LACTATO ENZIMÁTICO Ref.

: 138
Instruções de Uso MS 10009010258

Finalidade . Sistema enzimático para a determinação quantitativa do Metodologia . Enzimático - Trinder

(
lactato em plasma (fluoreto) e líquido cefalorraquidiano.
Reagente
Uso profissional.
1. - Reagente 1 - Armazenar entre 2-8ºC.

)
[Somente para uso diagnóstico in vitro.]
Contém tampão 50 mmol/L pH 7,2; 4-aminoantipirina ³0,05 mmol/L;
peroxidase ³1000 U/L e conservante.
Princípio . O lactato é determinado de acordo com as seguintes
reações:
2. - Reagente 2 - Armazenar entre 2-8ºC.
Contém tampão 50 mmol/L pH 7,2; lactato oxidase ³1000 U/L; N-ethyl-

<
Lactato
N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline (TOOS) ³1,5 mmol/L e
L - Lactato + O2 Piruvato + H2O2
Oxidase conservante.

Peroxidase 3. - Padrão - 40 mg/dL. Armazenar entre 2-8ºC.

2 H2O2 + TOOS + 4 Aminoantipirina Quinoneimina + 4 H2O Contém lactato de lítio e azida sódica 0,09%.
Após o manuseio armazenar bem vedado para evitar evaporação.
Na presença de oxigênio, a lactato oxidase catalisa a oxidação do ácido
lático, promovendo a formação de piruvato e peróxido de hidrogênio. Os reagentes quando armazenados nas condições indicadas são
Em seguida, ocorre uma reação de acoplamento entre o peróxido de estáveis até a data de expiração impressa no rótulo. Durante o manuseio,
hidrogênio, 4-aminoantipirina e TOOS, catalisada pela peroxidase, os reagentes estão sujeitos a contaminações de natureza química e
produzindo uma quinoneimina que tem máximo de absorbância em microbiana que podem provocar redução da estabilidade.
550 nm.
Precauções e cuidados especiais
A intensidade da cor do produto da reação é diretamente proporcional à
concentração do lactato na amostra. Para preservar o desempenho, os reagentes devem permanecer fora da
geladeira somente o tempo necessário para se obter o volume a ser
Características do sistema1,2 . O sistema utiliza a enzima lactato utilizado. Evitar exposição à luz solar direta.
oxidase na determinação da concentração de lactato presente em uma
amostra. O método enzimático é altamente específico e de simples Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
execução. manipulação do reagente. Não utilizar os reagentes quando estes se
mostrarem turvos ou com sinais de contaminação.
Os dados de repetitividade e reprodutibilidade demonstram que o método
é capaz de fornecer resultados que atendem às especificações O padrão contém azida sódica que é tóxica. Não ingerir e, no caso de
desejáveis de erro máximo, baseadas nos componentes da variação contato com os olhos, lavar imediatamente com grande quantidade de
biológica. água e procurar auxílio médico. A azida pode formar compostos
altamente explosivos com tubulações de chumbo e cobre. Portanto,
A medição em 550 nm minimiza a interferência de bilirrubina e utilizar grandes volumes de água para descartar os reagentes.
hemoglobina.
Concentrações de triglicérides até 1100 mg/dL, bilirrubina até 30 mg/dL e Materiais necessários e não fornecidos
hemoglobina até 300 mg/dL não interferem significativamente na reação.
1. Banho-maria mantido à temperatura constante (37ºC).
O produto pode ser aplicado em procedimento manual, semiautomático e
2. Fotômetro capaz de medir com exatidão a absorbância em 550 nm
automático.
(530 a 570).
3. Pipetas para medir amostras e reagentes.
4. Cronômetro.

