Angel Gutierrez, Jorge Sebastian

Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE
N
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum
RM
sobre el crecimiento de Escherichia coli y

FO
Staphylococcus aureus en condiciones de

laboratorio, 2014
IN
DE
AS
TESIS
EM
PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL

ST
BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO
SI
DE
BIÓLOGO Angel Gutierrez

Autor : Br. Jorge Sebastian
N
IO
Asesor : Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

CC
TRUJILLO - PERU
RE
2015
DI
1
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia
2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE
TRUJILLO
N
IÓ
AC
Dr. Orlando Gonzáles Nieves
IC
UN
RECTOR
M
CO
Y
A
IC
Dr. Rubén Vera VélizÁT
RM
VICERECTOR ACADÉMICO
FO
IN
DE
AS
EM
Dr.Weyder Portocarrero Cárdenas

ST
SI
VICERECTOR DE INVESTIGACIÓN
DE
N
IO
CC
RE
DI
Dr. Esteban Ilich Zerpa
SECRETARIO GENERAL
2
AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS
BIOLÓGICAS
N
IÓ
AC
IC
UN
Dr. José Mostacero León
M
CO
DECANO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
Dr. William Zelada Estraver

DE
SECRETARIO
AS
EM
ST
SI
DE
N
Dra. Bertha Soriano Bernilla

IO
CC
DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

RE
MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA.
DI
3
MIEMBROS DEL JURADO
Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en
concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y
N
IÓ
Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.
AC
IC
UN
M
CO
Y
_________________________________
A
IC
Dra. Icela Rodriguez Haro
ÁT
PRESIDENTE
RM
FO
IN
DE
AS
_________________________________
EM
Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

ST
SECRETARIO
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
_________________________________
Ms. C. Aníbal Quintana Díaz
VOCAL
4
AGRADECIMIENTO
A mi asesor, Dr. Luis Alberto Llenque Díaz, por brindarme su tiempo, apoyo y
dedicación, así como las sugerencias constructivas durante el desarrollo de la presente
N
IÓ
investigación, además por brindarme su amistad y conocimientos académicos durante mi
AC
IC
formación profesional.
UN
M
CO
A mis compañeros y amigos Omar, Arturo y Laura por brindarme su apoyo en parte
Y
del desarrollo de la presente tesis.
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
5
DEDICATORIAS
A Dios
Por estar conmigo en cada paso que doy, cuidándome y dándome fuerzas para
seguir adelante y no desalentarme en el intento, por haberme dado salud para lograr
N
IÓ
mis objetivos y permitir llegar a este momento importante de mi vida profesional.
AC
IC
UN
A mi hijo David
M
Por darme la alegría y placer de ser padre, guiarme y cuidarme desde el
CO
cielo, solo tengo tu recuerdo pero eres el motivo de mí existir y constante lucha del
Y
A
día a día en mi vida. Te amo hijo mío.
IC
ÁT
A mi madre Teodora
RM
Por ser el motivo de mi existencia, por sus consejos, comprensión, amor,

FO
valores, y apoyo incondicional en todo momento, por inculcar en mí el sabio don de

IN
la responsabilidad ¡Gracias por estar siempre conmigo! A pesar de la distancia.

DE
AS
EM
A mi padre Armando
ST
A quien admiro porque es un ejemplo de esfuerzo y sacrificio, a no darse por

SI
vencido ante cualquier dificultad, a pesar de las diferencias siempre te tengo presente,
DE
gracias por tus consejos.

N
IO
CC
RE
DI
6
PRESENTACIÓN
Señores Miembros del Jurado:
N
IÓ
En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y
AC
IC
Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la
UN
Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra
M
CO
consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:
“Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el crecimiento Escherichia coli
Y
A
IC
y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio, 2014” con el cual pretendo
ÁT
obtener el Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.
RM
FO
IN
DE
Trujillo, Junio del 2015

AS
EM
ST
SI
DE
Br. Jorge Sebastián Angel Gutierrez

N
IO
CC
RE
DI
7
CERTIFICACIÓN DEL ASESOR
El que suscribe, docente asesor de la tesis titulada:
N
IÓ
AC
“Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el crecimiento Escherichia coli
IC
UN
y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio, 2014”
M
CO
Y
Certifica que la tesis ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por
A
IC
la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en
ÁT
conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado
RM
acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.

FO
IN
DE
Por lo tanto, autorizo a Jorge Sebastian Angel Gutierrez continuar con el trámite
AS
del reglamento correspondiente.

EM
ST
Trujillo, Junio del 2015

SI
DE
N
IO
CC
_________________________________
RE

DI
ASESOR
8
APROBACIÓN
Los docentes que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que el presente
Informe de Tesis titulado: “Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el
N
IÓ
crecimiento Escherichia coli y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio,
AC
IC
2014”, ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO
UN
por UNANIMIDAD.
M
CO
Y
_________________________________
A
IC
Dra. Icela Rodriguez Haro
ÁT
PRESIDENTE
RM
FO
IN
DE
AS
_________________________________
EM

ST
SECRETARIO
SI
DE
N
IO
CC
RE
_________________________________
DI
Ms. C. Aníbal Quintana Díaz
VOCAL
9
CONTENIDO
Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo………………………….……….ii
Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas……………………….…………. iii
N
IÓ
Miembros del jurado………………………………………………………..…………iv
AC
Agradecimiento………………..………………………….….………………………..v
IC
UN
Dedicatoria………………………………………………………...……….………....vi
M
CO
Presentación…………………………………………………….………….………....vii
Certificación del Asesor…………………………………...…….………….………..viii
Y
A
Aprobación………………………………………………...……………….…………ix
IC
ÁT
Contenido…………………………………………………….………………………..x
RM
Resumen…………………………………………………………………………...... xi
FO
INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………….1
IN
Objetivos………..………………………………………………………………….....10
DE
MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………………………….11
AS
1. Material biológico………………………………………………………………..11
EM
ST
2. Procedimiento……………………………………………………………………11
SI
2.1 Recolección y tratamiento de los frutos de V. corymbosum………………...11

DE
2.2 Obtención del extracto de V. corymbosum …………………………………11

N
IO
2.3 Preparación de las concentraciones de V. corymbosum………………….….12

CC
2.4 Determinación del efecto del extracto de V. corymbosum …………………12

RE
DI
2.4.1 Reactivación del cultivo bacteriano……………………………………...12
2.4.2 Preparación de inóculo bacteriano……………………………………….12
2.4.3 Siembra en placas………………………………………………………..12
10
2.4.4 Preparación de excavaciones y colocación de los discos………………..13
2.4.5 Lectura de resultados…………………………………………………….13
3. Análisis de resultados……………………………………………………………..14
N
RESULTADOS………………………………………………………………………...15
IÓ
AC
DISCUSIÓN……………………………………………………………………………19
IC
UN
ENUNCIADO RESUMEN…………………………………………………………….24
M
RECOMENDACIONES……………………………………………………………….25
CO
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………………26
Y
A
ANEXOS……………………………………………………………………………….31
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
11
RESUMEN
El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del
N
extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” sobre el crecimiento de
IÓ
AC
Escherichia coli y Staphylococcus aureus mediante un diseño experimental de
IC
estímulo creciente. Para ello se trituraron los frutos, se filtró y se obtuvo el
UN
extracto del Arándano al 100% y se prepararon las concentraciones al 75% y 50%
M
CO
por dilución con agua destilada estéril. La prueba de sensibilidad se realizó
Y
mediante el método de Kirby Bauer, utilizando 50µL de extracto de cada
A
IC
concentración vertidos en las excavaciones de 6mm diámetro en placas con agar
ÁT
Muller – Hinton previamente sembrados por superficie con E. coli y S. aureus por
RM
separado con concentraciones iguales al tubo N° 0.5 de Mac Farland, se usó como
FO
IN
Control, discos de sensibilidad de Gentamicina. La lectura se hizo a las 18 horas

