriana fecciosos, pero puede diferenciar leva­
duras
Tinciones de muestras (esputos, LBA, Los microorganismos AAR muestran un Las micobacterias son ba­cilos rectos,
LCR, orina, etc.) para identificar bacterias color rojo granate, contrastado sobre cortos o largos y las nocardias, bacilos
Ziehl-Neelsen, Kinyoun ácido-alcohol resistentes (AAR) y para un fondo azulado; permite detectar arboriformes y ramificados
diferenciación de micobacterias y algunos también parásitos como Cryptosporidium
actinomicetales aerobios (AAR parcial) y Cyclospora
Microscopía de campo Examen directo de lesiones con sospecha Se ven espiroquetas móviles Requiere experiencia
oscuro de sífilis primaria
Examen directo de la extensión de LCR, Los criptococos poseen una cápsula de Tinción inversa, la cápsula no se tiñe;
Tinta china sangre y orina para Cryptococcus polisacáridos que aparece como un halo requiere experiencia para diferenciar
sobre un fondo oscuro leucocitos de levaduras
Examen directo de las extensiones de piel, Visualiza elementos fúngicos Digiere las proteínas de las muestras y
KOH 10%
pelos y uñas para ver dermatofitos facilita la visualización
Microbiología aplicada al paciente crítico

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Técnica
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Tabla 3. Tinciones y métodos microscópicos para la detección rápida de microorganismos en muestras y materiales
 
infectados (continuación)
Tinción o método Aplicación Resultados esperados Comentarios

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Técnicas de identificación

Es eficaz para diferenciar verdaderos mi­- Tinción de fluorocromo fijada a los Requiere el uso de microscopio de fluo­
cro­organismos de artefactos, especialmen- nú­cleos de las bacterias, que muestran rescencia
Naranja de acridina te en hemocultivos fluorescencia naranja sobre un fondo
oscuro; fluorescen tanto bacterias viables
como no viables
Examen directo de LCR, LBA y otros Las levaduras y mohos muestran una Tinción fluorescente que se fija a la pared
líquidos corporales para detectar estruc- fluorescencia blanquecina suave celular de hongos y levaduras, pero no
turas fúngicas y algunos quistes parasi­ a bacterias o células inflamatorias; se
Blanco calcoflúor tarios prefiere a la tinta china y a preparaciones
de KOH
Requiere el uso de microscopio de fluo­
rescencia
Es útil para búsqueda de AAR en una Extensiones concentradas de sedimentos Tinción preferida para microorganismos
variedad de muestras clínicas, especial­ de micobacterias AAR, por su rendimiento en el cribado
Auramina-rodamina mente, las más contaminadas con flora de gran número de muestras
normal Requiere el uso de microscopio de fluo­
rescencia
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 34 Microbiología aplicada al paciente crítico Técnica

• P uede indicar la conveniencia de aplicar otras técnicas de diagnóstico

rápido (detección de antígenos o de anticuerpos, técnicas de biología
molecular).
• Guía la calidad del proceso que exige concordancia entre los microor-
ganismos que se observan en la visión directa y los que se obtienen,
recuperan o aislan por cultivo.
• Puede proporcionar ayuda para orientar la asistencia, tanto en pautas
terapéuticas empíricas de antimicrobianos, como en la adopción precoz
de medidas preventivas y de control epidemiológico.

El aspecto de las bacterias en el microscopio permite plantear las siguientes

cuestiones clave para el diagnóstico microbiológico:
• ¿Qué características tintoriales presentan las imágenes o elementos vi-
sualizados en las preparaciones?: ¿se trata de bacterias gram-positivas o
gram-negativas?, ¿son bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR), o no, o sólo
parcialmente?
• ¿Cuál es la morfología de las células bacterianas visualizadas?: bastones o
bacilos, cocos, cocobacilos, difteromorfos o corinebacteriformes, espirales o
helicoidales, pleomórficas (forma variable),
• ¿Cuál es su disposición y estructura individual o integrada?, ¿aparecen las
células en forma separada o configurando cadenas, parejas, tétradas, racimos,
agrupamientos ordenados o desordenados, etc.? y…
• ¿De qué tamaño son las células?: ¿grandes, pequeñas, de dimensiones bac-
terianas o de aspecto fúngico (levaduriforme o filamentoso micelial)?