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 3-7 Opcionalmente, pode-se preparar menor volume do Reagente de
Amostra
Trabalho utilizando a proporção 4 volumes do Reagente 1 e 1 volume do
Usar plasma (fluoreto) ou líquido cefalorraquidiano. Reagente 2. Para preparar o volume de reagente necessário para realizar
O fluoreto inibe a glicólise, sendo assim, é responsável pela estabilização um teste, misturar 0,8 mL do Reagente 1 e 0,2 mL do Reagente 2.
do lactato sanguíneo.
Para preservar seu desempenho o reagente deve permanecer fora da
geladeira somente o tempo necessário para se obter o volume a ser
Recomendações para preparo do paciente, obtenção e utilizado. Evitar exposição à luz solar direta.
processamento da amostra . Antes da realização do
procedimento de coleta de sangue o paciente deve permanecer em Procedimento . Ver Observações 1 e 2.
repouso por pelo menos 30 minutos.
Identificar 3 tubos de ensaio e proceder como descrito a seguir:
A coleta de sangue deve ser realizada preferencialmente sem
garroteamento ou imediatamente após a aplicação do torniquete. Se a
coleta não for completada logo após a aplicação do torniquete, este Branco Teste Padrão
último deve ser removido e a coleta só deve ser novamente iniciada após Amostra ----- 0,01 mL -----
2 minutos. O paciente deve evitar exercitar as mãos e os braços Padrão ----- ----- 0,01 mL
imediatamente antes e durante o procedimento de coleta. Água 0,01 mL ----- -----
Reagente de Trabalho 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
A separação por centrifugação deve ser realizada dentro de no máximo 15
minutos.
Homogeneizar e colocar em banho-maria a 37ºC durante 5 minutos. O
Após a separação, o plasma é estável 8 horas entre 20-25ºC, 14 dias
nível da água no banho deve ser superior ao nível dos reagentes no tubo
entre 2-8ºC ou 1 mês a -20ºC.
de ensaio. Determinar as absorbâncias do teste e padrão em 550 nm
(530 - 570), acertando o zero com o branco. A cor é estável por 30
O líquido cefalorraquidiano deve ser centrifugado e usado sem
minutos.
modificações adicionais.
O procedimento sugerido para a medição é adequado para fotômetros
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
cujo volume mínimo de solução para leitura é igual ou menor que 1,0 mL.
não transmitem infecções, todas devem ser consideradas como
Deve ser feita uma verificação da necessidade de ajuste do volume para o
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las devem-se seguir
fotômetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser
as normas estabelecidas para biossegurança.
modificados proporcionalmente, sem prejuízo para o desempenho do
teste, mantendo-se inalterado o procedimento de cálculo. Em caso de
Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as
redução dos volumes, é fundamental que se observe o volume mínimo
normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental.
necessário para a leitura fotométrica. Volumes de amostra menores que
0,01 mL são críticos em aplicações manuais e devem ser usados com
Interferências1 cautela porque aumentam a imprecisão da medição.

Concentrações de triglicérides até 1100 mg/dL, bilirrubina até 30 mg/dL e Cálculos . Ver linearidade.
hemoglobina até 300 mg/dL não interferem significativamente na reação.
Absorbância do Teste
Amostras com bilirrubina, hemoglobina e triglicérides em concentrações
Lactato (mg/dL) = x 40
maiores que as acima referidas devem ser diluídas em NaCl 150 mmol/L
Absorbância do Padrão
(0,85%) antes de se realizar os ensaios. Multiplicar o resultado obtido
pelo fator de diluição.
O resultado também pode ser obtido utilizando o fator de calibração:

Preparo do reagente de trabalho . O conjunto de um frasco de 40

Reagente 1 e um frasco de Reagente 2 permite preparar o Reagente de Fator de calibração =
Trabalho. Transferir o conteúdo de um frasco de Reagente 2 para um Absorbância do Padrão
frasco de Reagente 1 e homogeneizar suavemente. Identificar o frasco do
Reagente de Trabalho e anotar a data de expiração. Lactato (mg/dL) = Absorbância do Teste x Fator de calibração

Estudos demostram que o reagente de trabalho apresenta elevada Exemplos

estabilidade. Após o preparo, deve-se considerar que a data de expiração
do reagente de trabalho é a mesma dos reagentes que o compõe, desde Os dados apresentados a seguir são ilustrativos.
que mantido entre 2 e 8ºC, em recipiente fechado e quando não houver
contaminação química ou microbiana. O desenvolvimento de coloração Absorbância do Teste: 0,450
levemente rósea no Reagente de Trabalho é normal e não afeta o seu Absorbância do Padrão: 0,757
desempenho.

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 0,450 Adulto
Lactato (mg/dL) = x 40 = 24 Plasma (fluoreto)
0,757
mg/dL mmol/L
Venoso 4,5 - 19,8 0,5 - 2,2
ou
Arterial 4,5 - 14,4 0,5 - 1,6

40
A concentração de lactato no liquor normalmente é semelhante aos níveis
Fator de calibração = = 52,84
sanguíneos. Contudo, em alterações bioquímicas no SNC, os valores de
0,757
lactato no liquor alteram-se independentemente dos valores no sangue.
Lactato (mg/dL) = 0,450 x 52,84 = 24
Conversão . Unidades convencionais (mg/dL) x 0,111 = Unidades SI
(mmol/L).
Calibração