DE
de incubación a 37°C en estufa. Se midieron los diámetros de inhibición (mm) de

AS
cada una de las concentraciones para E. coli y S. aureus, obteniéndose un

EM
promedio de los halos de inhibición. Para el análisis de datos se empleó la prueba

ST
de ANOVA para evaluar si existe diferencia significativa entre las medias para
SI
DE
cada bacteria y una prueba de Tukey y Duncan para evaluar si existe diferencia
N
significativa entre las concentraciones que inhiben mejor el crecimiento de E. coli

IO
CC
y S. aureus. Los resultados demostraron que hay mayor inhibición a mayor

RE
concentración del extracto de Vaccinium corymbosum, siendo la que produce

DI
mayor inhibición la concentración al 100% y mejor efecto inhibitorio sobre el
crecimiento de S. aureus que E. coli.
12
I. INTRODUCCIÓN
El interés de muchos investigadores por combatir las enfermedades trasmitidas
ya sea a través de los alimentos o de manera endógena es muy grande ya que la
N
IÓ
mayoría de las bacterias que la producen han adquirido cierta resistencia a los
AC
antibióticos y esto se reconoce ampliamente como una amenaza para el ejercicio
IC
UN
médico en todo el mundo. Esta resistencia que apareció con mayor incidencia en los
M
ambientes hospitalarios, por ejemplo las reportadas a Klebsiella, Pseudomona
CO
aeruginosa y Acinetobacter, en especial en las Unidades de Cuidados Intensivos, y
Y
A
a Staphylococcus aureus meticilino resistentes y vancomicino resistentes, se ha ido
IC
ÁT
difundiendo a infecciones bacterianas adquiridas en la comunidad, tales como
RM
neumonía, gonorrea e infecciones del tracto urinario, cada vez más difíciles de
FO
tratar con los antibióticos usuales. 1

IN
DE
Las plantas, por su biodiversidad y riqueza en metabolitos secundarios,

AS
proporcionan una interesante fuente de posibles sustancias activas contra muchas

EM
bacterias; por esto, en los últimos años se ha ido desarrollando un creciente interés
ST
en varios centros de investigación de todo el mundo en búsqueda de efectos

SI
DE
antibacterianos de extractos de múltiples especies vegetales. 1 En este sentido, se

N
han realizado numerosas investigaciones empleando plantas medicinales, en unos

IO
CC
casos extracto de canela, en otros el ajo bajo la forma de extracto, aceite o polvo.
RE
En Pardo (2010), los investigadores Jones y Tamariz emplearon sangre de grado

DI
obtenida del Croton lechleri, logrando un efecto inhibidor sobre Helicobacter
pylori. Lengsfeld, utilizó el extracto seco del zumo del Ribes nigrum, con lo que se
consiguió bloquear los receptores de la mucosa gástrica impidiendo con ello la
1
adhesión del H. pylori a la mucosa. Estudios realizados con extracto de cocona
puro, utilizado a diversas concentraciones desde 0,1 a 0,5 mL, mostró una gran
actividad inhibiendo el crecimiento de H. pylori en un 100%, lo que se considera un
hallazgo valioso, que amerita la realización de una posterior investigación in vivo; a
N
IÓ
fin de determinar la efectividad del extracto de cocona en el tratamiento de las
AC
IC
infecciones humanas por H. pylori2.
UN
M
Así mismo las propiedades medicinales del ajo, se conocen desde la antigüedad
CO
en donde los Chinos y Egipcios ya lo utilizaban alimentando con ajos a los esclavos
Y
que construían las pirámides porque creían que el ajo les aportaba energía, también
A
IC
se empleaba en el proceso de momificación y como moneda, el naturalista romano
ÁT
RM
Plinio “el viejo” citó numerosos usos terapéuticos del ajo y la cebolla que eran
FO
invocados como deidades por los Egipcios en la toma de juramentos y en el año

IN
1550 A.C. se dan recetas curativas en el papiro egipcio de Ebbers, el cual incluye
DE
800 fórmulas magistrales de las cuales 22 hacen referencia al ajo, se recomienda

AS
contra las infecciones, los tumores, enfermedades cardiacas, dolores de cabeza,

EM
mordiscos y parásitos intestinales. 3

ST
SI
De la misma manera las frutas en general tienen un valor nutricional y un efecto

DE
potenciador de la salud4. El arándano o “blueberry” es el fruto de un arbusto

N
IO
perenne, generalmente de hoja caduca, nativo del Hemisferio Norte, que pertenece
CC
a la familia de las Ericáceas, y al género Vaccinium. El arándano es una fruta baja

RE
DI
en calorías y sodio, fuente de fibras y pectinas destacándose su alta concentración
en vitamina C. Este fruto se consume tanto fresco como procesado. El arándano se
destaca no solo como fruto comestible, sino también en medicina (antioxidante,
2
vásculo-protector, antiséptico urinario), industria de colorantes, pastelería,
mermeladas, conservas, yogures, golosinas, etc5.
El arándano americano, fruto de Vaccinium macrocarpon Aiton, ha demostrado
N
IÓ
un efecto beneficioso sobre el mantenimiento de la salud de las vías urinarias,
AC
debido a su composición en proantocianidinas, proporciona un beneficio adicional
IC
gracias a su actividad inhibitoria de la adherencia bacteriana, por lo que puede tener
UN
M
un efecto beneficioso en determinadas afecciones bacterianas5. La evidencia clínica
CO
demuestra que su consumo puede disminuir la recurrencia de infecciones del tracto
Y
urinario (ITUs), y este efecto ha sido estudiado principalmente en mujeres, aunque
A
IC
también se ha obtenido una importante reducción de la frecuencia de estas
ÁT
RM
infecciones en hombres. Los principales componentes del arándano americano son

FO
las proantocianidinas, mayoritariamente del tipo A, las antocianinas, los flavonoles,

IN
ácidos fenólicos, ácidos quínico, málico y cítrico, iridoides, ácido ursólico, frutosa
DE
y otros azúcares6.
AS
EM
En los últimos años, se ha demostrado también una acción antibacteriana más

ST
directa del arándano relacionado con distintos grupos de constituyentes. Se ha

SI
observado in vitro que las tres fracciones constituida por azúcares y ácidos
DE
orgánicos, compuestos fenólicos o por las antocianinas, poseen acción an-

N
IO
tibacteriana frente a Escherichia coli. La acción de los compuestos fenólicos y

