FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA IN VITRO DEL EXTRACTO

HIDROALCOHÓLICO DE LAS HOJAS DE Senecio
canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila) FRENTE A
CEPAS DE Staphylococcus aureus y Escherichia coli

TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE QUÍMICO

FARMACÉUTICO

AUTORES:

Bach. SÁNCHEZ SÁNCHEZ, EDWIN JONATHAN

https://orcid.org/0000-0001-6720-9042

Bach. SAAVEDRA QUIROGA, WALTER ALEXANDER

https://orcid.org/0000-0002-1751-3625

ASESOR:

Dr. VÍLCHEZ CÁCEDA, HÉCTOR ALEXANDER

https://orcid.org/0000-0001-7094-0821
LIMA – PERÚ

2022
i
DEDICATORIA

A Dios, por darme la fortaleza de seguir adelante a pesar de las adversidades que
se presentaron durante todo el camino.

A mis padres Nita y Edwin quienes con su amor, paciencia y sacrificio me

apoyaron desde el inicio de esta carrera, gracias mamita por creer en mí siempre
y gracias papito por tu esfuerzo, para ti un abrazo hasta el cielo.

A mi amada esposa Jenny y a mi hija Nijeth, gracias por estar siempre a mi lado,
son mi fortaleza y mi valentía.

A mi hermana Brigit y a todos mis familiares por el apoyo, quienes sin esperar
nada a cambio compartieron alegrías y tristezas conmigo.

Edwin Jonathan Sánchez Sánchez

A Dios, porque ha guiado con su amor el camino a terminar mi carrera

universitaria.

A mi madre, a pesar que ya no está a mi lado fue la precursora principal de este

proyecto de mi vida.

A mi papá, hermanos y a las personas que más quiero por brindarme su apoyo
incondicional sin esperar nada a cambio. Gracias a ellos he aprendido a ser
positivo y perseverante en todo lo que me proponga. Debido a ello estoy en la
mejor etapa académica de mi vida.

Walter Alexander Saavedra Quiroga

ii
 AGRADECIMIENTO

A todos los profesores de la Universidad Alas Peruanas por ser parte de nuestra
formación profesional y en especial a la profesora Vania, Mallqui Brito por su
apoyo incondicional desde el inicio de nuestra formación académica.

A la Universidad María Auxiliadora que nos acogió y nos dio la oportunidad de

obtener el título profesional.

Al Dr. Héctor Alexander, Vílchez Cáceda por su denodado esfuerzo y dedicación

durante el desarrollo de este trabajo de investigación.

iii
 Índice General

Páginas
Resumen viii
Abstract ix
I. INTRODUCCIÓN 1

II. MATERIALES Y MÉTODOS 9

2.1 Enfoque y diseño de la investigación 9

2.2 Población, muestra y muestreo 9
2.3 Variables de investigación 10
2.4 Técnicas e instrumentos de recolección de datos 11
2.5 Proceso de recolección de datos 11
2.6 Métodos de análisis estadístico 14
2.7 Aspectos éticos 14
III. RESULTADOS 15

IV. DISCUSIÓN 27

4.1 Discusión de resultados 27

4.2 Conclusiones 29
4.3 Recomendaciones 30
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 31
ANEXOS 37

iv
 Índice de Tablas

Tabla 1. Solubilidades del extracto hidroalcohólico desecado

15
Tabla 2. Marcha fitoquímica del extracto hidroalcohólico desecado de
(wila wila) 16

Tabla 3. Resultado del análisis in vitro por el método Kirby Bauer

17
Tabla 4. Análisis de varianza para Staphylococcus aureus ATCC 25923 18
Tabla 5. Prueba de HSD Tukey para Staphylococcus aureus ATCC
19
25923
Tabla 6. Análisis de varianza para Escherichia coli ATCC 25922 22

Tabla 7. Prueba de HSD Tukey para Escherichia coli ATCC 25922 23

Tabla 8. Escala de sensibilidad de Duraffourd de los extractos
hidroalcohólicos frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 y 25
Escherichia coli ATCC 25922
Tabla 9. Porcentaje de la actividad inhibitoria de los extractos
hidroalcohólicos frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 y 26
Escherichia coli ATCC 25922