3.3.   Identificación presuntiva por la morfología de las colonias

Gracias al cultivo microbiológico se obtiene información adicional que es muy
valiosa para aislar e identificar a los microorganismos. Los medios de cultivo
sólidos pueden clasificarse en:
1.   “Medios no selectivos” (agar sangre y agar chocolate): posibilitan el cre-
cimiento de muchas especies diferentes de bacterias, pero no permiten el
aislamiento de una sola especie bacteriana a partir de muestras propensas a
la contaminación con un gran número de microorganismos comensales.
2.  “Medios selectivos”: ayudan en el aislamiento de especies de importan-
cia médica en presencia de especies comensales, mediante la adición de
sustancias inhibidoras, sistemas indicadores y tampones que ayudan a la

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e crítico Técnicas de identificación 35

detección diferencial (agar MacConkey, agar CLED, agar XLD, agar VCAT o
VCN). Se utilizan para sembrar diferentes tipos de muestras contaminadas
(intraabdominales, heces, orina o exudados genitourinarios).
Es posible hacer una identificación preliminar de muchas bacterias impor-
tantes en la clínica, basándose en unas pocas y sencillas características ma-
croscópicas de las células apreciables en su disposición en forma de colonias
sobre los medios de cultivos en que crecen y se aislan. La interpretación de los
cultivos primarios, después de 24-48 h de incubación, requiere una evaluación
de las colonias con una sistemática bien estructurada.
Características macroscópicas de las colonias:
Después de un examen visual del desarrollo en la superficie de las placas
de agar, se deben apreciar las principales características de las colonias: tamaño
(en general, las bacterias gram-positivas producen colonias algo más pequeñas
que las gram-negativas), forma, grado de elevación, borde, color, superficie,
densidad, consistencia y olor.
Reacciones en el medio de agar usadas para la identificación de bacterias:
1. Tipo de hemólisis en el medio de agar sangre. La hemólisis es una reacción
observada en el medio circundante o subyacente a la colonia; sirve de ayuda
para la identificación presuntiva, particularmente, de los estreptococos, y
debe valorarse frontalmente y por transiluminación.
• a-hemólisis: eliminación parcial de la sangre en torno a la colonia, ori-
ginando una decoloración verduzca en el medio (ej.: S. pneumoniae,
estreptococos del grupo viridans).
• b-hemólisis: eliminación completa de la sangre circundante o subyacente
a las colonias por lisis completa de los hematíes (ej.: Streptococcus pyo­
genes, Streptococcus agalactiae, Listeria monocytogenes).
2. Producción de pigmentos en medio de agar: es una de las características
inherentes de cada microorganismo específico y pueden estar confinados
a la propia colonia o colorear el medio: verde, a veces, con brillo metálico
(P. aeruginosa), rojo-rosado (Serratia marcescens), azul (Kluyvera spp.), púr-
pura (Chromobacterium violaceum) o marrón negruzco (Prevotella melanino­
ge­nica).
Cambios en medios diferenciales: en los medios de cultivo diferenciales
se incluyen diversos colorantes, indicadores de pH y otros componentes meta-

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 36 Microbiología aplicada al paciente crítico Técnica

bólicos, que actúan como indicadores de las actividades enzimáticas y ayudan a

identificar a las bacterias aisladas, muy útiles en determinados tipos de muestras,
como los coprocultivos y urocultivos.
Crecimiento en medios líquidos: hay claves importantes para la identi-
ficación de los microorganismos que pueden ser detectadas observando el
crecimiento en los medios líquidos, especialmente, en el caldo de tioglicolato o
en otros como el Brain-Heart-Infusion (BHI).

La capacidad de la morfología colonial para hacer una identificación

presuntiva permite:
• R ealizar un diagnóstico presuntivo rápido en un momento de necesidad
crítica basado en el juicio razonado del microbiólogo.
• Incrementar la calidad de los cuidados del paciente a través de la co-
municación rápida de los resultados, aumentando el coste-efectividad
de las pruebas microbiológicas (diferenciación de patógenos potenciales
de la flora normal).
• Tener un papel significativo en el control de calidad, especialmente, de
los procedimientos automatizados y de otros sistemas de identificación
comercial disponibles (evitar interpretaciones erróneas, debidas a inóculos
mixtos que alterarían la identificación), valorando la correlación de los
resultados generados con la identificación esperada.