CC
antocianinas se produce a través de una interacción específica que induce la

RE
DI
desintegración localizada de la membrana exterior de la bacteria, y que podría estar
relacionada con la quelación de iones metálicos y por la inducción de cambios en la
3
expresión de diferentes genes; sin embargo, la actividad de la fracción de azúcares
y ácidos orgánicos parece estar relacionada con un efecto de shock osmótico 6.
Los protocolos para evaluar los principios activos de las plantas sobre los
N
IÓ
microbios se ha logrado estandarizar, tal es así que Ardila et al (2009) realizaron
AC
ensayos para determinar la actividad antibacteriana de extractos de Allium sativum,
IC
Coriandrum sativum, Eugenia Caryophyllata, Origanum vulgare, Rosmarinus
UN
M
officinalis y Thymus vulgaris frente a Clostridium perfringens (cepa ATCC: 13124)
CO
por el método de Kirby Bauer en agar SPS, utilizando la vancomicina como control
Y
en el cual se observa cómo los extractos hexano-cloroformo y hexano-acetona de
A
IC
Origanum vulgarey Thymus vulgaris, no produjeron un efecto inhibitorio sobre
ÁT
RM
Clostridium perfringens; en cambio Eugenia caryophyllatay y Allium sativum,

FO
muestran efectos inhibitorios7. De la misma manera García Rico y Herrera Arias

IN
(2007) determinaron la inhibición de crecimiento de Escherichia coli, Salmonella

DE
spp, Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa y Bacillus cereus por

AS
extractos acuosos Allium sativum, Allium fistulosum y Allium cepa en el cual los
EM
resultados son más eficientes para Staphylococcus aureus el cual presenta halos de
ST
SI
mayor tamaño8.
DE
Por otro lado Arilmi et al determinaron la actividad antimicrobiana de Allium

N
IO
sativum L y Bixa orellana L en el cual los resultados del análisis antimicrobiano de

CC
ambos extractos, indican formación de halos de inhibición de crecimiento

RE
DI
microbiano de Escherichia coli, Enterobacter aeruginosa, Klebsiella sp, Proteus
vulgaris, Staphylococcus aureus y Candida albicans cuando los que evaluaron
frente al extracto hidroalcohólico de Bixa orellana por el método de placas Petri
4
excavadas y de Aspergillus niger sobre placas CCD de silicagel cuando se
realizaron el ensayo empleando el extracto acuoso de Allium sativum y cuyos
resultados validan sus actividades antimicrobianas 9.
N
IÓ
Las infecciones de las vías urinarias son un problema de salud mundial, con una
AC
proporción de 9 a 1 en la mujer respecto del hombre. En 90% de los casos la
IC
bacteria que la origina es Escherichia coli. Durante la vida reproductiva, esta
UN
M
infección es motivo de gran cantidad de incapacidades laborales, de ahí la
CO
necesidad de insistir en su profilaxis. El jugo de arándano rojo es una opción para
Y
prevenir la infección de vías urinarias, cualidad demostrada en diferentes
A
IC
publicaciones recientes, en las que se destaca que su mecanismo de acción radica en
ÁT
RM
el efecto que ejercen las proantocianidinas, especialmente las de tipo A, en el

FO
urotelio, que evitan que E. coli se adhiera a éste; es así como ejerce su acción
IN
antibacteriana, que se consigue con la ingestión de, por lo menos, 300 mL de jugo
DE
al día10.
AS
EM
Las enterobacteriáceas son un vasto grupo heterogéneo de bacilos gramnegativos

ST
cuyo hábitat natural es el intestino de humanos y animales. Esta familia incluye

SI
muchos géneros por ejemplo, Escherichia, Shiguella, Salmonella, Enterobacter,

DE
Klebsiella, Serratia, Proteus y Otros. Algunos microorganismos entéricos, como E.

N
IO
coli, forman parte de la flora normal e incidentalmente causan enfermedad 11. En las
CC
dos últimas décadas se ha apreciado un marcado incremento en la incidencia

RE
DI
registrada de intoxicaciones alimentarias microbianas en Europa y Norteamérica.
Concretamente, se ha visto un aumento en la frecuencia de salmonelosis, enteritis
por Campylobacter, listeriosis y colitis hemorrágica, debida esta última a E. coli
5
enterohemorrágica serotipo O157:H7. En la actualidad se reconocen 5 categorías
enteropatógenas de E. coli: enterotoxigénicas, enteroinvasivas, enteropatógenas
clásicas, enterohemorrágicas y enteroagregativas12.
N
IÓ
Los estafilococos son células esféricas gramposisitvas, generalmente dispuestas
AC
en racimos irregulares parecidos a racimos de uvas, crecen con rapides sobre
IC
muchos tipos de medios. El género Staphylococus contiene al menos 30 especies,
UN
M
tres de importancia clínica son Staphylococus aureus, Staphylococus epidermidis y
CO
Staphylococus saprophyticus. El primero es coagulasa-positivo, que lo diferencia
Y
de las otras especies11. Generalmente, S. aureus es agente etiologico de diversas
A
IC
patologías, incluyendo infecciones de piel y tejidos blandos, bacteremia
ÁT
RM
endocarditis, infección del SNC y del tracto genitourinario. Por su ubicuidad y en

FO
función de los procedimientos médicos y uso de antimicrobianos, se confiere

IN
especial énfasis al aislamiento y estudio epidemiológico de S. aureus, considerando

DE
su rol primordial en las infecciones nosocomiales13 .

AS
EM
En la comunidad, las infecciones por S. aureus son a menudo agudas, piogénicas

ST
y superficiales, aunque también puede producir, con menor frecuencia, infecciones

SI
profundas como osteomielitis, neumonía y endocarditis aguda. A nivel nosocomial

DE
S. aureus es un importante agente de infecciones de herida quirúrgica, de prótesis y

N
IO
otras. También S. aureus es causa de una serie de infecciones producidas por

CC
toxinas como el síndrome del shock tóxico, la intoxicación alimentaria y el

RE
DI
síndrome de piel escaldada. Se caracteriza por poseer resistencia para diferentes
antimicrobianos, mediante la producción de penicilinasa. Otras cepas comunitarias
son resistentes a meticilina u oxacilina, y en cuanto a los aislamientos de origen
6
nosocomial, un elevado porcentaje de los mismos tienen varios determinantes de
resistencia y fundamentalmente resistencia a meticilina, asociada a resistencia a
aminoglucósidos, macrólidos y quinolonas14.
N
IÓ
Los antimicrobianos se definen, como medicamentos que destruyen los
AC
microorganismos o impiden su multiplicación o desarrollo y puede ser producido
IC
en forma natural por microorganismos o sintéticamente en el laboratorio y se
UN
M
dividen en antibacterianos, antivirales, antimicóticos, antimicobacterianos,
CO
antiparasitarios y antirretrovirales. La primera familia de medicamentos
Y
antibacterianos que aparecieron en la terapéutica son las penicilinas. El mecanismo
A
IC
de acción de las penicilinas consiste en una inhibición de la síntesis de la pared
ÁT
RM
celular a través de la inhibición de la enzima transpeptidasa15.

