1

Toxicología y Salud Ambiental

Ms. C. María Teresa Valderrama Rojas

Laboratorio N° 4 Condiciones en la crianza y mantenimiento de animales de experimentación

CONDICIONES EN LA CRIANZA Y MANTENIMIENTO DE

ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
INTRODUCCIÓN

El uso de animales en experimentación ha ido en paralelo al desarrollo de la biomedicina.

El inicio para el uso de animales en las investigaciones biomédicas es conocer los detalles
biológicos (anatomía, fisiología y etología) y de mantenimiento (alojamiento,
alimentación y manejo) de la especie, que corresponden a su microambiente y
macroambiente. Detalles sobre la biología de los animales más utilizados en
experimentación están descritos ampliamente en la literatura científica.

INFRAESTRUCTURA PARA LA EXPERIMENTACIÓN CON ANIMALES

El lugar donde se alojan los animales de experimentación se denomina bioterio,

animalario o estabulario, y se define como la instalación dedicada a la crianza,
mantenimiento, cuidado y uso de los animales de laboratorio.
El bioterio no solo debe cubrir las necesidades de los animales, sino también del
personal que trabaja en él. Para ello, su infraestructura incluye diferentes áreas que se
engloban en dos zonas: zona sucia (área administrativa, vestuario, almacenaje,
eliminación de desechos e incineración) y zona limpia (área de recepción de animales,
cuarentena, salas de alojamiento y crianza, laboratorios, quirófano y áreas de limpieza
y esterilización). Para evitar posibles contaminaciones, las zonas han de estar
totalmente separadas por barreras físicas, y el flujo de trabajo se establece desde la zona
limpia a la sucia. Además, en todas las áreas se tienen que seguir estrictas condiciones
de higiene, limpieza, desinfección y estar perfectamente señalizadas. Los protocolos de
trabajo en el bioterio tienen que estar estandarizados, regulados según las normas éticas
y legales, y supervisados.
Es necesario que tanto el bioterio como su personal proporcionen al animal un perfecto
estado de salud física y mental en sincronía con el ambiente, libre de hambre, sed y
malnutrición; libre de miedo, ansiedad y angustia; libre de incomodidad física, frío, y calor;
libre de dolor, lesión y enfermedad y libre para expresar su comportamiento natural. Para
garantizar estas cinco libertades, es imprescindible controlar una serie de parámetros, tanto
del microambiente como del macroambiente. En cuanto al microambiente, se tendrán en
cuenta las dimensiones de la jaula y la carga animal por jaula. Además, es importante
proporcionar una dieta enriquecida y balanceada según el tipo de animal, agua fresca y
libre de microorganismos y un encamado de calidad. Estos últimos elementos se deben
cambiar con regularidad. Las jaulas y los biberones han de ser limpiados y desinfectados
periódicamente. Es aconsejable, además, proporcionar un enriquecimiento en las jaulas
con diferentes accesorios según la especie. Se ha demostrado que un ambiente enriquecido
disminuye el estrés y el miedo, facilita el manejo de los animales y favorece una rápida
aclimatación
 2
Toxicología y Salud Ambiental
Ms. C. María Teresa Valderrama Rojas

LA SALUD DE LOS ANIMALES DEBE SER EVALUADA DE FORMA PERIÓDICA

El personal capacitado ha de evaluar el estado de salud de los animales de forma

rutinaria, no solo por obligación legal y moral, sino también para garantizar resultados
fiables y repetibles. Es necesario que esta evaluación sea más amplia y frecuente en
procedimientos invasivos, quirúrgicos y a la llegada del animal al bioterio.
Recomendaciones para el alojamiento de los principales roedores utilizados en
experimentación animal según la Federación de Asociaciones Europeas para la
Ciencia en Animales de Laboratorio y la Convenio Europeo para la protección de
animales vertebrados usados para la experimentación y otros fines científicos