v
 Índice de Figuras

Figura 1. Especie vegetal 4

Figura 2. Lugar de recolección: Localidad de Lima provincia de Yauyos,
distrito de Laraos entre los 3500 y 4000 m.s.n.m. 50
Figura 3. Recolección de la especie vegetal :Senecio canescens Humb.
& Bonpl. Cuatrec. (wila wila) 50
Figura 4. Peso de la muestra recolectada 51
Figura 5. Limpieza y selección de la muestra (hojas) 51
Figura 6. Preparación del extracto hidroalcohólico de las hojas Senecio
52
canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)
Figura 7. Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas
53
Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)
Figura 8. Marcha fitoquímica del extracto hidroalcohólico de las hojas
55
Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)
Figura 9. Activación de las cepas de Staphylococcus aureus ATCC
55
25923 y Escherichia coli ATCC 25922
Figura 10. Preparación de las diluciones al 100, 80, 60 y 40 % del
extracto hidroalcohólico de las hojas Senecio canescens Humb. & Bonpl. 56
Cuatrec. (wila wila)
Figura 11. Control positivo (ciprofloxacino 5 µg) frente a cepas
56
Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC 25922
Figura 12. Control negativo (dimetilsulfóxido) frente a cepas
57
Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC 25922
Figura 13. Actividad antibacteriana del extracto hidroalcohólico al 100,
57
80, 60, y 40 % frente a cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923
Figura 14. Actividad antibacteriana del extracto hidroalcohólico al 100,
58
80, 60, y 40 % frente a cepas de Escherichia coli ATCC 25922

vi
 Índice de Anexos

Anexo A. Operacionalización de la variable 38

Anexo B. Instrumento de recolección de datos 39
Anexo C. Certificado de clasificación taxonómica 42
Anexo D. Informe del análisis fitoquímico 43
Anexo E. Informe de medición de pH 44
Anexo F. Certificado de calidad de Staphylococcus aureus ATCC 25923 45
Anexo G. Certificado de calidad de Escherichia coli ATCC 25922 46
Anexo H. Constancia de evaluación de la actividad antibacteriana del
extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & 47
Bonpl. Cuatrec. (wila wila)
Anexo I. Evidencias del trabajo de campo 50

vii
 RESUMEN

Objetivo: Determinar la actividad antibacteriana in vitro del extracto

hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila
wila) frente a cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia coli
ATCC 25922.

Métodos: Se elaboró el extracto hidroalcohólico de Senecio canescens Humb. &

Bonpl. Cuatrec. (wila wila) por el método de maceración con un total de 1000 g de
hojas trituradas. Estas fueron recolectadas en la localidad de Lima, provincia de
Yauyos distrito de Laraos, de la cual se obtuvo un total de 13,19 kg del recurso
vegetal con un muestreo aleatorizado de la zona. Se realizaron los análisis de
tamizaje fitoquímico y de solubilidad. Seguidamente, se determinó la actividad
antibacteriana in vitro mediante la técnica de kirby Bauer a concentraciones de
100, 80, 60 y 40 % del extracto hidroalcohólico frente a cepas de Staphylococcus
aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC 25922 utilizando como control
positivo al antibiótico ciprofloxacino de 5 µg.

Resultado: El extracto hidroalcohólico a las concentración de 100, 80, 60 y 40 %

presentaron halo de inhibición promedio de 12,16, 9,23, 8,3 y 7,36 mm
respectivamente frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 las cuales fueron
comparadas con ciprofloxacino de 5 µg logrando un promedio de halo de
inhibición de 38 mm; sin embargo, a la concentración del 100 % se determinó
halo de inhibición promedio de 7,2 mm frente a Escherichia coli ATCC 25922
comparado con el control positivo que alcanzó un promedio de halo de inhibición
de 50 mm.

Conclusiones: El extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens

Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila) presentó actividad antibacteriana in vitro a
concentraciones de 100, 80, 60 y 40 % frente a Staphylococcus aureus ATCC
25923 y muy poca actividad antibacteriana in vitro a una concentración de 100 %
frente a Escherichia coli ATCC 25922.

Palabras clave: Senecio Canescens, actividad antibacteriana, extracto

hidroalcohólico, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, halo de inhibición.

viii
 ABSTRACT
Objective: To determine the in vitro antibacterial activity of the hydroalcoholic
extract of the leaves of Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)
against strains of Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC
25922.

Methods: The hydroalcoholic extract of Senecio canescens Humb. & Bonpl.

Cuatrec. (wila wila) by the maceration method with a total of 1000 g of crushed
leaves. These were collected in the town of Lima, province of Yauyos, district of
Laraos, from which a total of 13,19 kg of the plant resource was obtained with a
random sampling of the area. Phytochemical screening and solubility analyzes
were performed. Next, the in vitro antibacterial activity was determined using the
Kirby Bauer technique at concentrations of 100, 80, 60 and 40 % of the
hydroalcoholic extract against strains of Staphylococcus aureus ATCC 25923 and
Escherichia coli ATCC 25922 using the antibiotic ciprofloxacin as a positive control
5 µg.

Results: The hydroalcoholic extract at concentrations of 100, 80, 60 and 40 %

presented an average inhibition halo of 12,16, 9,23, 8,3 and 7,36 mm respectively
against Staphylococcus aureus ATCC 25923 which were compared with
ciprofloxacin of 5 µg achieving an average halo 38 mm inhibition; However, at the
100 % concentration, an average inhibition halo of 7,2 mm was determined
against Escherichia coli ATCC 25922 compared to the positive control, which
reached an average inhibition halo of 50 mm.

