Determinación de Catequinas en Te Verde Por HPLC

COMPARACIÓN DE COLUMNA CHROMOLITH HIGH RESOLUTION VS COLUMNAS
CONVENCIONALES
DETERMINACIÓN DE CAFEINA EN BEBIDAS.
I. INTRODUCCIÓN:
La cromatografía Líquida ha cobrado una vital importancia en los últimos años para
muchas de las pruebas de control de Calidad en la Industria Alimentaria. Juntamente a esto,
la innovación en los instrumentos cromatográficos y sus componentes han hecho aún más
vital su uso en el proceso, dada las exigencias actuales de las entidades Alimentarias
regulatorias.
El principal objetivo en el control de calidad, es obtener resultados de análisis en menor
tiempo sin afectar la eficacia ni la eficiencia de los ensayos. Dada la importancia de esto en
la Industria Alimentaria por la alta demanda de producción, se puede concluir que es de
vital importancia contar con tal tecnología de tal manera que agilice el proceso día a día.
Merck KgA tomando en cuenta la dificultad existente, ha diseñado las columnas

CHROMILTH HIGH RESOLUTION con tecnología especial para altas presiones y flujos
elevados que llevarán a tiempos de retenciones cortos, con picos de alta resolución,
mejorando el desempeño en el proceso de producción.
II. OBJETIVO:
Comparar el desempeño de la columna CHROMOLITH HIGH RESOLUTION C18 100 x

4.6 mm VS una columna Kinetex 5µm C18 100 Å 100 x 4.6 mm en la
“CUANTIFICACIÓN DE CAFEINA EN BEBIDAS GASEOSAS”
III. MÉTODO
 Método HPLC <621 Cromatografía> USP 35

 Equipo: CROMASTER HITACHI con Detector UV.
 Columna L1 –C18 250 x 4 mm
 Detector: 254 nm
 Volumen de Inyección 25 uL
 Flujo: 1.5 ml/min
IV. MATERIAL
De Vidrio y otros:
 1 probetas de 500 mL
 2 beakers 10 mL
 2 beakers 20 mL
 2 Fiolas de 100 mL
 5 Fiolas de 50 mL (volumétrica)
 2 Fiolas de 25 mL (volumétrica)
 3 pipetas volumétricas de 5 mL
 2 pipetas Volumétricas de 1 mL
 2 pipetas de 1 mL
 Frasco de Vidrio de 500/ 1000 /100mL
 6 filtros de jeringas PVDF 0.45
 5 viales.
Estándar
 Estándar USP Cafeina
Muestra problema:
 250 mL Gaseosa Coca-Cola
 250 mL Gaseosa Pepsi.
 250 mL Gaseosa otra marca.
Reactivos:
 Metanol HPLC 500 mL
 Agua grado HPLC
Columnas Cromatográficas:
 Chromolith High Resolution C18 100 x 4.6 mm
 Kinetex 5µm C18 100 Å, 100 x 4.6 mm
 Purospher® STAR RP-18 endcapped, 120 A, 5 μm 250 x 4 mm
V. PROCEDIMIENTO:
a) Preparación de la Fase Móvil:

1. 50:50 Metanol: Agua
b) Preparación de Valoración:
1. Para muestras de soda, es importante desgasificar primero las muestras con
agitación constante con una varilla de vidrio hasta la ausencia de burbujas,
o colocar la muestra en un sonicador, o dejarla por toda una noche un día
antes del ensayo.
2. Filtrar la muestra a través de un filtro 0.45 con una jeringa de 5 mL.
Eliminar el primer 1mL. Seguidamente colocar el filtrado directamente en
el vial.
3. Lavar la aguja de filtración con 2 a 3 mL de la fase móvil metanol/agua
entre cada uso.
c) Preparación del Estándar de Cafeína:

1. Preparar una solución estándar conteniendo 50 ppm y 100ppm y 200ppm
de Cafeína con la FASE MOVIL.
2. Filtrar el estándar a través de un filtro 0.45 con una jeringa de 5 mL.
Eliminar el primer 1mL. Seguidamente colocar el filtrado directamente
en el vial.
3. Lavar la aguja de filtración con 2 a 3 mL de la fase móvil metanol/agua
entre cada uso.
d) Procedimiento: Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales

(aproximadamente 25 uL) de la Preparación estándar y de la Preparación de
valoración mediante una micro jeringa o una válvula de muestreo adecuadas,
registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos
principales.
VI. CALCULOS:
- Usando los resultados de las soluciones estándares, preparar una curva de calibración
graficando el área del pico Vs la concentración de cafeína en ppm.
- Usar la curva de calibración para determinar cantidades de cafeína en las muestras
expresándolas en ppm, mg/mL.
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1. WESTIRN PHARMACY COLLEGE: Determination of Caffeine in Beverages. (En

Línea). Fecha de Acceso: Septiembre del 2013. Disponible en:
http://www.westminster.edu/acad/sim/documents/SDeterminationofCaffeineinBeverage
s.pdf.

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COMPARACIÓN DE COLUMNA CHROMOLITH HIGH RESOLUTION VS COLUMNAS

DETERMINACIÓN DE CAFEINA EN BEBIDAS.

Merck KgA tomando en cuenta la dificultad existente, ha diseñado las columnas

Comparar el desempeño de la columna CHROMOLITH HIGH RESOLUTION C18 100 x

 Método HPLC <621 Cromatografía> USP 35

 Estándar USP Cafeina

a) Preparación de la Fase Móvil:

c) Preparación del Estándar de Cafeína:

d) Procedimiento: Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. WESTIRN PHARMACY COLLEGE: Determination of Caffeine in Beverages. (En

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