Calibrações manuais . obter o fator de calibração ao usar novo lote de

Características de desempenho12
reagentes ou quando o controle interno da qualidade indicar.
Estudos de recuperação . Em duas amostras com
Sistemas automáticos concentrações de lactato iguais a 9,8 mg/dL e 19,7 mg/dL foram
Branco de reagentes: água ou solução de cloreto de sódio 150 mmol/L adicionadas quantidades diferentes do analito, sendo obtidos os
(0,85%); seguintes resultados:
Usar calibrador Calibra H - Labtest.
Concentração (mg/dL)
Intervalos de calibração Percentual de
Calibração de 2 pontos ao mudar de lote; recuperação
Inicial Adicionada Esperada Encontrada
Calibração de 2 pontos quando o controle da qualidade indicar.
9,8 40,8 38,2 39,5 103,4%
19,7 10,2 76,4 77,1 100,9%

O erro sistemático total estimado é igual a 0,3 mg/dL para o nível de

A reação é linear até 150 mg/dL. Para valores maiores que 150 mg/dL,
13,6 mg/dL, 0,8 mg/dL para o nível de 37,1 mg/dL e 1,78 mg/dL para o
diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar nova
nível de 82,8 mg/dL. A média dos erros é menor que o erro sistemático
determinação e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.
analítico da especificação desejável baseada nos componentes da VB
que é £± 8,0%.
Controle interno da qualidade2,8,9 . O laboratório deve manter
um programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para
Estudos de comparação de métodos . A exatidão do método
especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e foi verificada por comparação com outro método enzimático, sendo
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para obtidos os seguintes resultados:
monitorizar a imprecisão da medição e desvios da calibração. Sugere-se
que as especificações para o coeficiente de variação e erro total sejam Método Lactato
baseadas nos componentes da variação biológica (VB). Comparativo Enzimático
Número de amostras 40 40
Sugere-se utilizar os produtos da linha Qualitrol - Labtest para controle Intervalo (mg/dL) 6,7 a 135,1 6,5 a 147,3
interno da qualidade em ensaios de química clínica. Lactato Enzimático = 1,060*
Equação da regressão
(MC) + 0,138 mg/dL
10,11 Coeficiente de correlação
Intervalo de referência . Estes valores devem ser usados 0,999
apenas como orientação. Recomenda-se que cada laboratório
estabeleça, na população atendida, sua própria faixa de valores de Utilizando a equação da regressão, o erro sistemático (bias) estimado é
referência. igual a 2,8% para o nível de 15,7 mg/dL e 2,9% para o nível de
44,8 mg/dL. A média dos erros é menor que o erro sistemático analítico
Recém-nascidos, crianças e adolescentes da especificação desejável baseada nos componentes da VB que é
Plasma (fluoreto) £± 8,0%.
mg/dL mmol/L
0 a 90 dias 9 - 32 1,0 - 3,5
3 a 24 meses 9 - 30 1,0 - 3,3
2 a 18 anos 9 - 22 1,0 - 2,4

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Estudos de precisão . Os estudos de precisão foram realizados A oxigenação tecidual diminuída, proveniente de hipovolemia, choque ou
utilizando duas amostras. insuficiência ventricular esquerda pode predispor o indivíduo à acidose
lática (tipo A ou hipóxica), quadro em que se encontra concentração
aumentada do lactato sanguíneo.
Repetitividade - Imprecisão intraensaio
Média O aumento do lactato sanguíneo é também observado na acidose lática
N DP CV (%)
(mg/dL) tipo B ou metabólica. Esta última está associada a doenças como
Amostra 1 80 15,7 0,11 0,71 Diabetes mellitus, neoplasia e doença hepática ou a drogas e/ou toxinas,
Amostra 2 80 44,8 0,62 1,39 como o etanol, o metanol e o salicilato.

Após exercício físico de longa duração a produção do lactato pode

aumentar consideravelmente. Para avaliar a capacidade de exercício e
Reprodutibilidade - Imprecisão total monitorar a intensidade de treinamento dos atletas pode ser realizada a
Média determinação do lactato sanguíneo.
N DP CV (%)
(mg/dL)
Amostra 1 80 15,7 0,72 4,61 A concentração do lactato no liquor normalmente é semelhante aos níveis
Amostra 2 80 44,8 1,26 2,81 sanguíneos. Contudo, em alterações bioquímicas no SNC, os valores de
lactato no liquor alteram-se independentemente dos valores no sangue.
Níveis aumentados no liquor são observados em acidentes vasculares
A imprecisão encontrada atende à especificação desejável para cerebrais, hemorragia intracraniana, meningite bacteriana, epilepsia e
imprecisão total baseada nos componentes da VB que é £13,6%. outros distúrbios do SNC.