Conclusions: The hydroalcoholic extract of the leaves of Senecio canescens

Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila) showed antibacterial activity in vitro at
concentrations of 100, 80, 60 and 40 % against Staphylococcus aureus ATCC
25923 and very little antibacterial activity in vitro at a concentration of 100 %
against Escherichia coli ATCC 25922.

Keywords: Senecio Canescens, antibacterial activity, hydroalcoholic extract,

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, inhibition halo.

ix
 I. INTRODUCCIÓN
En la actualidad la población peruana sufre una fuerte crisis en el sistema de
salud, la adquisición de medicamentos es muy limitada para cada familia, esto
genera que cada peruano a la hora de presentar un problema de salud intente
llevar un tratamiento improvisado, la cual se caracteriza por ser una terapia sin
prescripción médica.1

Mientras tanto el uso descontrolado de los antibióticos nos está llevando a una
serie de consecuencias graves como el ocultamiento de una dolencia, la demora
en la atención médica, la presencia de efectos adversos e interacciones químicas
entre los fármacos y el incremento de la resistencia a los medicamentos
antibacterianos.2

El Instituto Nacional de Salud (INS) informa que en el año 2018 el 53,4 % de

personas que acuden a establecimientos farmacéuticos en el Perú, adquieren
antibióticos sin prescripción médica. La prevalencia de la automedicación
antimicrobiana en los países de bajos recursos es variable, la estimación general
es del 38,8 % y en América del sur presentaron una alta prevalencia general del
44,1 %.1,3

Según la Organización Mundial de la Salud (OMS) en las publicaciones que viene

realizando, presenta un registro de microorganismos resistentes a los antibióticos,
en la que detalla a diferentes grupos de bacterias dañinas para la salud, este
registro se ha trabajado para pretender orientar y fomentar la investigación de
nuevos fármacos, esta relación comprende diferentes bacterias como: Escherichia
coli, Proteus, Klebsiella, Acinetobacter y Pseudomonas. Estas generan lesiones
severas y mortales, que atacan al sistema sanguíneo, urinario y respiratorio.4

Staphylococcus aureus forma parte de nuestra microbiota cutánea y son también

causa habitual de infecciones tanto en la comunidad como en los centros de
atención de salud. Los pacientes con infecciones por esta bacteria resistente a la
meticilina tienen una probabilidad de fallecer un 64 % mayor que los pacientes
con infecciones farmacosensibles.5

1
El estudio realizado en el Hospital Nacional Hipólito Unanue en Lima, da a
conocer que Staphylococcus aureus genera infecciones y lesiones graves, pero
no necesariamente va producir un índice alto de morbilidad y mortalidad en la
población. El avance de la resistencia bacteriana que esta produce viene siendo
un problema de salud en la actualidad. La vancomicina, uno de los medicamentos
más utilizados en el esquema del tratamiento para infecciones por esta bacteria,
ya no viene siendo tan efectiva. Esto conlleva a una condición epidemiológica
muy crítica en los países en la cual todavía no se ha desarrollado casos de esta
magnitud.6

En la ciudad de Chiclayo en el periodo 2009 - 2014, el estudio realizado en el área

de servicio crítico de un hospital público, nos revela que Escherichia coli es una
de las bacterias que se encuentran con mayor incidencia en los urocultivos
realizados a pacientes por posibles infecciones del tracto urinario de origen
intrahospitalario, dando a conocer que este microorganismo presenta un índice
alto de resistencia a los fármacos betalactámicos pero también una elevada
sensibilidad a los aminoglucósidos.7

Dentro de las especies vegetales que ayudan a reducir e impedir las

enfermedades que aquejan al ser humano, destacan varias con grandes
propiedades farmacológicas. Es por ello que la fitoterapia se viene presentando
como una posible solución terapéutica, con el fin de tratar o curar afecciones de
origen bacteriano, que se complementa con la medicina convencional a través de
una formulación, según el paciente y lo que padece. La mayor parte de estos
recursos se localiza en la Amazonia. Sin embargo, muchas de ellas están por ser
identificadas botánicamente.8

El principal empleo que se viene realizando de estos recursos vegetales son de

uso terapéutico, nutricional y costumbrista, cabe resaltar que alrededor de 5,000
especies de estas ya han sido evaluadas hasta el momento, siendo la mayor
parte oriundas de nuestro país, sin dejar de lado que aproximadamente 600
géneros de plantas son introducidos en el ámbito nacional.9

