Alteraciones Cromosómicas

y
Métodos Diagnósticos

Karen Alejandra Báez Sanabria y Dalia Victoria Valdivieso

Residentes de Pediatría – 2do año
 Contenido

Generalidades y alteraciones cromosómicas:

01 - Numéricas
- Estructurales
Ejemplos Clínicos:
02 - Etiología
- Fenotipo y Características
Métodos Diagnósticos
03 - Cariotipo y tipos de Bandeo
- FISH
Generalidades y
Alteraciones
Cromosómicas
 Estructura de un cromosoma
La estructura de un cromosoma consiste en dos brazos (denominados corto o “p” y largo o “q”) unidos por
una constricción primaria llamada centrómero.
 Estructura de un cromosoma
Según la localización de éste, se clasifican en:

 Metacéntrico: Cuando el centrómero divide al cromosoma a la mitad y los brazos p y q se visualizan del
mismo tamaño.

 Submetacéntrico: Cuando el centrómero se observa de tal manera que es fácil diferenciar el brazo corto
del brazo largo.

 Acrocéntrico: Sólo se observa una pequeña porción del brazo corto (satélites).
Estructura de un cromosoma
Clasificación
Clasificación
Nomenclatura de los cromosomas

● Banda parte de un Cromosoma que claramente se distingue

de otros segmentos adyacentes por aparecer como clara u
oscura con distintas técnicas de bandeamiento (genoma
humano ~ 2000 bandas).

● Las bandas están ubicadas a lo largo de los cromosomas y

están delimitados por “Landmarks” características
morfológicas consistentes y distintivas, importantes para la
identificación de los Cromosomas (extremos de los brazos,
centrómero y algunas bandas).
Nomenclatura de los cromosomas

● Región área del cromosoma que se encuentra entre

dos Landmarks adyacentes
● Las bandas y las regiones se enumeran desde el
centrómero hacia los telómeros.
 Alteraciones cromosómicas

 Son cambios en los cromosomas apreciables mediante las técnicas de

Citogenética que determinan síndromes según el lugar donde se produjo la
alteración

 Las cromosomopatías resultan de una cantidad mayor o menor de material

hereditario y son causa de anomalías congénitas entre 0.7 y 1.5% de los RNV

 Su frecuencia varía según el país, el tipo de estudio y el método de recolección

de la muestra.

 Las más comunes son aquéllas que tienen un número anormal de cromosomas,
seguidas de las anomalías estructurales.
Anomalías numéricas

 Aquellas que tienen una cantidad de cromosomas

múltiplo de 23  Euploidías (Triploidía con 69
cromosomas).

 Las que sólo tienen un cromosoma de más (trisomía

21) o de menos (síndrome de Turner o monosomía del
X)  Aneuploidías.
 Euploidías

Triploidía: Tipo más frecuente de poliploidía (2% de concepciones son triploides)  son letales y son muy
raras en nacidos vivos.

Causa más frecuente: Dispermia (fecundación de un óvulo por dos espermatozoides).

Otras: Fusión de un óvulo con un cuerpo polar (diginia), o un error meiótico en la gametogénesis (gameto
diploide).

Tetraploidía: Aparece normalmente en las células somáticas de algunos tejidos, resulta de una reduplicación
endomitótica (2 duplicaciones cromosómicas con una sola división celular).
 Aneuploidía

Es el trastorno cromosómico humano más Al menos el 5% de todas las gestaciones

común y el de mayor importancia clínica. reconocidas.

La mayoría de los pacientes aneuploides

El mecanismo implicado con mayor
presenta una trisomía o con menos
frecuencia es la no disyunción.
frecuencia, una monosomía.

Todas son patológicas

 Aneuploidía

Alteraciones numéricas que no afectan a todo el complemento cromosómico, solo a un par cromosómico.

En ocasiones, sólo afecta a un segmento cromosómico Segmentarias.

Son más graves cuando afectan a un autosoma que a un cromosoma sexual

Son más severas las pérdidas de cromosomas (monosomías) que las ganancias de cromosomas
(trisomías).