3.4.   Pruebas bioquímicas rápidas

Existen varias pruebas bioquímicas de realización fácil y rápida sobre colonias
aisladas a partir de medios de cultivo que permiten la diferenciación presuntiva
rápida entre grupos de microorganismos o entre especies bacterianas. Además,
estas pruebas pueden orientar sobre las técnicas adicionales necesarias para
hacer una identificación definitiva. En la tabla 4 se resumen los principios, los
modos de acción y las aplicaciones de algunos de estos procedimientos.

3.5.  Baterías y pruebas adicionales

En la práctica, la identificación bacteriana se puede realizar con métodos
convencionales o con métodos semi o totalmente automatizados. Los métodos
convencionales se suelen llevar a cabo en forma de cascada decisoria, con un
algoritmo de identificación consensuado o estandarizado (Fig. 1) o usando una
batería de pruebas simultáneas que permita la identificación aproximada o defi-

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 Principios, modos de acción y aplicaciones de algunas pruebas

Tabla 4.
bioquímicas rápidas
Prueba Enzima bacteriana Aplicaciones

Indol Triptofanasa Reacción positiva (color rojo) identifica a E. coli,

Proteus vulgaris
ONPG b-galactosidasa Determina la fermentación de lactosa (color
amarillo) en fermentadores lentos de la lactosa.
Diferencia, por ej., Neisseria lactamica de especies
patógenas de Neisseria
Oxidasa Citocromo C oxi­ Diferenciación entre los no-fermentadores
dasa (reacción +, color azul-morado); también ayuda
a la identificación de Neisseria, Aeromonas, Vibrio
y Campylobacter
Catalasa Catalasa Diferenciación de estafilococos (reacción + con
burbujeo) de estreptococos (reacción -) y de
Listeria de los estreptococos
Solubilidad en bilis Identificación presuntiva de Streptococcus
pneumoniae (colonias lisadas) en cultivos de
esputo, sangre o LCR
PYR (L-pirrolidonil-B- L-pirroglutamil- Identificación de estreptococos del grupo A de
naftilamida) amino-peptidasa Lancefield. Diferencia Enterococcus de los es­-
treptococos del grupo D (reacción +, color rojo
brillante)
Ureasa (rápida) Ureasa Prueba de cribado (positiva, color rojo) para
Cryptococcus, Proteus, Klebsiella y Yersinia ente­
rocolitica
Hipurato (rápido) Especiación de Streptococcus agalactiae, Campy­
lobacter jejuni y Listeria
Plasmocoagulasa Diferencia S. aureus de estafilococos coagulasa
negativos

nitiva. Siempre se parte de una identificación preliminar (basada en la tinción de

Gram, morfología colonial, etc.) que permite simplificar la batería a un mínimo
de pruebas necesarias y apropiadas.

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 38 Microbiología aplicada al paciente crítico Técnica

Gram y morfología

Coco gram-positivo No coco gram-positivo

Catalasa

Negativa

Positiva

Coagulasa

Negativa

ECN

Positiva

Staphylococcus aureus

Figura 1.   Ejemplo de identificación por algoritmo en cascada. ECN: estafilococos negativos para
la coagulasa.

Para la identificación de los bacilos gram-negativos (BGN) aerobios, del

tipo de las enterobacterias, se realiza una batería de pruebas bioquímicas con
la que se identifica a los que se aíslan más frecuentemente en nuestro medio.
Además, conocer el fenotipo de sensibilidad antibiótica de una determinada
especie ayuda de forma determinante a la identificación final.
En la identificación de los cocos gram-positivos catalasa positivos es muy
importante diferenciar a Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de
los estafilococos coagulasa negativos (ECN).
Por otra parte, para la identificación de los cocos gram-positivos catalasa
negativos, la identificación preliminar es esencial, ya que existe una gran varie-
dad de géneros. Por ello, se aconseja una identificación en cascada con unas
pocas pruebas convencionales, que permitan identificar el género, y en algún
caso, la especie (patrón hemolítico, crecimiento en forma de satélite con una
cepa de S. aureus hemolítica, piracinamidasa, hidrólisis del hipurato, prueba del
CAMP, solubilidad en bilis y optocina). Si interesa la identificación de la especie,
lo más habitual es utilizar galerías comerciales (API rapid ID 32 STREP®, Vitek2®,
MicroScan Walk-Away®, Phoenix® o Wider®).