Menos de 20 g de peso, 60 cm2 por Menos de 200 g de peso, 200 cm2 por
Dimensiones de jaulas animal animal
(se puede incrementar durante
20-25 g de peso, 70 cm2 por animal 200-400 g de peso, 300 cm2 por animal
la cría)
25-30 g de peso, 80 cm2 por animal 400-600 g de peso, 450 cm2 por animal
Más de 30 g de peso, 100 cm2 por animal Más de 600 g, 600 cm2 por animal
Número de animales por jaula 4-6 2-4
Cantidad alimento por día 3-6 g 10-20 g
Ingesta de agua por día 3-7 mL 15-30 mL
Temperatura 20 ºC a 24 ºC 20 ºC a 24 ºC
Humedad 45-65% 45-65%
Ruido < 20 kHz < 20 kHz
Ciclos de luz/oscuridad 12 horas de luz / 12 horas de oscuridad 12 horas de luz / 12 horas de oscuridad
Ambiente controlado y purificado de 15 Ambiente controlado y purificado de 15
Ventilación a 18 recambios aire / hora. Animales en a 18 recambios aire / hora. Animales en
jaulas ventiladas. Controlar niveles de jaulas ventiladas. Controlar niveles de
CO2 CO2
Olores Controlar el nivel de amoníaco Controlar el nivel de amoníaco
Camaje Pino blanco, sin olores y libre de Pino blanco, sin olores y libre de
patógenos patógenos
Enriquecimiento de las jaulas Papel, cajas de cartón, bastidores para Tubos, bastidores para escalar, cajas de
escalar cartón
Estas recomendaciones pueden variar en función de la especie, la edad y el sexo del
animal. Con ellas se garantizan las principales necesidades del animal, tales como la
expresión de las posturas típicas, descanso, exploración, emparejamiento, construcción
del nido, reproducción,
Durante el mantenimiento de los animales, tiene especial interés la evaluación
microbiológica y parasitológica. Los animales deben mantenerse libres de patógenos
específicos (SPF) y de gérmenes (GF). Dentro de los patógenos con mayor riesgo para
el bienestar animal se encuentra el virus Hanta y el virus de la coriomeningitis
linfocítica. A esta lista se suman bacterias como Helicobacter spp., Salmonella spp.,
Mycobacterium tuberculosis, Campylobacter spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio spp.,
Mycoplasma spp., Leptospira spp., Listeria spp. y Streptobacillus moniliformis, algunos
hongos, como especies de los géneros Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton que
causan dermatofitosis y varios parásitos como Leishmania, Tripanosoma, Toxoplasma,
Fasciola y tremátodos del género Schistosoma.
 3
Toxicología y Salud Ambiental
Ms. C. María Teresa Valderrama Rojas

Es necesario evitar las enfermedades que se trasmiten tanto de los animales vertebrados al
hombre como las que se trasmiten del hombre a estos animales, lo cual se logra manteniendo
el buen estado de salud y trabajando en zonas de bioseguridad con las precauciones
requeridas.

Las alergias y reacciones respiratorias son comunes en el personal que trabaja con animales
de laboratorio. Entre los alérgenos más frecuentes se han descrito proteínas de la orina, de la
saliva y de la sangre, así como el pelo y la cama de los animales. Se recomienda un examen
médico antes de comenzar a trabajar con animales de experimentación, así como exámenes
periódicos. El uso de jaulas ventiladas, el trabajo en cabinas de flujo laminar, el empleo de
barreras biológicas y un buen sistema de circulación de aire reducen considerablemente la
aparición de alergias. En la literatura científica se pueden consultar diferentes guías para la
prevención de enfermedades ocupacionales relacionadas con el trabajo de animales de
laboratorio