O erro total (erro aleatório + erro sistemático) estimado é igual a 10,39% Observações
para o nível de 15,7 mg/dL e 7,55% para o nível de 44,8 mg/dL. Os
resultados indicam que o método atende à especificação desejável para 1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores
erro total (£30,4%) baseada nos componentes da VB. fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados
corretos.
Sensibilidade metodológica . Uma amostra contendo 15 mg/dL
de lactato foi utilizada para calcular o limite de detecção do ensaio, tendo 2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
sido encontrado um valor igual a 0,4 mg/dL, equivalente a três desvios precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa
padrão de uma corrida analítica com 20 replicatas. potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a
qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes,
Utilizando-se de absorbância do padrão como parâmetro verificou-se que usar nas medições e para uso no enxágue final da vidraria, a água deve ter
o limite de detecção fotométrica é 0,05 mg/dL, correspondendo a uma resistividade ³1 megaohm.cm ou condutividade £1 microsiemens/cm e
absorbância de igual a 0,001. concentração de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora está
com sua capacidade saturada ocorre liberação de vários íons, silicatos e
Efeitos da diluição da matriz . Uma amostra com concentração substâncias com grande poder de oxidação ou redução que deterioram
igual a 151 mg/dL foi utilizada para avaliar a resposta do sistema na os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados
diluição da matriz com solução de NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando de modo imprevisível. Assim, é fundamental estabelecer um programa de
fator de diluição de 2 a 16 foi encontrada recuperação média de 102,5% controle da qualidade da água.
que corresponde a um erro sistemático médio igual a 2,5%.
Referências
Significado clínico10 . O lactato é o produto final da degradação da
glicose na ausência de oxigênio (glicólise anaeróbica) e é produzido pela 1. Artiss JD, Karcher RE, Cavanagh KT, Collins SL, Peterson VJ, Varma S,
redução do piruvato. O lactato é produzido em todos os tecidos; Zak B. A Liquid-Stable Reagent for Lactic Acid Levels - Application to
entretanto, o músculo esquelético, o cérebro e as hemácias são the Hitachi 911 and Beckman CX7. Am J Clin Pathol 2000; 114:139-
responsáveis pela produção da maior parte do lactato do organismo. A 143.
produção normal de lactato é de 1 mmol/Kg/hora. A concentração de
lactato no sangue depende da taxa de produção e da taxa de metabolismo 2. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,
no fígado e nos rins. Aproximadamente 30% da produção basal total de Base de Datos de Variación Biológica. Disponível em:
lactato é utilizada pelo fígado com predominância na gliconeogênese. <http://www.seqc.es/article/articleview/330/1/170> (acesso em
04/2006).
Concentração aumentada do lactato no sangue indica um decréscimo do
fluxo sanguíneo para os tecidos, com consequente diminuição do 3. Tietz. Textbook of Clinical Chemistry, Burtis CA.; Ashwood ER. eds, 2ª
fornecimento de oxigênio. edição, Philadelphia: WB. Saunders Co, 1994.

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determination of lactic acid in blood. Clin Chem 1966; 12:559-569.
Produto Referência Conteúdo
5. Westgard JO, Lahmeyer BL, Birnbaum ML. Use of the Du Pont 1 1 X 40 mL
“Automatic Clinical Analyzer” in Direct Determination of Lactic Acid in Lactato Enzimático 138-1/50 2 1 X 10 mL
Plasma Stabilized with Sodium Fluoride. Clin Chem 1972; 18 (11): CAL 1 X 5 mL
1334-1338. 1 2 X 16 mL
Lactato Enzimático
138-2/20 2 2 X 4 mL
6. Astles R, Williams CP, Sedor F. Stability of Plasma Lactate in Vitro in the Labmax 560/400
CAL 1 X 5 mL
Presence of Antiglycolytic Agents. Clin Chem 1994; 40 (7): 1327-
1330.
Informações ao consumidor
7. The Quality of Diagnostics Samples, Samples and Stability of Analytes.
Disponível em: [Termos e Condições de Garantia]
<http://www.diagnosticsample.com/samples.php3?lang=en>
(acesso em 27/05/09). A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto, dentro das
especificações, até a data de expiração indicada nos rótulos, desde que
8. Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest os cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e
Diagnóstica 2005. nestas instruções sejam seguidos corretamente.

9. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-
501.

10. Tietz. Fundamentos de Química Clínica, Burtis CA; Ashwood ER. eds,
Labtest Diagnóstica S.A.
4ª edição, Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1998.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
11. Pediatric Reference Ranges. Soldin SJ; Brugnara C; Wong EC. eds, 5ª
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
edição, Washington, DC: AACC Press, 2005.
Serviço de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligação Gratuita)
e-mail: sac@labtest.com.br
12. Labtest: Dados de Arquivo.

Revisão: Outubro, 2012 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.

Ref.: 260117 Reprodução sob prévia autorização

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