FO
Las penicilinas se dividen en diferentes grupos. El primer grupo incluye a las

IN
DE
penicilinas G y V. Las penicilinas G más utilizadas son la penicilina G procainica y

AS
la penicilina G benzatinica. Estas tienen un amplio espectro de acción que incluye

EM
streptococcus, enterococos, listeria, meningococo, espiroquetas, entre otros. El

ST
segundo grupo se conoce como penicilinas penicilinasa-resistente, o

SI
isoxazolilpenicilinas, e incluye a la meticilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina

DE
y nafcilina. Su espectro de acción es, principalmente en cocos Gram (+)

N
IO
productoresde β-lactamasas, como el staphylococcus aureus y el staphylococcus

CC
RE
epidermidis. El tercer grupo se les llama aminopenicilinas, y sus ejemplos clásicos

DI
son la ampicilina y la amoxicilina. Tienen un espectro similar a las penicilinas G y
V, pero son inactivados por la lactamasa β. Además, este grupo amino incluye
7
acción contra enterobacteriaceae, E. coli, proteus mirabilis, salmonella, shigella,
haemophilus influenzae y helicobacter pylori15.
El antibiograma define la actividad in vitro de un antibiótico frente a un
N
IÓ
microorganismo determinado y refleja su capacidad para inhibir el crecimiento de
AC
una bacteria o población bacteriana16. El antibiograma disco-placa basado en el
IC
trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores es uno de los métodos que el National
UN
M
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) recomienda para la
CO
determinación de la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos. El antibiograma
Y
disco-placa consiste en depositar, en la superficie de agar de una placa de petri
A
IC
previamente inoculada con el microorganismo, discos de papel secante
ÁT
RM
impregnados con los diferentes antibióticos. Tan pronto el disco impregnado de

FO
antibiótico se pone en contacto con la superficie húmeda del agar, el filtro absorbe
IN
agua y el antibiótico difunde al agar. El antibiótico difunde radialmente a través del

DE
espesor del agar a partir del disco formándose un gradiente de concentración.

AS
Transcurridas 18-24 horas de incubación los discos aparecen rodeados por una zona
EM
de inhibición17.
ST
SI
DE
JUSTIFICACIÓN
N
IO
CC
Teniendo en cuenta que en la actualidad existen enfermedades recurrentes causadas

RE
por muchas bacterias dentro de las cuales se encuentran Staphylococcus aureus y

DI
Escherichia coli capaces de invadir y causar infecciones, además se sabe que están
siendo resistentes a los antibióticos tradicionales por el uso irracional de los
mismos. Así mismo, existe escasa bibliografía de consulta con relación a los efectos
8
de Vaccinium corymbosum “Arándano” sobre el crecimiento bacteriano; entonces,
el presente trabajo pretendió investigar el efecto de diferentes concentraciones del
extracto de V. corymbosum sobre el crecimiento de E. coli y S. aureus en
condiciones de laboratorio y valorar su uso potencial en la medicina como en la
N
IÓ
industria alimentaria, farmacéutica y microbiológica.
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
9
OBJETIVOS
1. Determinar el efecto del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las
N
IÓ
concentraciones de 100%, 75% y 50% sobre el crecimiento de Escherichia
AC
coli y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio.
IC
UN
M
2. Comparar el efecto del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las
CO
concentraciones 100%, 75% y 50% sobre el crecimiento de E. coli, S. aureus, y
Y
el antibiótico Control Gentamicina.
A
IC
ÁT
RM
3. Determinar si existe diferencia significativa o no entre los promedios de los

FO
halos de inhibición obtenidos con cada una de las concentraciones ensayadas

IN
para cada bacteria.

DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
10
II. MATERIAL Y MÉTODOS
1. Material biológico
Frutos maduros de Vaccinium corymbosum “Arándano” procedentes de la provincia
N
IÓ
de Virú, adquiridos de los supermercados de la ciudad de Trujillo Región La Libertad.
AC
IC
Cultivos de Escherichia coli, proporcionados por el laboratorio de Microbiología y
UN
M
Tecnología de Alimentos.
CO
Y
Cultivos de Staphylococcus aureus, proporcionados por el laboratorio de
A
IC
Microbiología y Tecnología de Alimentos. ÁT
RM
2. Procedimiento
FO
IN
2.1. Recolección y tratamiento de los frutos de V. corymbosum

DE
Los frutos maduros fueron recolectados en recipientes de plásticos (Anexo 1, Fig.

AS
4a) y transportados al laboratorio. Luego fueron lavados con agua corriente y

EM
desinfectados con solución de hipoclorito de sodio al 0,1% durante 3 min.

ST
Posteriormente fueron lavados progresivamente con agua destilada estéril hasta

SI
DE
eliminar el olor característico del hipoclorito de sodio18.

N
IO
2.2. Obtención del extracto de V. corymbosum

CC
Los frutos fueron pelados y triturados con la ayuda de un mortero (Anexo 1, Fig.
RE
4b); después se filtró con papel de filtro Whatman Nº 10, y el filtrado se guardó
DI
en frascos ámbar en refrigeración hasta su evaluación, lo que constituyó el
extracto a una concentración del 100 %.
11
2.3. Preparación de las concentraciones de V. corymbosum
A partir del extracto obtenido anteriormente (100%), se hizo diluciones seriadas
con agua destilada estéril para obtener las concentraciones acuosas de 75% y 50%
(Anexo 1, Fig. 4e), los mismos que fueron guardados en frascos ámbar, en
N
IÓ
refrigeración hasta su evaluación.
AC
IC
UN
2.4. Determinación del efecto del extracto de V. corymbosum sobre E. coli y S.
M
aureus
CO
2.4.6 Reactivación del cultivos bacterianos
Y
A
A partir de las colonias conservadas en refrigeración de cada bacteria, se
IC
ÁT
hizo siembras en superficie en agar nutritivo y se incubaron a 37ºC por 18 h.
RM
FO
2.4.7 Preparación de inóculo bacteriano

IN
Se recogieron varias colonias a partir de la placa de cultivo incubada por 18

DE
h, con un asa bacteriológica y se preparó una suspensión bacteriana (Anexo

AS
2, Fig. 5b); equivalentes al tubo N° 0.5 de la escala de Mac Farland en

EM
solución salina fisiológica estéril, y se agitó manualmente por 30 segundos,

ST
SI
lo que constituyó el inóculo19.

DE
2.4.8 Siembra en placas

N
IO
Antes que transcurran 15 minutos de haber ajustado el inóculo, se introdujo

CC
un hisopo estéril dentro de la suspensión, retirándola y haciendo presión

RE
DI
sobre la pared del tubo por encima del nivel del líquido con la finalidad de
eliminar el exceso de inóculo. Seguidamente, se sembró en la superficie de
las placas con Agar Mueller-Hinton; esto se consiguió deslizando el hisopo
12
por la superficie del agar tres veces, rotando la placa unos 60º cada vez y
pasándola por último por la periferia del agar para conseguir una siembra
uniforme (Anexo 2, Fig. 5c). Luego se dejó secar de 3 a 5 minutos en estufa
a 37ºC19.
N
IÓ
AC
2.4.9 Preparación de excavaciones y colocación de discos
IC
UN
Se hicieron tres excavaciones de 6 mm de diámetro en el agar Mueller-
M
Hinton de las placas, con la ayuda de un sacabocado. Luego se agregó 50µL
CO
de cada concentración de extracto acuoso de Vaccinium corymbosum (100,
Y
A
75 y 50 %) con la ayuda de una micropipeta (Anexo 2, Fig. 5d), en cada
IC
ÁT
excavación, respectivamente. Así mismo, se colocó el disco de sensibilidad
RM
de gentamicina (Control) con la ayuda de una pinza estéril, sobre la

FO
superficie del agar, asegurándose que toda la superficie del disco tengan
IN
contacto con el medio, luego las placas se incubaron a 37°C por 18 a 24 h.