EL USO DE MODELOS ANIMALES Y UN CORRECTO DISEÑO EXPERIMENTAL

REDUCEN EL NÚMERO DE ANIMALES EN UN EXPERIMENTO

A pesar del alto costo y la dificultad que representa el desarrollo de un modelo animal, su
uso nos permite estudiar la fisiopatología de una enfermedad inducida o espontánea, y el
comportamiento animal. Dadas las posibles variaciones en las respuestas fisiológicas, es
necesario tener un amplio conocimiento de la fisiología y anatomía comparada del modelo
a emplear. Además, es aconsejable constatar la validez del modelo para el estudio. El ratón
es el animal de laboratorio mejor caracterizado genéticamente. Si a ello sumamos su
pequeño tamaño, fácil manejo, corto período gestacional, camadas grandes y rápida
madurez sexual, todo ello lo convierte en una especie óptima para la creación de modelos.
El desarrollo y aplicación de nuevos modelos animales para el estudio de la biología
estructural y funcional está en constante crecimiento. En general, estos modelos tienen
el propósito de comprender mecanismos biológicos (exploratorios), determinar una
función biológica anormal (mecanísticos) o valorar y cuantificar el efecto de un
tratamiento específico (predictivos). Estos pueden ser homólogos si los procesos que
ocurren en el modelo son idénticos a los que ocurren en el humano; isomórficos si son
semejantes, y parciales si se pueden emplear para el estudio de ciertos aspectos del
proceso patológico o del tratamiento.
Los modelos animales son clasificados en modelos inducidos (experimentales),
generados por modificación genética (transgénicos), espontáneos (genéticos), negativos
y huérfanos. Los tres primeros son los más frecuentes; sin embargo, hasta la fecha solo
unos pocos modelos inducidos reproducen fielmente la etiología y fisiopatología de una
enfermedad. Estos pueden lograrse experimentalmente por manipulación genética o
quirúrgica, administración de dietas modificadas o de sustancias biológicamente activas
y cambios de factores sociales o del entorno animal.
Un correcto DE no solo reduce el número de animales planteado en el principio de las
3Rs, sino que también garantiza el refinamiento de los procedimientos y la obtención de
 4
Toxicología y Salud Ambiental
Ms. C. María Teresa Valderrama Rojas

resultados fiables y repetibles. Son muchos los parámetros a fijar dentro de un DE, todos
con impacto directo en el resultado experimental. En el DE es notable prestar especial
atención al recurso humano y financiero. Una importante decisión es escoger la especie,
sexo, edad y cepa por utilizar y los procedimientos experimentales se han de realizar de
lo simple a lo complejo. Se tiene que estandarizar el inóculo, dosis, vía y frecuencia de la
inoculación, definir el punto final de experimentación, analgesia y punto final
experimental humanitario. Otro aspecto importante es determinar el tamaño de la
muestra, basándose en procedimientos estadísticos sin superar el mínimo necesario para
asegurar la fiabilidad de los resultados. Numerosa literatura científica describe los
métodos estadísticos y ejemplos prácticos para calcular el número de animales en función
de la investigación.
Las pruebas piloto cumplen un papel importante en el DE, ya que ayudan a definir y
desarrollar la investigación. Es imprescindible revisar todos los resultados obtenidos
durante la experimentación con el fin de validar o rectificar los procedimientos
establecidos.
Para evitar errores sistemáticos o sesgos, los animales deben ser tratados de igual
forma antes y durante el experimento, y el estudio se tiene que realizar de forma
aleatoria y a ciegas; además, se han de incluir los correspondientes controles.