La ausencia completa de un par cromosómico (nulisomía) es incompatible con la vida.

 Causas de Aneuploidía

 Un retraso en la meiosis de un cromosoma, Conlleva una pérdida de dicho cromosoma en

la anafase  resultado del movimiento tardío durante la anafase  Los cromosomas que no
entran en el núcleo de la célula se pierden.

 La no disyunción mitótica  Puede suceder cuando las células se dividen durante el

desarrollo  Como resultado de este fenómeno algunas partes del cuerpo serán aneuploides
(sectores aneuploides).

 La no disyunción meiótica: Se da con mayor frecuencia. Los productos de la meiosis son

aneuploides  dando lugar a la formación de descendientes en los que el organismo completo
es aneuploide.
 02
Ejemplos Clínicos:
 Trisomía 21: Sx. De Down
-Etiología
 Trisomía originada por la presencia de un cromosoma extra o de un segmento específico del
cromosoma 21.
 Es la forma más frecuente de retraso mental de origen cromosómico, tiene características fenotípicas
y una historia natural distintiva y bien definida.

Desequilibrio de la dosis genética en el que hay una mayor

dosis o número de genes de HSA21.

Inestabilidad del desarrollo, que resulta en el

Hipótesis desequilibrio genético

Una trisomía parcial que incluye la región

crítica 21q22.3
 MECANISMOS GENETICOS DE SINDROME DE DOWN

96%
1. Trisomía 21: En la que todas las células tienen 47 cromosomas.
 debido a la no disyunción meiótica en el óvulo

2. Translocación: En que el cromosoma 21 aparece fundido con otro.

3 -4 %
 Translocación robertsoniana entre el cromosoma 21 y otro cromosoma
acrocéntrico que normalmente es el 14 o el 22.

3. Trisomía 21, mosaicismo normal: En que hay una proporción variable de

células trisómicas y son normales las restantes. 1 - 2%

4. Trisomía parcial: Son duplicaciones de las áreas criticas del cromosoma 21.
<1 %
  Fenotipo

Hall, analizó 48 recién nacidos afectados y encontró

que 100% tuvieron 4 o más y 89% ,6 o más.
 CARACTERÍSTICAS CRANEO
FACIALES
 PLIEGUE PALMAR ÚNICO
 CLINODACTILIA DEL 5TO DEDO
 Cardiopatías  Alt. Gastrointestinales

 5% de los casos
 Atresia o estenosis duodenal, a veces asociada con el
páncreas anular: 2,5% de los casos
 Ano imperforado y la atresia esofágica con fístula
 Enfermedad de Hirschsprung con riesgo 1%
  Alt. Crecimiento

 Peso al nacer, longitud y PC < que el promedio

 Baja talla
 Hipocrecimiento
 Obesidad

 Déficit cognitivo
 Discapacidad intelectual leve a moderada (IQ 50 a 70 o 35 a 50)
 Retraso en neurodesarrollo
 Trastornos psiquiátricos son más comunes (< frecuente que en aquellos con otras causas de
discapacidad intelectual)
 Alt. Auditivas
● Discapacidad auditiva en 38 a 78 %
● La pérdida auditiva congénita es más común: 15 % de RN con SD vs 0.25 % en la población
general
● Otitis media 50 a 70 % y con frecuencia es la causa de la pérdida de audición en esta población.

 Alt. Endocrinas
 Mayor riesgo en trastornos de la tiroides
 Diabetes: Riesgo de diabetes tipo 1 parece aumentar.
 Obesidad (25% niños y 50% adultos)
  Alt. Oculares
 Errores de refracción (miopía, hipermetropía, astigmatismo): 35 a 76%
 Estrabismo: 25 a 57 %
 Nistagmo: 18 a 22 %
 Cataratas: 5 % de RN.
 Opacidades corneales.
 Ocasionalmente glaucoma.