DE
AS
Todo este procedimiento se realizó para cada uno de los cultivos de

EM
Escherichia coli y Staphylococcus aureus por tres veces consecutivas.

ST
SI
2.4.10 Lectura de resultados

DE
Se midió el diámetro, en milímetros, de las zonas de completa inhibición

N
IO
(Anexo 3 y 4) del crecimiento para cada bacteria, con una regla

CC
milimetrada, tomando 4 medidas para cada halo de inhibición de cada

RE
concentración, y se obtuvo el diámetro promedio en cada ensayo.

DI
13
3. Análisis de resultados
Los datos obtenidos fueron sometidos al análisis estadístico de tipo ANOVA para
hallar la diferencia significativa entre las medias y la prueba de Tukey y Duncan
(Anexo 3 y 4) para comparar las diferentes concentraciones con el control con un nivel
N
IÓ
de significancia de 0.05% y con intervalos de confianza de 0 a 95% 20.
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
14
III. RESULTADOS
En la Fig.01, se presentan los diámetros promedios de halos de inhibición del
crecimiento de Escherichia coli frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del
N
IÓ
extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las 18 horas, utilizando el método
AC
de excavación y difusión en placa (Kirby Bauer), observándose que la mayor
IC
UN
inhibición lo presenta la concentración al 100% presentando un halo de inhibición de
M
11.90mm. También se observó que existe una diferencia significativa entre cada
CO
concentración y que a mayor concentración de V. corymbosum mayor fue la
Y
A
inhibición.
IC
ÁT
RM
crecimiento de Staphylococcus aureus frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del

FO
IN
extracto acuoso de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las 18 horas, utilizando el

DE
método de excavación y difusión en placa (Kirby Bauer), observándose que la mayor

AS
inhibición lo presenta la concentración al 100% presentando un halo de inhibición de

EM
14.29mm. También se observó que existe una diferencia significativa entre cada
ST
concentración y que a mayor concentración de V. corymbosum mayor será la

SI
DE
inhibición.
N
IO

CC
crecimiento de Escherichia coli y Staphylococcus aureus frente a concentraciones

RE
100%, 75% y 50% del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las 18 horas,
DI
utilizando el método de excavación y difusión en placa (Kirby Bauer), observándose
que la mayor inhibición en ambas bacterias en estudio, lo presenta la concentración al
100% presentando un halo de inhibición de 11.90mm y 14.29mm, respectivamente.
15
Escherichia coli
N
16.00
14.87
IÓ
Diámetro promedio de halos de inhibición(mm)
14.00
AC
11.90
IC
12.00
10.70
UN
10.00 9.11
M
CO
8.00
Y
6.00
A
IC
4.00
ÁT
2.00
RM
0.00
FO
100% 75% 50% Gentamicina

Concentración del extracto de Vacccinium corymbosum
IN
DE
AS
EM
Fig. 01. Diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de

ST
Escherichia coli frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del

SI
extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” y del antibiótico

DE
Control (Gentamicina).
N
IO
CC
RE
DI
16
N
IÓ
Staphylococcus aureus
AC
16
IC
14.29
Diámetro promedio de halos de inhibición (mm)
UN
14 13.35
12.34
M
12
CO
10.22
10
Y
A
8
IC
ÁT
6
RM
4
FO
2
IN
0
DE
100% 75% 50% Gentamicina

Concentración del extracto de Vaccinium corymbosum
AS
EM
ST
SI
Fig. 02. Diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de

DE
Staphylococcus aureus frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del

N
IO
extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” y del antibiótico

CC
Control (Gentamicina).
RE
DI
17
N
IÓ
16.00
AC
Diámetros promedio de halos de inhibición (mm)
14.29
14.00
IC
12.34
UN
11.90
12.00
10.70
M
10.22
10.00
CO
9.11
8.00
Y
Escherichia coli
A
6.00
IC
Staphylococcus aureus
ÁT
4.00
RM
2.00
FO
0.00
IN
100% 75% 50%

DE
Concentración del extracto de Vaccinium corymbosum

AS
EM
ST
SI
Fig. 03. Comparación de los diámetros promedios de los halos de inhibición del
DE
crecimiento de Escherichia coli y Staphylococcus aureus frente a

N
IO
concentraciones 100%, 75% y 50% del extracto de Vaccinium corymbosum

CC
“Arándano”
RE
DI
18
IV. DISCUSIÓN
De los resultados obtenidos se evidencia que el extracto de Vaccinium
corymbosum (EVC) tuvo un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Escherichia
N
IÓ
coli (Fig. 01) y Staphylococcus aureus (fig.02); dicho efecto, se debería a la
AC
presencia de algunos componentes antibacterianos. Una investigación realizada por
IC
Risco E. et al. (2010), afirma que la acción inhibitoria del extracto acuoso de
UN
M
Vaccinium corymbosum sobre diferentes bacterias se debe a las proantocianidinas,
CO
mayoritariamente del tipo A, las antocianinas, flavonoles, ácidos fenólicos, ácidos
Y
quínico, málico y cítrico, iridoides, ácido ursólico, frutosa y otros azúcares6.
A
IC
ÁT
En la Fig. 01 se presenta el promedio de los halos de inhibición de E. coli
RM
frente a las concentraciones del 100%, 75% y 50%, observándose que existe mayor
FO
efecto inhibitorio a una concentración de 100% y disminuye el halo de inhibición a

IN
DE
medida que disminuye la concentración del EVC. En el Anexo 9, se presentan los

AS
tres ensayos realizados a las concentraciones al 100%, 75% y 50% del EVC,
EM
observándose que el mayor halo de inhibición de E. coli fue de 12.13mm a la

ST
concentración de 100% y el menor halo de inhibición fue 9.03mm a la

SI
concentración de 50% a las 18horas de incubación. Estos valores son similares a los
DE
estudios realizados por Sahr C. (2004), quien utilizando el EVC y sus diluciones en
N
IO
discos contra E. coli, obtuvo halos de inhibición de 11.06 ± 0.48 mm (100%) 27.
CC
RE
El análisis estadístico de ANOVA de los promedios de los halos de inhibición

DI
del EVC contra E. coli determinó que existe diferencia significativa entre las
concentraciones evaluadas, y que la concentración al 100% es más eficiente en
relación a las concentraciones de 75% y 50% (Anexo 05). Posteriormente se realizó
19
una prueba post ANOVA para determinar la concentración de EVC que inhibe
mejor el crecimiento de E. coli para lo cual se realizó la prueba de Duncan,
obteniendo cuatro subgrupos(grupo control, 100%, 75% y 50%) observándose que
hay diferencia significativa entre ambos subgrupos (Anexo 06), además podemos
N
IÓ
afirmar que el EVC concentrado al 100% inhibe mejor el crecimiento de E. coli que
AC
IC
las concentraciones al 75% y 50%, así mismo es menos eficaz que el antibiótico
UN
Gentamicina (Control).
M
CO
En la Fig. 02 se presenta el promedio de los halos de inhibición de
Y
Staphylococcus aureus frente a las concentraciones del 100%, 75% y 50%,
A
IC
observándose que existe mayor efecto inhibitorio a una concentración de 100% y
ÁT
RM
disminuye el halo de inhibición a medida que disminuye la concentración del EVC.