EXISTEN ALTERNATIVAS A LA EXPERIMENTACIÓN CON ANIMALES DE

LABORATORIO
Entre las alternativas a la experimentación con animales de mayor percepción al dolor
está el uso de procariontes, protistas, hongos, invertebrados y vertebrados inferiores.
La alternativa más usada a la fecha son los cultivos celulares, los protocolos, para los
cultivos de células estables como para los cultivos primarios, están bien estandarizados
y descritos en la literatura científica. Sin embargo, hay que tener en cuenta que una
considerable cantidad de animales son sacrificados para obtener algunos de los
suplementos necesarios para lograr el crecimiento celular, como el suero fetal bovino o
equino.
Recientemente se ha reconstruido epidermis humana con características similares al
tejido humano a partir de queratinocitos humanos cultivados en una matriz de
colágeno. Esta epidermis es semejante en morfología, composición lipídica y
marcadores bioquímicos. Actualmente, estos modelos son comercializados y, aunque
su función de barrera comparada con la piel nativa está menos desarrollada, pueden
ser una herramienta útil para ensayos de irritación, fototoxicidad y absorción
percutánea, entre otras.
Asimismo, se han utilizado organismos invertebrados tales como la Amphimedon
queenslandica, Aplysia sp., Hydra, Drosophila melanogaster y Caenorhabditis elegans como
modelos alternativos. En un principio Drosophila melanogaster fue utilizado como modelo
genético, sin embargo, en la actualidad se ha descrito como modelo para estudio del
envejecimiento o enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Parkinson
y la enfermedad de Alzheimer. Más del 70% de los genes humanos relacionados con
 5
Toxicología y Salud Ambiental
Ms. C. María Teresa Valderrama Rojas

enfermedades tiene su homólogo en el genoma de este insecto. Homophila y FlyBase son

bases de datos que se han convertido en importantes herramientas a la hora de vincular
genes de enfermedades genéticas humanas y la secuencia genómica de Drosophila
melanogaster .

El nemátodo Caenorhabditis elegans ha sido otra alternativa ampliamente utilizada, su

transparencia a lo largo de su corta vida, biología, mantenimiento en el laboratorio y
facilidad de realizar el silenciamiento génico lo convierte en un candidato para estudios
de diabetes, envejecimiento, cáncer, obesidad y enfermedades neurodegenerativas.
Además, algunos hongos de los géneros Neurospora crassa, Schizosaccharomyces pombe,
Aspergillus nidulans, Saccharomyces cerevisiae y Cunnunghamella elegans pueden utilizarse
como modelos alternativos Cunnunghamella elegans ha sido utilizado para el estudio
del metabolismo de drogas, tales como antidepresivos tricíclicos, relajantes musculares,
antipsicóticos, antihistamínicos y anticolinérgicos. También son varias las ventajas que
hacen de Saccharomyces cerevisiae uno de los microorganismos eucariotas más versátiles
en los estudios en biomedicina.
En los últimos años el pez cebra (Danio rerio) se ha convertido en un excelente modelo
alternativo a la experimentación con animales vertebrados de mayor percepción al dolor. Este
ha sido utilizado en el estudio de enfermedades tan diversas como las neurodegenerativas
las causadas por hongos y bacterias y las oncológicas. El hecho de compartir más del
80% del genoma con los humanos, su capacidad reproductiva y el rápido desarrollo son
algunas de las ventajas que hacen atractivo este modelo en investigación. A pesar de ser
animales resistentes, estos son susceptibles a parásitos intracelulares como
microsporidios de Pseudoloma neurophilia, Oodinium y algunas especies de
Mycobacterium . Finalmente, el uso de la bioinformática, no solo por sus resultados, sino
también por la alta velocidad de procesamiento y costos, ha revolucionado la
experimentación animal. Actualmente, a través de programas informáticos es posible
diseñar nuevos medicamentos, simular posibles efectos biológicos y tóxicos e incluso
predecir el sitio de unión de un fármaco a su receptor. Entre las herramientas más
utilizadas se encuentran el diseño de drogas asistido por ordenador (Computer Aided Drug
Design, CADD) , la predicción de la actividad biológica basada en la estructura química
(Structure Activity Relationship, SARs) y las propiedades fisicoquímicas del fármaco
(Quantitative Structure Activity Relationship, QSAR).

Referencias Bibliográficas
✓ Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica. El 1, 2, 3 de la
experimentación con animales de laboratorio
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-
46342016000200015
✓ El lugar donde viven los animales de laboratorio
https://www.youtube.com/watch?v=qgieECdOC0g
✓ La ingeniería en el acondicionamiento del bioterio
 6
Toxicología y Salud Ambiental
Ms. C. María Teresa Valderrama Rojas

https://www.youtube.com/watch?v=iJEflcqisr0
✓ Manejo de animales de laboratorio:
https://www.youtube.com/watch?v=ApcwVRzbydQ