 Alt. Hematológicas
● Mielopoyesis anormal transitoria, hasta 10% de los RN por mutaciones en GATA1 (riesgo de
leucemia 20 a 30%)
● Riesgo de leucemia 2 a 3%, particularmente LMA.
● Mayor frecuencia en cáncer de testículo
 Trisomía 13: Sindrome de Patau
- Etiología:
 Trisomía 13 (47,+13), con tres copias del cromosoma 13 como resultado de un error
meiótico  Esta forma se asocia con edad materna avanzada.

 Translocación robertsoniana desequilibrada  no está relacionada con la edad materna

avanzada.

 Mosaicismo
  Fenotipo

 Anomalías congénitas múltiples y graves.

Micro/anoftalmía

Labio fisurado
Polidactilia
y/o paladar
postaxial
hendido
 Las anomalías observadas en ≥50 % de los pacientes
con trisomía 13 incluyen:

- SNC: Holoprosencefalia con desarrollo incompleto del

cerebro anterior y los nervios olfatorio y óptico,
discapacidad intelectual grave, hipoacusia

- Coloboma
 Piel y faneras: Hemangiomas capilares, pliegue
palmar único, uñas angostas hiperconvexas.
 Cardíaco: en el 80%, CIV, CIA, DAP y
dextroposición
 Genitales: Criptorquidia en hombres; útero bicorne en
mujeres
 Extremidades: pulgar retroflexible, polidactilia
postaxial, sindactilia, hendidura entre el primer y
segundo dedo del pie, aplasia radial.

 Abdomen: Onfalocele, rotación incompleta del

colon, divertículo de Meckel.

 Renales: riñón poliquístico, hidronefrosis, riñón en

herradura
  Otras alteraciones en <50%
 RCIU
 SNC: Hiper o hipotonía, agenesia del cuerpo calloso, hipoplasia cerebral
 Ojos: hipo o hipertelorismo, ciclopía, fisuras palpebrales inclinadas hacia arriba
 Nariz, boca, mandíbula: filtrum ausente, paladar estrecho, micrognatia
  Trisomía 18: Síndrome de Edwards
 Es la segunda trisomía autosómica más frecuente observada en nacidos vivos (1 de cada 5.500)
 Relación con la edad materna avanzada
 Proporción de 3:1 de mujeres a hombres

-Etiología:
 Trisomía 18 (47,+18): 90% de los casos son resultado de la no disyunción meiótica.
 Translocación.
 Mosaicismo (47,+18/46).
  Fenotipo

 RCIU y retraso de crecimiento posnatal

 T. adiposos y muscular escaso
 Hipotonía inicial que evoluciona a Hipertonía
 Craneofaciales: Occipucio prominente, Micrognatia, Orejas puntiagudas
 Dedos flexionados: dedo índice superpuesto al tercer dedo y el quinto
superpuesto al cuarto.

 Los hallazgos ecográficos prenatales corresponden a las anomalías físicas

 Asociación de polihidramnios, en un feto con “manos apretadas“.
 Cara y cráneo
  Otras alteraciones

 Cardiopatía congénita >50%: Defectos del tabique ventricular y el DAP son los defectos más comunes, con afectación
valvular común.

 Gastrointestinal en el 75%: Divertículo de Meckel, malrotación y onfalocele.

 SNC: Retardo cognitivo y del desarrollo

 Esqueléticas: Esternón corto, tórax en quilla, abducción limitada de la cadera

 Renales: Riñón en herradura

  Síndrome Klinefelter
 Trisomía cromosoma sexual
 La mayoría tienen un cromosoma X extra (80%), 47XXY
 El resto de los casos se pueden presentar mosaicos u otros cariotipos.
 Es la causa más frecuente de fallo testicular primario.
 El cariotipo 47XXY se identifica en el 11% de los hombres
azoospérmicos y en el 3% de los infértiles

FENOTIPO:
 Individuos altos y delgados, con piernas relativamente largas.
Físicamente no hay ningún dato anómalo hasta la pubertad
 Signos de hipogonadismo
 Tendencia a la obesidad.
  Síndrome de Turner
 Monosomia de cromosoma sexual: 45X.
 Afecta a una niña por cada 2.500 recién nacidas vivas
 99% de los embarazos con feto 45 X terminan en aborto espontáneo
en el primer trimestre,
 Solo aquellos fetos con "formas moderadas” o mosaicismos son
viables.