FO
En el Anexo 10, se presentan los tres ensayos realizados a las concentraciones al

IN
100%, 75% y 50% del EVC, observándose que el mayor halo de inhibición de S.
DE
aureus es 14.53mm a la concentración de 100% y el menor halo de inhibición es de

AS
10.17mm a la concentración de 50% a las 18horas de incubación. Resultados muy

EM
similares a Sahr C. (2004)27 que obtuvo halos de inhibición de 14.58 ± 1.03 mm

ST
SI
cuando trabajó con el EVC 100%; mientras que, el estudio realizado por Rodríguez
DE
(2011) utilizando el EVC al 100% obtuvo halos de inhibición de 12.0 ± 0.6 mm26.
N
IO
El análisis estadístico de ANOVA de los promedios de los halos de inhibición

CC
del EVC contra S. aureus determinó que existe diferencia significativa entre las
RE
DI
concentraciones evaluadas, y que la concentración al 100% es más eficiente en
relación a las concentraciones de 75% y 50% (Anexo 07). Posteriormente se realizó
una prueba post ANOVA para determinar la concentración de EVC que inhibe
20
mejor el crecimiento de S. aureus para lo cual se realizó la prueba de Duncan,
obteniendo cuatro subgrupos(grupo Control, 100%, 75% y 50%) observándose que
hay diferencia significativa entre ambos subgrupos (Anexo 08), además podemos
afirmar que el EVC concentrado al 100% inhibe mejor el crecimiento de S. aureus
N
IÓ
que las concentraciones al 75% y 50%, así mismo es más eficaz que el antibiótico
AC
IC
Gentamicina (Control).
UN
M
El efecto inhibidor del EVC sobre el crecimiento bacteriano se debería a la
CO
acción relacionada con los diferentes principios activos presentes. Así en el estudio
Y
realizado por Risco E. et al. (2010), observó in vitro que las tres fracciones
A
IC
constituida por, azúcares y ácidos orgánicos, compuestos fenólicos, o por las
ÁT
RM
antocianinas, poseen acción antibacteriana frente a E. coli. La acción de los

FO
compuestos fenólicos y antocianinas se produce a través de una interacción

IN
específica que induce la desintegración localizada de la membrana exterior de la

DE
bacteria, y que podría estar relacionada con la quelación de iones metálicos y por la
AS
inducción de cambios en la expresión de diferentes genes, por ejemplo en los genes

EM
33 y 35; sin embargo, la actividad de la fracción de azúcares y ácidos orgánicos

ST
SI
parece estar relacionada con un efecto de shock osmótico 6.

DE
Cabe resaltar que la actividad antibacteriana del EVC puede no estar solo
N
IO
determinada por la anatomía de las bacterias sino por otros factores. Puupponen-
CC
Pimiä et al. (2005) demostraron que el pH puede ser un factor influyente en la

RE
DI
inhibición del crecimiento bacteriano dado que uno de los parámetros que
determinan el crecimiento de bacterias en los alimentos es precisamente su pH; y su
efecto varía según la especie de bacteria y los compuestos fenólicos presentes y,
21
dado que las frutas presentan un pH bajo (2.4-3.5), podría haber influenciado en la
actividad antibacteriana, inhibiendo así el crecimiento bacteriano 28.
En la Fig. 03 se presenta la comparación de los halos de inhibición del
N
IÓ
crecimiento de ambas bacterias promedio para cada concentración ensayada,
AC
observándose que todas las concentraciones (100%, 75% y 50% del EVC) tiene un
IC
mayor efecto inhibitorio sobre S. aureus y menor para E. coli, siendo la
UN
M
concentración al 100% la que tiene mayor efecto sobre ambas bacterias. Según esto
CO
podemos inferir que S. aureus es más sensible que E. coli a los efectos
Y
antibacterianos del EVC ya sea concentrado o diluido. La diferencia de sensibilidad
A
IC
de ambas bacterias es que son especies de distinto género; y que S. aureus es Gram
ÁT
RM
positiva, mientras que E. coli es Gram negativa; por tanto, presentan distintos
FO
mecanismos de resistencia a los componentes antimicrobianos del EVC. Esto se

IN
sustenta con la investigación realizada por Lizcano et al. (2008), quienes afirman
DE
que una bacteria Gram positiva es más sensible debido a que tiene una pared celular
AS
menos compleja, pues está compuesta solamente por una capa gruesa de
EM
peptidoglicano, en comparación con una bacteria Gram negativa que tiene una
ST
SI
pared más compleja ya que posee una membrana citoplasmática externa, una
DE
delgada capa de peptidoglicano, lipopolisacáridos y proteínas30.

N
IO
La diferencia de los resultados que se puede observar con otros trabajos

CC
realizados por algunos autores, se debería a que se usaron diferentes métodos de

RE
DI
extracción (decoccto, tintura, infusión, etc.) de los principios activos, así como de
los solventes utilizados, concentraciones y cantidades de extracto, esto influiría en
la cantidad de la sustancia activa presente y evaluada, al igual que su pureza y
22
grado de madurez del fruto y la especie29. Por tanto los resultados obtenidos
demuestran que V. corymbosum tiene efecto antibacteriano, es por ello que
podemos afirmar que tiene gran potencial para ser utilizado en la industria de
medicamentos, alimentos y otros rubros por su efecto antibacteriano de interés
N
IÓ
clínico, microbiológico y alimentario.
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
23
V. ENUNCIADO - RESUMEN
Las concentraciones utilizadas del extracto de V. corymbosum al 50%, 75% y 100%
N
tienen efecto inhibidor sobre el crecimiento de E. coli y S. aureus.
IÓ
AC
IC
Se determinó que el extracto de V. corymbosum al 50%, 75% y 100% tiene un
UN
mayor efecto inhibidor sobre el crecimiento de S. aureus que sobre E. coli.
M
CO
Existe diferencia significativa entre los diámetros promedios de los halos de
Y
A
inhibición del crecimiento de E. coli y S. aureus por efecto del extracto de V.
IC
ÁT
corymbosum en cada una de las concentraciones evaluadas.
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
24
VI. RECOMENDACIONES
- Investigar otras propiedades biológicas del extracto de Vaccinium corymbosum.
N
IÓ
- Investigar el efecto del extracto de Vaccinium corymbosum con otras
AC
IC
concentraciones diferentes al presente trabajo sobre Escherichia coli y
UN
Staphylococcus aureus.
M
CO
- Evaluar diferentes concentraciones del extracto de Vaccinium corymbosum sobre
Y
A
otras cepas bacterianas y/o fúngicas.
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
25
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Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
30
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
ANEXOS
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
31
Anexo 1. Obtención del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” y las diferentes
concentraciones a evaluar.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
(a) (b)
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
(c) (d)
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
(e)
32
Fig. 4: Frutos de Vaccinium corymbosum(Arándano) previamente lavados (a).
Trituración de los frutos de V. corymbosum y obtención del extracto (b). Filtrado del
extracto acuoso de V. corymbosum con papel filtro Whatman N°10 (c). Extracto final de
V. corymbosum (d). Concentraciones al 50%, 75% y 100% del extracto de V.
N
IÓ
corymbosum (e).
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
33
Anexo 2. Método de Kirby Bauer ejecutado en la investigación
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
(a) (b)
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
(c) (d)
ST
SI
Fig. 5: Placas con agar Muller-Hinton(a). Hisopos estériles sumergidos en la suspensión