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e crítico Técnicas de identificación 39

Para la identificación de los bacilos gram-positivos de los géneros Coryne­

bacterium y Bacillus, la diferenciación preliminar debe hacerse por la morfología
de la colonia, color, hemólisis, características al microscopio, presencia de espo-
ras, etc. Aunque para una mayor seguridad en la identificación se puede utilizar
también un sistema de galerías para los bacilos corineformes (API Coryne)®, o
el API 50 CHB® para el género Bacillus o mediante métodos automáticos, como
el sistema Phoenix®.
Para la identificación de bacterias anaerobias es importante realizar una
identificación preliminar, que permite, en algunos casos, conocer el género, en
función de la morfología, tinción de Gram, disposición y patrón de hemólisis.
Una identificación definitiva se puede realizar con galería de pruebas como el
API rapid ID 32 A®.

3.6.   Métodos semi o completamente automatizados

En el mercado existen varios métodos de identificación semiautomáticos y

automáticos que superan a los métodos convencionales por su fácil realización
y el menor tiempo que requieren para alcanzar una identificación definitiva de la
especie. Además, muchos de estos sistemas permiten realizar las pruebas de
sensibilidad a los antimicrobianos al mismo tiempo. En general, los métodos auto­
máticos se deberían utilizar para la identificación sistemática en el laboratorio de
microbiología; pero estos métodos no permiten siempre la identificación de todas
las bacterias. Por lo tanto, el microbiólogo debe comprobar que los resultados de
los métodos automáticos se corresponden con los de otras pruebas y con su sospe-
cha diagnóstica; además, estos sistemas requieren controles de calidad estrictos.
Entre los métodos de identificación automáticos comercializados se en­
cuen­tran Vitek2® (bio-Mérieux), MicroScan Walk-Away ® (Dade), Phoenix®
(Becton-Dickinson) y Wider® (Soria Melguizo). La principal característica de estos
métodos es su fácil y cómoda realización, permitiendo conseguir la identificación
de la especie, dado que en su base de datos incluyen a la gran mayoría de las
bacterias clínicamente importantes. En general, identifican bien a los BGN del
tipo de las enterobacterias y a los BGN no fermentadores, a los estreptococos
beta-hemolíticos, a los enterococos, a algunos estreptococos alfa-hemolíticos
y a los estafilococos. Algunos sistemas disponen de paneles especiales para
Streptococcus pneumoniae, BGP (como los de los géneros Listeria, Corynebac­
terium y Bacillus) y levaduras.
Todos los sistemas automáticos actuales son parecidos en cuanto a rendi-
miento de porcentajes de identificación. La diferencia fundamental se encuentra

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 40 Microbiología aplicada al paciente crítico Técnica

en las pruebas de sensibilidad y en el sistema experto que utilizan. Unos emplean

simples reglas que aplican a los resultados y otros, como el Vitek2®, utiliza el
AES (sistema experto avanzado) que está basado en el reconocimiento fenotí-
pico del mecanismo de resistencia de la bacteria deducido a partir de la CMI y
aplicando la comparación con una base de datos que incorpora los resultados
de las CMI publicadas en la bibliografía, o en documentos de consenso, y que
son actualizadas periódicamente.

Resumen
• El aislamiento, identificación y análisis de las bacterias que causan en-
fermedades en los seres humanos es una de las principales funciones
del microbiológo clínico. El conocimiento de la estructura, fisiología y
metabolismo bacteriano es muy importante, al menos, para tres de las
áreas fundamentales de la microbiología médica:

– Cultivo de los microorganismos a partir de las muestras de los pa-

cientes.
– Clasificación e identificación de los microorganismos después de haber
sido aislados.
– Predicción e interpretación de su posible papel patógeno, colonizante
o contaminante, así como de sus fenotipos, patrones y mecanismos
de resistencia.

• E l conocimiento de los requerimientos nutricionales de una bacteria

concreta permite al microbiólogo seleccionar los medios apropiados
de cultivo primario y optimizar las posibilidades de aislamiento del
patógeno.
• La determinación de las características tintoriales, basadas en las dife-
rencias de la estructura de la pared celular, es el primer paso hacia la
clasificación taxonómica de la bacteria.
• Las diferencias bioquímicas y metabólicas entre microorganismos con-
forman la base de la mayoría de los sistemas de identificación bacteriana
actualmente en uso.
• La capacidad de las bacterias para cambiar rápidamente, adquirir nue-
vos genes y sufrir mutaciones plantea continuos retos diagnósticos al
microbiólogo en relación con el aislamiento y caracterización de los
microorganismos asociados a las infecciones en humanos.

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e crítico Técnicas de identificación 41

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