FENOTIPO:
 Disgenesia gonadal con amenorrea primaria
 Infantilismo sexual
 Talla baja
Anomalías estructurales
 03
MÉTODOS
DIAGNÓSTICOS
 1) Cariotipo
 Es la organización de los cromosomas de acuerdo con el tamaño y la posición del centrómero.

Estudio del complemento cromosómico en

el que se pueden identificar alteraciones
cromosómicas numéricas y estructurales,
constitucionales y adquiridas.
 Cariotipo
• Identifican  Las células somáticas humanas.

• Normalmente cuentan con 46 cromosomas, distribuidos en 22 pares de autosomas y 1 par de cromosomas sexuales, que
son XX para las mujeres y XY para los hombres

● Convencional: Tiene un nivel de resolución en promedio de 550 bandas, con el cual es posible detectar anormalidades en el
ADN de entre 5 – 10 Mb (megabases)

● Alta resolución involucra la sincronización de las células en profase y prometafase de la mitosis, lo que da como resultado
cromosomas elongados con un mayor número de bandas, en promedio 750 bandas.
 Muestras

Obtención y tipos de ● Requiere tejido “vivo” con capacidad de dividirse (estudio de metafases)
muestras:
● Muestras biológicas como sangre, células descamadas de la mucosa oral,
fibroblastos obtenidos de la piel, células de biopsias de tejidos y líquido
amniótico

● Es importante aclarar que cuando se parte de una muestra de sangre, ésta es

tomada en un tubo con el anticoagulante heparina.
Técnica
Indicaciones:
 Patrón de bandeamiento
 Permite la clasificación e identificación de alteraciones cromosómicas.
 El análisis depende de la longitud de los cromosomas y que tan bien están fijados, espaciados y teñidos.
 Bandas claras y oscuras dependiendo de la técnica utilizada.

Técnicas de bandeo cromosómico:

1. Resultan en bandas distribuidas a lo largo de todo el cromosomas:
-Bandeo Q
- Bandeo G
- Bandero R.
2. Tiñen estructuras especificas de los cromosomas: Bandas C y Bandeo T.
 Bandeo Q
Es considerado como el primer método de bandeamiento en cromosomas humano.

 Solución fluorescente como Quinacrina la

cual se intercala en las regiones ricas en uniones
A=T (adenina-timina), principalmente, de la
heterocromatina.

 Generando fluorescencia con un patrón de bandas

brillantes y similares a las bandas G, con lo cual
se identifica cada cromosoma.
 Bandeo G
 Es un método de bandeamiento en el cual los cromosomas son sometidos a desnaturalización de las
proteínas mediante la enzima tripsina, seguida de la tinción con el colorante Giemsa.
 Se obtiene un patrón de bandas claras que corresponden a las regiones de replicación reciente del ADN
(más ricas en genes o eucromáticas) y bandas oscuras (pobres en genes o heterocromáticas), que son de
replicación tardía
 Bandeo G
 De acuerdo con el nivel de bandeo alcanzado en el cariotipo (número de bandas visibles en los
cromosomas), el bandeamiento G permite identificar anomalías numéricas y estructurales con una
 Resolución máxima de 10 MB en un cariotipo de hasta 550 bandas.

 Este nivel de bandeo se define contando de manera estándar el cromosoma 1 (región p31-p32), el
cromosoma 10, el brazo corto del cromosoma 11, el brazo largo del cromosoma 12 y el cromosoma
X.
 Bandeo R
Las bandas R logran un patrón de bandas reverso al observado en el bandeamiento G.

 Este se logra sometiendo las láminas portaobjetos con el

extendido de cromosomas al calor (80-90°C), para luego
ser teñidos con Giemsa.