2
Las bacterias como Escherichia coli se caracterizan por presentar bacilos Gram
negativos y pertenecer a la familia Enterobacteriaceae. Son relativamente
resistentes a los agentes externos, poseen un tamaño entre 0,5 x 1,0 a 3,0
micras, se transportan gracias a sus flagelos, se localizan en la microbiota del
tracto gastrointestinal y alguna de estas son inofensivas para el ser humano. Sin
embargo, las que se consideran patógenas producen diferentes manifestaciones
clínicas dañinas para el organismo como por ejemplo cólicos estomacales y
evacuaciones líquidas sangrantes.10

Sin embargo, Staphylococcus aureus presenta cocos Gram positivos y poseen un

tamaño de 0,5 a 1,5 micras, formando racimos de uvas, estas se caracterizan por
ser la principal causa de bacteriemia intrahospitalaria en el mundo. La ubicación
de esta bacteria en la mucosa nasal juega un papel importante para su
propagación y resistencia a diferentes fármacos. No obstante, algunas cepas
tienen cierta inclinación por algunas zonas específicas, como por ejemplo
Staphylococcus epidermidis que se desarrolla en la dermis y Staphylococcus
capitis que se desarrolla en el cuero cabelludo.11

Varios países fomentan el uso de plantas medicinales, algunos como Rusia y

China emplean fitofármacos como alternativa en la medicina tradicional. Hoy en
día la gran industria farmacéutica propone medicamentos a base de recursos
naturales, siendo estos requeridos en varios países del primer mundo.8

Senecio canescens se cosecha y distribuye en las alturas de Venezuela hasta

Argentina. En el Perú, se desarrolla en zonas como pastizales naturales, ubicado
en Áncash, Apurímac, Huánuco, Junín, Cuzco, Huancavelica, La Libertad, Lima,
Tacna, Pasco y Puno, entre los 3500 y 5000 metros de altitud. Podemos
encontrarla en Lima cerca de las localidades de Canta, Huaral, Huarochirí, Oyón y
Yauyos, siendo empleada como un recurso de grandes propiedades
farmacológicas que se puede conseguir con el apelativo de “wila wila”, “oreja de
conejo”, “ancosh” y “Huila-Huila”, siendo las hojas la parte más utilizada dentro del
ámbito nacional para contrarrestar las afecciones respiratorias.12

3
 Figura 1. Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)
Fuente: Elaboración propia.

Entre los antecedentes al desarrollo del trabajo de investigación se dispone de los

siguientes:
Huillca L. (2020), determinó el efecto antimicrobiano in vitro de los liposomas que
fueron preparados con el extracto hidroalcohólico al 70 % de Senecio rhizomatus
Rusby “tikllaywarmi”, se determinó la concentración mínima inhibitoria del extracto
frente a Pseudomonas aeruginosa con un valor de 0,125 mg y el halo máximo de
17,306 mm a una concentración de 160 mg, luego se procedió a la elaboración de
los liposomas utilizando componentes como fosfatidilcolina, donde fueron
sometidos a diferentes pruebas y controles microbiológicos donde se demostró la
ausencia de microorganismos que puedan alterar su composición, seguidamente
se evaluó la actividad antibacteriana in vitro de los liposomas mediante el método
de microdilución en caldo y la turbidez (lectura al espectrómetro UV. Visible),
donde se emplearon concentraciones de 12, 25, 50, 100 y 200 mg del extracto
respectivamente. Concluyendo que las 5 concentraciones del extracto
hidroalcohólico impidieron el desarrollo microbiano de la cepa en estudio, pero a
200 mg (7 %) y a 100 mg (11 %) obtuvieron un mejor efecto antibacteriano.13

Anco L, et al (2019), evaluaron el efecto antibacteriano in vitro de cuatro

concentraciones del extracto etanólico de las hojas de Senecio hyoseridifolius
Wedd (Llancahuasha) frente a microorganismos Gram positivos y Gram negativos
como Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y

4
Pseudomonas aeruginosa, cuyo resultados reflejaron que a concentraciones de
200, 100 y 50 mg/ml, con un porcentaje de 100, 50 y 25 % respectivamente,
impiden el desarrollo bacteriano de Staphylococcus aureus y Staphylococcus
epidermidis, sin embargo frente a Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa no
presentaron ningún tipo de inhibición, demostrando así efecto antibacteriano solo
frente a dos cepas.14

Alonso G. (2021), evaluó el efecto antiulceroso gástrico del extracto etanólico de

las hojas secas de Senecio canescens (Humb. & Bonpl.) Cuatrec. “HUILA HUILA”
en ratas albinas Cepa Holtzman. En la prueba de solubilidad, se evidenció que el
extracto etanólico de las hojas secas fue muy soluble en agua y etanol, pero poco
soluble en metanol. En el extracto etanólico se encontró la presencia de
alcaloides, flavonoides, compuestos fenólicos, taninos, triterpenos y aminoácidos.
Concluyendo que el extracto etanólico de las hojas secas de Senecio canescens
(Humb. & Bonpl.) Cuatrec. “HUILA HUILA” presentó efecto antiulceroso en ratas
albinas inducidas a úlcera gástrica.15

