HPLC Masas

U.A.
Técnicas Instrumentales para la Investigación
Maestría en Ciencias con orientación en Química Analítica

ambiental.
Tema:
Cromatografía de líquidos acoplado a masas y masas de alta
resolución
Presentan :
I.Q. Corro Rodríguez Guadalupe

HISTORIA
Cromatografía de Gases
acoplado a espectrometría
de masas (GC-MS)
1950 1970
Cromatografía de líquidos
acoplado a espectrometría
de masas (LC-MS)
2
INTRODUCCIÓN A HPLC-MS
Técnica de análisis químico que combina las capacidades de separación física de la cromatografía
líquida con las capacidades de análisis de masas de la espectrometría de masas.
Muestra
Cromatografía de líquidos Espectrometría de masas

Proporciona identidad estructural
Separa las mezclas con
de los componentes individuales
múltiples componentes
con alta especificidad molecular y
sensibilidad de detección.
3
ESPECTROMETRÍA DE MASAS
HPLC O
UHPLC
4
INTERFACES
Ionización electrospray
Permiten la transición de un
Ionización química a presión
entorno de alta presión a
atmosférica
condiciones de alto vacío
Fotoionización a presión
atmosférica
5
Ionización electrospray
Formación de
Evaporación del Generación de iones cargados con
eluyente gotas pequeñas dirección al
analizador.
Ideal para moléculas

moderadamente
polares.
6
Ionización química a presión atmosférica
Creación de
Introducción a la
spray fino y
región de
evaporación del
ionización.
disolvente.
Exceso de iones Descarga corona

a presión producida por
atmosférica un electrodo
Captación de
protones
Ideal para moléculas pequeñas, neutras,
relativamente no polares y térmicamente
estables (Por ejemplo; Esteroides, lípidos
y vitaminas liposolubles. 7
Fotoionización a presión atmosférica
En esta técnica el eluyente del HPLC pasa a
Inyector de HPLC
través de una aguja de nebulización para
Nebulizador
crear un spray fino.
(pulverizador)
Las gotas se vaporizan completamente en Evaporar
un tubo cerámico calentado. (calentador)
La mezcla de gas/vapor pasa a través de la

Gas de
luz ultravioleta de una lámpara de criptón h
secado
+ ++
para ionizar las moléculas de la muestra. + ++ + ++ +
+
Los iones de la muestra se introducen en el
capilar.
Lámpara de UV Capilar
Ideal para compuestos no

polares y aromáticos.
8
ANALIZADOR DE MASAS
La función del analizador de masas es la separación de los iones en función de su relación masa/
carga (m/z).
Cuadrupolo simple Trampa de iones
Tiempo de vuelo Orbitrap 9

Cuadrupolo simple
El analizador de masas cuadrupolar se escanea secuencialmente para que solo un único ión
m/z pueda pasar de una vez. El resto de iones se pierde.
10
Trampa de iones
Los iones quedan confinados en un anillo durante largos periodos de tiempo por la acción de campo
eléctricos y/o magnéticos. Los iones con un valor m/z adecuado circulan en una órbita estable
dentro del anillo, el resto tienen órbitas inestables y terminan colisionando con las paredes del
anillo.
11
Tiempo de vuelo
Los iones son acelerados con un voltaje hacia un “tubo de vuelo”. La separación de los iones
se basa en el tiempo necesario para recorrer la longitud del tubo, que dependerá de su
relación m/z.
12
Orbitrap
Los iones son inyectados tangencialmente en un campo eléctrico entre los electrodos y quedan
atrapados porque su atracción electrostática hacia el electrodo interior es contrarrestada por la fuerza
centrífuga. Así los iones dan vueltas alrededor del electrodo central. Adicionalmente los iones también
se mueven delante y detrás a través del eje del electrodo central. Así, los iones con una específica
relación masa-carga se mueven en anillos que oscilan alrededor del huso central.
13
Triple cuadrupolo
Se compone de tres cuadrupolos. En el primer cuadrupolo (Q1) se selecciona la relación m/z
de interés, que se suele denominar como ión precursor, éste pasa a través de la celda de
colisión (Q2) dónde se fragmenta, los iones producto son separados por el segundo
cuadrupolo (Q3).
Aumenta la selectividad y
la capacidad de la técnica
para la elucidación
estructural.
14
Tabla comparativa de analizadores de masa
ANALIZADOR DE MASAS VENTAJAS DESVENTAJAS
CUADRUPOLO  Compacto y simple  Rango de masa limitado

 Relativamente barato  Baja resolución
 Buena selectividad.  Poca información cualitativa
 Se requiere vacío moderado
 Muy adecuado para el acoplamiento a LC
TIEMPO DE VUELO  Alta sensibilidad y transmisión de iones  Requiere introducción pulsada

 Alta resolución  Requiere adquisición rápida de datos
 Excelente rango de masa
 Velocidad de exploración rápida
TRAMPA DE IONES  Pequeño y relativamente barato  Rango dinámico limitado

 Alta sensibilidad  Volumen limitado de trampa de iones
 Buena resolución  Resolución limitada
 Requiere introducción de pulso
ORBITRAP • alta resolución  Velocidad de escaneo menor

• alta exactitud de masa  Rango dinámico menor
• alta sensibilidad  Alto costo
15
DETECTORES
Para poder ser detectados, los iones son transformados después de su separación en una
señal eléctrica medible que, posteriormente, es digitalizada.
Multiplicador de
Fotomultiplicador
electrones 16
ESPECTROS
Un espectro de masas es un gráfico de la señal del ión en función de relación masa/carga. A partir de los
espectros, se utilizan la masa del ión molecular y los fragmentos para determinar la composición
elemental o la firma isotópica de un compuesto.
17
APLICACIONES
Farmacéuticas
Alimentos y
Clínicas bebidas
Biomédicas
Medio
Forenses ambientales
18
REFERENCIAS BIBLIOGRAFIAS
Skoog, D. A., Holler, F. J., & Nieman, T. A. (2001). Principios de Análisis instrumental.
(Quinta edición ed.). España: McGRAW W-HILL
Harris, D. C. (2012). Análisis químico cuantitativo (Tercera ed.). Barcelona: Reverté,

S.A.
19
GRACIAS POR SU
GRACIASATENCIÓN
POR SU ATENCIÓN
20

HPLC Masas

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

HPLC Masas

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

HPLC Masas

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

U.A.

Técnicas Instrumentales para la Investigación

Maestría en Ciencias con orientación en Química Analítica

Cromatografía de líquidos Espectrometría de masas

Ideal para moléculas

Exceso de iones Descarga corona

La mezcla de gas/vapor pasa a través de la

Ideal para compuestos no

Cuadrupolo simple Trampa de iones

Tiempo de vuelo Orbitrap 9

CUADRUPOLO  Compacto y simple  Rango de masa limitado

TIEMPO DE VUELO  Alta sensibilidad y transmisión de iones  Requiere introducción pulsada

TRAMPA DE IONES  Pequeño y relativamente barato  Rango dinámico limitado

ORBITRAP • alta resolución  Velocidad de escaneo menor

Harris, D. C. (2012). Análisis químico cuantitativo (Tercera ed.). Barcelona: Reverté,

También podría gustarte