 La tinción permite hacer un contraste con respecto a las

bandas G clásicas, donde las regiones oscuras
observadas del bandeo G se aprecian claras en el
bandeamiento R y lo contrario para las bandas claras G
que son oscuras en las R.
 Bandeo C

 Permite la visualización de las regiones centroméricas y peri-

centroméricas ricas en heterocromatina.

 Utiliza la técnica básica de coloración con Giemsa; sin embargo,

antes de la tinción, los cromosomas son tratados con álcalis
como hidróxido de sodio o de bario, procedimiento que realza
las regiones heterocromáticas del cromosoma, particularmente
las que se hallan alrededor del centrómero y lográndose la
identificación de los polimorfismos presentes en estas regiones.
 Bandas NOR
 En el bandeamiento NOR (Nucleolar Organizer Region) los cromosomas fijados en la lámina portaobjetos se ponen en contacto
con una solución de nitrato de plata (AgNO3) durante 48 horas  Posteriormente se realiza una tinción con el colorante Giemsa.

Con este método es posible identificar la presencia

normalidad o anormalidad en las regiones de ADN
satélite localizadas en los brazos cortos de los
cromosomas acrocéntricos (13, 14, 15, 21 y 22).
 Evolución del cariotipo
El estudio de los cromosomas se refinó más adelante con la introducción de diversos métodos de tinción que facilitaron no
solo el conteo básico del número de cromosomas, sino también el análisis detallado de la estructura de los mismos,
permitiendo la identificación de cambios en la forma, en el tamaño, en la localización de los brazos y en la posición del
centrómero.

Cariotipo de Alta resolución

 Cariotipo de Alta resolución
Es una variante del cariotipo convencional consistente Se logra mediante la sincronización del cultivo
en obtener cromosomas elongados con un menor celular adicionando Metrotexate, el cual bloquea la
estado de empaquetamiento o condensación. mitosis de todas las células menos de aquellas que
superaron la fase S del ciclo celular.

 A diferencia del cultivo celular clásico para obtener cromosomas, las células del cariotipo de alta resolución se detienen
en la profase tardía o en la pro-metafase o en la metafase temprana.

 Los cromosomas elongados permiten la observación de un número mayor de bandas, desde 600 hasta 1.400 y pueden
evidenciar alteraciones de menor tamaño, entre las 3–5 Mb, con lo cual se duplica la resolución que se logra en un
cariotipo convencional.
 Análisis de los cromosomas
 Una vez se ha realizado cualquiera de los métodos de bandeamiento se procede al análisis de las muestras para tratar de
identificar anomalías numéricas y estructurales, lo cual se realiza bajo el microscopio.

 Con un aumento de 100X se localizan las metafases a lo largo de la lámina portaobjetos, anotándose las coordenadas del
hallazgo; y el conteo de los cromosomas se realiza normalmente con un aumento 1000X.

 Se ha establecido que el número de metafases a ser contadas de manera rutinaria en todos los casos debe ser mayor a 17 y
se deben analizar en detalle entre 5 a 10 células; de estas, usualmente se fotografían 2 para ser presentadas en el reporte por
el laboratorio.
 Parámetros para describir los cromosomas
Tamaño de cada
cromosoma.

Proporción entre el brazo corto y el

brazo largo.

Posición del centrómero

 Reporte de cariotipo normal
 Si en todas las células se observa un número diploide de 46 cromosomas y en ninguna de las metafases se
observan alteraciones estructurales, éste será informado como normal, sea 46,XX para la mujer o 46,XY para el
hombre.

El informe final de un cariotipo debe seguir el siguiente orden:

- Lo primero que se debe leer es el número total de cromosomas hallados en el extendido que incluye los cromosomas
sexuales, el cual debe ser 46 en un cariotipo normal.

- Seguido de ello debe encontrarse una coma (,) e inmediatamente después de ella y sin espacio se encuentran registrados los
cromosomas del sexo y en algunos reportes se puede encontrar registrado entre corchetes [ ], el número de metafases
analizadas.
 Continua …

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