Vinod K, et al (2019), evaluaron la composición química y la actividad

antibacteriana del aceite esencial de Senecio graciliflorus frente a Pseudomonas
aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Salmonella typhi, dando
como resultado que el aceite esencial de Senecio graciliflorus presentó un halo de
inhibición de 8,6, 6,0, 4,2, y 3,3 mm frente a Staphylococcus aureus, Escherichia
coli, Salmonella typhi y Pseudomonas aeruginosa demostrando así actividad
antibacteriana solo frente a una cepa.16

Sabry S, et al (2021), determinaron el efecto in vitro del extracto de partes

vegetales de Senecio glaucus frente a bacterias, evaluando la actividad
antimicrobiana de los extractos metanólicos de las diferente partes del recurso
vegetal como tallo, raíz y hoja, recolectados en diferentes zonas. Concluyendo
que el extracto metanólico de la raíz, tallo y hoja poseen actividad antibacteriana
frente a Escherichia coli con halos de inhibición de 25,15 y 15 mm, sin embargo
frente a Pseudomonas aeruginosa demostró resultados negativos de inhibición.17

5
Chandra M, et al (2019), evaluaron la actividad antibacteriana y antifúngica del
aceite esencial de dos compuestos aislados de Senecio royleanus, frente a cinco
patógenos bacterianos y fúngicos. Concluyendo que el aceite esencial de estos
dos compuestos aislados presentaron los siguientes resultados: 1,10 β-epoxi 6-
oxo-furanoeremofilano presentó la máxima actividad antibacteriana frente a
Agrobacterium tumefaciens con halos de inhibición de 13 mm y actividad fúngica
frente a Fusarium oxysporum con halos de inhibición de 15 mm. Sin embargo el 1
β,10-epoxi-furanoeremofilano se encontró inactivo frente a la cepa de Escherichia
coli y presentó halos de inhibición de 12 mm frente a la cepa de Bacillus subtilis y
de Rhizoctonia solani.18

En el Perú, el uso terapéutico de los recursos naturales como alternativa en el

tratamiento de enfermedades infecciosas se usa desde la antigüedad basándose
en teorías y creencias nativas. Gracias a su biodiversidad, se estima que presenta
25000 especies vegetales con actividad biológica. Sin embargo, existen recursos
con escasa investigación que conllevaría a un mal manejo de la sistematización
etnobotánica, etnofarmacológica y toxicológica de las diferentes especies
vegetales. Por esta razón se justifica el presente trabajo, aportando conocimiento
científico y a su vez investigando las posibles propiedades del extracto
hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila
wila), además de incentivar a la industria farmacéutica a utilizar los recursos
vegetales como posible alternativa en la producción de fitofármacos.19

El objetivo general del estudio fue determinar la actividad antibacteriana in vitro

del extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl.
Cuatrec. (wila wila) frente a las cepas tipificadas de Staphylococcus aureus y
Escherichia coli.

La hipótesis general del estudio fue:

El extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl.

Cuatrec. (wila wila) presenta actividad antibacteriana in vitro frente a las cepas
tipificadas de Staphylococcus aureus y Escherichia coli.

6
 II. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1 ENFOQUE Y DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN

Enfoque: Cuantitativo, porque a través de la medición se pudo comprobar y

obtener nuevas hipótesis, y de diseño experimental porque se evaluó el efecto
de las variables, donde el investigador controla las condiciones del estudio.20

Analítico: Por ser un estudio que va establecer la relación entre las variables
después del recojo de los datos.

Explicativo: Porque la atención se concentró en la justificación causal de la

actividad antibacteriana in vitro de las hojas del extracto hidroalcohólico de
Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila) frente a cepas de
Staphylococcus aureus y Escherichia coli.

Prospectivo: Porque se reunió la información luego de iniciado el estudio.

Transversal: Porque la recolección de los datos se realizó en un único

momento.

2.2 POBLACIÓN, MUESTRA Y MUESTREO

Se recolectó un total de 13,19 kg del recurso vegetal con un muestreo

aleatorizado de la zona de recolección. La población estuvo constituida por 5
kilogramos de hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila
wila), procedentes de la localidad de Lima provincia de Yauyos, distrito de
Laraos entre los 3500 y 4000 m.s.n.m.

Para su identificación botánica se llevó el recurso vegetal a un Biólogo

especialista en certificaciones taxonómicas registrado por el Ministerio de
Agricultura y Riego (MINAGRI) (Anexo C).