DE
bacteriana (inóculo equivalente al tubo N° 0.5 del Nefelómetro de Mac Farland),

N
(b). Siembra en superficie de placas con agar Muller-Hinton(c). Incorporación

IO
CC
de 50µL de extracto de Vaccinium corymbosum a diferentes concentraciones en

RE
cada excavación practicada (d).

DI
34
Anexo 3. Halos formados por E. coli mediante el método de excavación y difusión en
placa de Kirby Bauer frente a las concentraciones evaluadas del extracto de V.
corymbosum “Arándano.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
(a) (b)
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
(c)
RE
DI
Fig. 6: Efecto del extracto de V. corymbosum “Arándano” a concentraciones de 100%,
75% y 50% sobre el crecimiento de E. coli, utilizando como Control positivo el disco de
Gentamicina.
35
Anexo 4. Halos formados por S. aureus mediante el método de excavación y difusión en
placa de Kirby Bauer frente a las concentraciones evaluadas del extracto de V.
corymbosum “Arándano.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
(a) (b)
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
(c)
DI
Fig. 7: Efecto del extracto de V. corymbosum “Arándano” a concentraciones de 100%,
75% y 50% sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus, utilizando como Control
positivo el disco de Gentamicina.
36
Anexo 5. Análisis de Varianza (ANOVA) de los promedios de los diámetros de los halos
de inhibición del crecimiento de Escherichia coli por efecto de las diferentes
concentraciones del EAVC.
N
IÓ
ANOVA Pruebas de los efectos inter-sujetos
AC
IC
Variable dependiente: Diámetros de halos de inhibición de Escherichia coli.
UN
Suma de gl Media F Sig.
M
CO
Origen cuadrados tipo cuadrática
III
Y
Modelo corregido 293,925a 17 17,290 20,837 ,000
A
IC
Intersección 8148,943 1 ÁT 8148,943 9820,954 ,000
concentración 266,800 3 88,933 107,181 ,000
RM
cultivo 27,125 14 1,938 2,335 ,017

Error 34,850 42 ,830
FO
Total 8477,717 60
IN
Total corregida 328,774 59

DE
a. R cuadrado = .894 (R cuadrado corregida = .851)

AS
EM
P <0.05 significativa
ST
SI
P <0.01 altamente significativa

DE
P >0.05 no significativa
N
IO
Interpretación:
CC
RE
Si existe diferencia significativa entre los promedios de las concentraciones de Vaccinium

DI
corymbosum para Escherichia coli.
37
Anexo 6. Prueba de Duncan(Post Hoc) para el análisis de la significancia de las
diferentes concentraciones del extracto de Vaccinium corymbosum frente al
crecimiento Escherichia coli.
N
IÓ
Prueba de Duncana
AC
Subconjunto
IC
Concentración N
UN
1 2 3 4
M
50% 15 9,1060
CO
75% 15 10,7280
Y
100% 15 11,9073
A
Control 15 14,8747
IC
ÁT
Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000
RM
Se muestran las medias de los grupos de subconjuntos homogéneos.

FO
a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 15.000

IN
DE
b. Alfa = 0.05.
AS
EM
Interpretación:
ST
Se puede observar tras la prueba de Duncan se forma 4 subconjuntos las cuales son
SI
significativamente diferentes entres las concentraciones para cada subconjunto, también

DE
podemos observar que la concentración que produce mayor inhibición fue la

N
IO
concentración 100%.
CC
RE
DI
38
Anexo 7. Análisis de Varianza (ANOVA) de los promedios de los diámetros de los halos
de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus por efecto de las
diferentes concentraciones del EVC.
N
IÓ
ANOVA Pruebas de los efectos inter-sujetos
AC
IC
Variable dependiente: Diámetros de halos de inhibición de Staphylococcus aureus
UN
Origen Suma de gl Media F Sig.
M
cuadrados tipo cuadrática
CO
III
Y
A
Modelo 9677,869a 18 537,659 2197,167 ,000
concentracion 136,772 3
IC 45,591 186,308 ,000
ÁT
cultivo 91,700 14 6,550 26,767 ,000
RM
Error 10,278 42 ,245

FO
Total 9688,146 60
IN
a. R cuadrado = .999 (R cuadrado corregida = .998)

DE
AS
P <0.005 significativa
EM
P <0.001 altamente significativa

ST
SI
P >0.005 no significativa
DE
N
IO
Interpretación:
CC
Si existe diferencia significativa entre las medias entre los promedios de las
RE
concentraciones de Vaccinium corymbosum para Staphylococcus aureus.

DI
39
Anexo 8. Prueba de Duncan(Post Hoc) para el análisis de la significancia de las
diferentes concentraciones del extracto de Vaccinium corymbosum frente al
crecimiento Staphylococcus aureus.
N
IÓ
Prueba de Duncana
AC
Subconjunto
IC
Concentración N
1 2 3 4
UN
50% 15 10,2227
M
CO
75% 15 12,3407
Control 15 13,3453
Y
100% 15 14,2893
A
IC
Sig. 1,000 ÁT 1,000 1,000 1,000
RM
Se muestran las medias de los grupos de subconjuntos homogéneos.

FO
IN
a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 15.000

DE
b. Alfa = 0.05.
AS
EM
Interpretación:
ST
SI
Se puede observar tras la prueba de Duncan se forma 4 subconjuntos las cuales son
DE
significativamente diferentes entres las concentraciones para cada subconjunto, también