Se seleccionó las hojas que se encontraron en buen estado, libre de manchas

oscuras o atacadas por insectos, luego se procedió; a lavar con abundante
agua, seguidamente fueron secadas a temperatura ambiente por 24 horas y
llevadas al horno a una temperatura de 40 °C aproximadamente, luego se
llevó a ser trituradas con un mortero para obtener una proporción homogénea

7
 de las partículas, las cuales fueron vertidas en un envase de vidrio oscuro a
temperatura ambiente.21

Para obtener la muestra se elaboró el extracto hidroalcohólico por la técnica

de maceración, consistió en sumergir 1000 gramos de las hojas trituradas en
800 ml de etanol de 70 %, a temperatura ambiente y protegida de la luz;
tomando en cuenta que esta mezcla se dejó en reposo aproximadamente 10
días. Durante este periodo se realizó agitaciones diarias de 5 minutos durante
la mañana. Terminado el periodo de reposo, se procedió a filtrar con papel
Whatman # 03, luego se llevó a baño maria a 40 ± 1 °C, hasta peso
constante, de esta manera se pudo obtener el extracto seco.22,23

El extracto hidroalcohólico se preparó en el Centro de Control Analítico de la

Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San
Marcos.

En cuanto a la unidad de análisis se utilizaron cepas tipificadas de

Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC 25922 (anexo F
y G).

2.3 VARIABLES DE INVESTIGACIÓN

El estudio tiene como variables:

Variable independiente: Extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio

canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila).

Definición conceptual: Solución líquida que contiene metabolitos secundarios.

Definición operacional: La maceración permite la extracción de los metabolitos

secundarios por medio de los disolventes.

Variable dependiente: Actividad antibacteriana frente a cepas de

Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC 25922.

Definición conceptual: Capacidad de inhibir el desarrollo bacteriano.

Definición operacional: La actividad antibacteriana se mide mediante la

susceptibilidad in vitro de los microorganismos patógenos seleccionados.

8
2.4 TÉCNICAS E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS

La técnica que se utilizó en esta investigación fue la observación, y el

instrumento de recolección de datos fue mediante el uso de fichas en las
cuales se colocó los resultados obtenidos en el análisis de solubilidad,
tamizaje fitoquímico y el ensayo microbiológico de cada cepa bacteriológica
utilizada.20

2.5. PROCESO DE RECOLECCIÓN DE DATOS

2.5.1 Análisis previo del extracto alcohólico

El análisis previo se realizó en el Centro de Control Analítico de la

Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor
de San Marcos donde se realizaron las siguientes pruebas:

a) Índice afrosimétrico: Se colocó 1 g del extracto en un tubo de

ensayo y se añadió 5 ml de agua destilada; seguidamente se
sometió a baño maria por 2 min. Este proceso se realizó con
agitación constante y enérgica con ayuda de una bagueta. Los
resultados se vieron por la persistencia de espuma por un
determinado tiempo, esto se califica de 5 - 20 min (+) y 20 - 25 min
(++).24
b) Determinación de pH a 25°C: En un tubo de ensayo se agregó 1 g
del extracto seco, luego se procedió a añadir 5 ml de etanol y con
ayuda del potenciómetro marca LUTRON PH-220S, se determinó
el pH de la solución.
c) Prueba de solubilidad: En cada uno de los 8 tubos de ensayo se
colocó 1 g del extracto seco de las hojas de Senecio canescens
Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila), seguidamente se agregó a
cada tubo 1 ml de los diferentes solventes a trabajar: agua
destilada, cloroformo, metanol, etanol, n-hexano, acetona y ácido
acético.

9
2.5.2 Marcha fitoquímica

Se colocó 300 mg del extracto hidroalcohólico seco a cada uno de los

tubos de ensayo, luego se agregó 10 ml de etanol de 96 % y se
procedió a homogenizar. Seguidamente se adicionó a cada uno de
ellos los reactivos correspondientes, con la finalidad de determinar la
presencia de metabolitos secundarios. Estos se dan por técnicas
químicas de reacción por coloración y precipitación, como la reacción
de: Dragendorff, Mayer y Wagner (alcaloides), Baljet (lactonas),
Shinoda (flavonoides), Kedde (cardenólidos), Lieberman Burchard
(esteroides), espuma (saponinas), Cloruro férrico (taninos), Lieberman
Burchard (triterpenos), Cloruro férrico (fenoles) y prueba cualitativa
(antocianinas) según el método de Olga Lock.24

2.5.3 Actividad antibacteriana por método Kirby Bauer o antibiograma

Se realizó en el laboratorio microbiológico BIOEM LAB S.A.C., por el

método de difusión en agar por discos (KIRBY BAUER), por triplicado.

a) Preparación de los extractos a ensayar: Se procedió a agregar a

cuatro tubos de ensayo 1000, 800, 600 y 400 μL del extracto
hidroalcohólico, luego se aforó con el diluyente Dimetilsulfóxido
(DMSO), obteniendo las concentraciones deseadas de 100, 80, 60
y 40 % respectivamente.
b) Activación de las cepas: La activación de la cepa de
Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC
25922 fueron reactivadas en medio de cultivo Agar Soya Tripticasa
(TSA) a 35 ºC de 2 a 8 horas, esto se realizó manteniendo las
medidas de bioseguridad según lo que precisa el proveedor en la
ficha técnica y el manual de bioseguridad en el laboratorio
elaborada por la Organización Mundial de la Salud (OMS).25,26
c) Preparación del inóculo: Se comprobó que los cultivos indiquen
la formación de un solo microorganismo, con ayuda de una asa
bacteriológica se procedió a diluir el cultivo a una suspensión
estándar de 5 ml de agua peptonada al 0,1 %. Se ajustó el inóculo

10
 a la concentración correspondiente al 0,5 de la escala de Mac
Farland, ajustada al rango equivalente de 1x108 Unidades
Formadoras de Colonia/mililitro (UFC/ml).27,28
d) Preparación de los medios de cultivo: Se utilizó
aproximadamente 25 ml de Agar Plate Count (APC), a 45 - 50 °C,
luego fueron vertidos sobre placas Petri de 90 mm de diámetro y se
dejaron solidificar a temperatura ambiente.29
e) Inoculación de las placas: Los inóculos bacterianos fueron
colocados en los medios de cultivo ya solidificados y con ayuda de
un hisopo estéril se empezaron a distribuir en diferentes
direcciones. Se dejó reposar aproximadamente 5 minutos antes de
aplicar los discos evitando así un posible daño a la bacteria.29
f) Grupos a ensayar: Se procedió a preparar los discos de papel
filtro Whatman Nº 3, de 6 mm de diámetro previamente
esterilizados por autoclave por 30 minutos. Estos fueron
preparados según los grupos que se detallan a continuación: Grupo
I: Discos embebidos con Dimetilsulfóxido (DMSO), Grupo II: Disco
embebidos con el extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio
canescens al 40 %, Grupo III: Disco embebidos con el extracto
hidroalcohólico de las hojas Senecio canescens al 60 %, Grupo IV:
Disco embebidos con el extracto hidroalcohólico de las hojas
Senecio canescens al 80 %, Grupo V: Discos embebidos con el
extracto hidroalcohólico de las hojas Senecio canescens al 100 %,
Grupo VI: Discos con ciprofloxacino de 5 µg. Luego se colocaron
los discos en el centro de la superficie del agar y con ayuda de
pinzas estériles se aplicó una ligera presión, el cual se impregnó
con las distintas concentraciones del extracto hidroalcohólico de las
hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila).
Por último las placas se incubaron 24 horas a 35 ± 1 ºC en posición
invertida y al aire libre. Estos ensayos fueron realizados por
triplicado.30,31
g) Interpretación de los resultados: Pasado el tiempo se procedió a
la medición del halo de inhibición de crecimiento (diámetro),
mediante el instrumento de vernier expresado en milímetros.32,33.34

11
2.6. MÉTODOS DE ANÁLISIS ESTADÍSTICOS

Luego de la obtención de los análisis mencionados, se realizó las

valoraciones mediante estadística descriptiva utilizando el paquete informático
Microsoft Excel versión 2019 para las pruebas de ANOVA y test de HSD
tukey.35

2.7. ASPECTOS ÉTICOS

Al realizar este estudio se tuvo en cuenta evitar la contaminación bacteriana,

para ello se aplicó los diferentes protocolos de cuidados necesarios y
específicos detallados en los manuales de bioseguridad, proporcionado por
las entidades de salud como la Organización Mundial de la Salud (OMS).25

12
 III. RESULTADOS

3.1 De las pruebas de solubilidad

Tabla 1. Solubilidades del extracto hidroalcohólico desecado

SOLVENTES RESULTADOS
N-hexano -
Cloroformo -
Etanol 96 % +++
Metanol +
Ácido acético ++
Acetona ++
Agua destilada +++

Fuente: Elaboración propia

Donde: (-) Insoluble (+) Poco soluble (++) Soluble (+++) Muy soluble

En la tabla 1, se puede observar que el extracto hidroalcohólico es muy soluble

en agua destilada y etanol de 96 %, soluble en ácido acético y acetona, poco
soluble en metanol e insoluble en N-hexano y cloroformo.