N
podemos observar que la concentración que produce mayor inhibición fue la

IO
CC
concentración 100% además es más eficaz que el antibiótico usado como control.
RE
DI
40
Anexo 9. Promedios de los diámetros de inhibición de Escherichia coli a diferentes
concentraciones de extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” realizados
en tres ensayos.
N
IÓ
AC
Diámetro (mm) de inhibición del crecimiento de Escherichia coli
IC
UN
Concentraciones del extracto de Vaccinium Gentamicina
corymbosum
M
CO
Ensayo 100% 75% 50% Control
1 11,85 10,44 9,03 15,16
Y
A
2 12,13 10,39 9,12 14,67
IC
ÁT
3 11,87 10,47 9,16 14,79
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
41
Anexo 10. Promedios de los diámetros de inhibición de Staphylococcus aureus a
diferentes concentraciones de extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano”
realizados en tres ensayos.
N
IÓ
AC
Diámetro (mm) de inhibición del crecimiento de Staphylococcus aureus
IC
UN
corymbosum
M
Ensayo 100% 75% 50% Control
CO
1 14,30 12,20 10,17 13,28
Y
2 14,53 12,60 10,67 13,20
A
IC
3 14,33 12,28 ÁT 10,39 13,25
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
42
Anexo 11. Promedios de los diámetros de inhibición de Staphylococcus aureus y
Escherichia coli a diferentes concentraciones de extracto de Vaccinium
corymbosum “Arándano”.
N
IÓ
AC
Diámetro (mm) de inhibición del crecimiento de S. aureus y E. coli
IC
UN
corymbosum
Bacteria
M
100% 75% 50% Control
CO
E. coli 11,90 10,70 9,11 14,87
Y
S. aureus 14,29 12,34 10,22 13,35
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
43
Anexo 12. Composición química del agar nutritivo y su preparación.
Agar Nutritivo
Formula (en gramos por litro)
N
IÓ
Peptona de caseína 3.15
AC
IC
Cloruro de Sodio 5.10
UN
Agar – Agar 13.00
M
CO
Y
pH final 7,5±0,1 a 25ºC
A
IC
ÁT
Preparación:
RM
Disolver 25g en un litro de agua destilada. Llevar a ebullición hasta disolver

FO
completamente. Esterilizar a 121ºC a 1 atmosfera durante 15 minutos. Verter en

IN
DE
placas estériles.
AS
EM
Fundamento:
ST
Medio sólido para el cultivo y enriquecimiento de bacterias poco exigentes, para

SI
mantenimiento de cultivos en el tiempo y como base para la preparación de

DE
medios de cultivos especiales. La peptona actúa como fuente de nitrógeno para el

N
IO
crecimiento celular y la glucosa como fuente energética para el crecimiento

CC
celular29.
RE
DI
44
Anexo 13. Composición química del agar Muller- Hinton y su preparación
Muller- Hinton
N
IÓ
AC
Infusión de carne 5.0
IC
Caseína hidrolizada 17.5
UN
Almidón 1.5
M
CO
Agar – Agar 12.5
Y
A
IC
ÁT
RM

FO
IN
Preparación:
DE
Disolver 36,5g en un litro de agua destilada. Llevar a ebullición hasta disolver

AS
completamente. Esterilizar a 121ºC a 1 atmosfera durante 15 minutos. Verter en

EM
placas estériles.
ST
SI
DE
Fundamento:
N
El Agar Muller-Hinton se utiliza para la realización del ensayo de en placa. La

IO
CC
composición de este medio garantiza las condiciones favorables del crecimiento

RE
así como la ausencia de antagonistas29.

DI
45
Anexo 14. Composición química del agar Baird Parker y su preparación
Agar Baird Parker
N
IÓ
AC
Peptona de caseína 10.0
IC
Extracto de carne 5.0
UN
Extracto de levadura 1,0
M
CO
Piruvato de sodio 10,0
Y
Glicina 12.0
A
IC
Cloruro de litio ÁT 5.0
Agar-Agar 15.0
RM
FO
IN

DE
AS
Preparación:
EM
Disolver 36,5g en un litro de agua destilada. Llevar a ebullición hasta disolver

ST
completamente. Esterilizar a 121ºC a 1 atmosfera durante 15 minutos, enfriar a

SI
DE
50-45°C añadir mezclando, 50ml/litro de emulsión yema de huevo-telurito. Verter

N
en placas estériles y estriar en superficie.

IO
CC
RE
Fundamento:
DI
Este medio contiene cloruro de litio y telurito para la inhibición de la flora
acompañante, en tanto que el piruvato y la glicocola actúan favoreciendo el
crecimiento de estafilococos.
46
Sobre el medio de cultivo opaco por su contenido en yema de huevo, las colonias
de estafilococos muestran halos de lipólisis y proteólisis, y debido a la reducción
del telurito a teluro presentan paralelismo con la coagulasa- positiva, pudiéndose
utilizarse como índice de ésta última29.
N
IÓ
AC
IC
UN
M
CO
Y
A
IC
ÁT
RM
FO
IN
DE
AS
EM
ST
SI
DE
N
IO
CC
RE
DI
47

Angel Gutierrez, Jorge Sebastian

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Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

sobre el crecimiento de Escherichia coli y

Staphylococcus aureus en condiciones de

PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL

BIÓLOGO Angel Gutierrez

Asesor : Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE

Dr.Weyder Portocarrero Cárdenas

Dr. Esteban Ilich Zerpa

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS

Dr. William Zelada Estraver

Dra. Bertha Soriano Bernilla

DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

MIEMBROS DEL JURADO

concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

Ms. C. Aníbal Quintana Díaz

dedicación, así como las sugerencias constructivas durante el desarrollo de la presente

Por ser el motivo de mi existencia, por sus consejos, comprensión, amor,

valores, y apoyo incondicional en todo momento, por inculcar en mí el sabio don de

la responsabilidad ¡Gracias por estar siempre conmigo! A pesar de la distancia.

A quien admiro porque es un ejemplo de esfuerzo y sacrificio, a no darse por

gracias por tus consejos.

Señores Miembros del Jurado:

“Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el crecimiento Escherichia coli

Trujillo, Junio del 2015

Br. Jorge Sebastián Angel Gutierrez

CERTIFICACIÓN DEL ASESOR

El que suscribe, docente asesor de la tesis titulada:

acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.

del reglamento correspondiente.

Trujillo, Junio del 2015

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

Informe de Tesis titulado: “Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el

Dr. Luis Alberto Llenque Díaz

Ms. C. Aníbal Quintana Díaz

Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo………………………….……….ii

Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas……………………….…………. iii

Certificación del Asesor…………………………………...…….………….………..viii

2.1 Recolección y tratamiento de los frutos de V. corymbosum………………...11

2.2 Obtención del extracto de V. corymbosum …………………………………11

2.3 Preparación de las concentraciones de V. corymbosum………………….….12

2.4 Determinación del efecto del extracto de V. corymbosum …………………12

2.4.1 Reactivación del cultivo bacteriano……………………………………...12

2.4.2 Preparación de inóculo bacteriano……………………………………….12

2.4.3 Siembra en placas………………………………………………………..12

2.4.4 Preparación de excavaciones y colocación de los discos………………..13

2.4.5 Lectura de resultados…………………………………………………….13

El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del

Control, discos de sensibilidad de Gentamicina. La lectura se hizo a las 18 horas

de incubación a 37°C en estufa. Se midieron los diámetros de inhibición (mm) de

cada una de las concentraciones para E. coli y S. aureus, obteniéndose un

promedio de los halos de inhibición. Para el análisis de datos se empleó la prueba

significativa entre las concentraciones que inhiben mejor el crecimiento de E. coli

y S. aureus. Los resultados demostraron que hay mayor inhibición a mayor

concentración del extracto de Vaccinium corymbosum, siendo la que produce

mayor inhibición la concentración al 100% y mejor efecto inhibitorio sobre el

crecimiento de S. aureus que E. coli.