13
3.2 De la marcha fitoquímica
Tabla 2. Marcha fitoquímica del extracto hidroalcohólico desecado de (Wila
Wila)

CONSTITUYENTES QUÍMICOS ENSAYO REACCIÓN

Antocianinas Prueba cualitativa ++
Reacción de Dragendorff +++
Alcaloides Reacción de Mayer ++
Reacción de Wagner +
Lactonas Reacción de Baljet ++
Flavonoides Reacción de Shinoda ++
Cardenólidos Reacción de Kedde -
Reacción de Liebermann
Esteroides -
Burchard
Saponinas Reacción de espuma -
Taninos Reacción de cloruro férrico +++
Reacción de Liebermann -
Triterpenos
Burchard
Fenoles Reacción de cloruro férrico +++

Fuente: Elaboración propia

Donde: (+++) Reacción muy evidente (++) Reacción evidente (+) Reacción
poco evidente (-) No hubo reacción

En la tabla 2, se puede observar la presencia considerable de alcaloides, fenoles

y taninos; seguido por flavonoides, lactonas y antocianinas. Todos estos
fitoconstituyentes químicos representan el inicio de los principales efectos
farmacológicos que el extracto hidroalcohólico presenta.

14
3.3 Del ensayo microbiológico
Tabla 3. Resultado del análisis in vitro por el método Kirby-Bauer

Staphylococcus aureus Escherichia coli

CEPAS
ATCC 25923 ATCC 25922
Halos de inhibición (mm)
Grupos de ensayo
n x n x
1 2 3 1 2 3
Dimetilsulfóxido(DMSO) 0 0 0 0 0 0 0 0
100 % 12,0 12,2 12,3 12,16 7,3 7,2 7,1 7,2
80 % 9,2 9,1 9,4 9,23 0 0 0 0
60 % 8,3 8,2 8,4 8,3 0 0 0 0
40 % 7,5 7,4 7,2 7,36 0 0 0 0
Ciprofloxacino 5 µg 38 38 38 38 50 50 50 50

Fuente: Elaboración propia

n= N° de ensayos
x= Promedio de halos
En la tabla 3 se observan las lecturas de los halos de inhibición de los diferentes
grupos de ensayo donde se evaluó la actividad antibacteriana in vitro de las hojas
de Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila) y su comparación con
ciprofloxacino de 5 µg, dando como resultado una diferencia muy significativa con
el control positivo en ambas cepas, no obstante se demostró que a
concentraciones de 100, 80, 60 y 40 % presentaron actividad antibacteriana con
halos promedio de inhibición de 12,16, 9,23, 8,3 y 7,36 mm respectivamente
frente a la cepa de Staphylococcus aureus ATCC 25923. Sin embargo, solo a una
concentración de 100 % presentó un halo de inhibición promedio de 7,2 mm frente
a la cepa de Escherichia coli ATCC 25922.

15
Tabla 4. Análisis de varianza para Staphylococcus aureus ATCC 25923

Origen de Suma de Grados Promedio de F Probabilidad Valor crítico

las cuadrados de los para F
variacione libertad cuadrados
s

Entre 2583,817778 5 516,7635556 38757,26667 0,00 3,105875239

grupos

Dentro de 0,16 12 0,013333333

los grupos

Total 2583,977778 17

Fuente: Programa estadístico Excel 2019

En la tabla 4 el análisis de varianza (ANOVA), realizado entre todos los grupos de

estudio, muestra un P= 0,00 (p< 0,05) esto indica que existe diferencia
significativa entre las medias de todos los grupos analizados.

16
Tabla 5. Prueba de HSD Tukey para Staphylococcus aureus ATCC 25923

TUKEY alpha 0,05

HSD/KR
AMER

group mean n ss df q-crit

Dimetil 0,00 3 0
sulfóxi
do

extract 7,37 3 0,046

o al 40 66666
% 7

extract 8,30 3 0,02

o al
60%

extract 9,23 3 0,046

o al 66666
80% 7

extract 12,17 3 0,046

o al 66666
100% 7

ciprofl 38,00 3 0
oxacin
o 5 µg

18 0,16 12 4,75

Q TEST

group 1 group 2 mean std q- lower upper p- mea Coh

err stat valu n-crit en d
e

Dimetil extracto 7,3666 0,0666 110, 7,05 7,6833 0,00 0,31 63,7
sulfóxi al 40 % 66667 66667 5 33333 6666 9720
do 67 47

17
Dimetil extracto 8,3 0,0666 124, 7,9833 8,6166 0,00 0,31 71,8
sulfóxi al 60% 66667 5 33333 66667 6666 8010
do 67 85

Dimetil extracto 9,2333 0,0666 138, 8,916 9,55 0,00 0,31 79,9
sulfóxi al 80% 33333 66667 5 66666 6666 6301
do 7 67 23

Dimetil extracto 12,166 0,0666 182, 11,85 12,48 0,00 0,31 105,
sulfóxi al 100% 66667 66667 5 33333 6666 3664
do 3 67 24

Dimetil ciproflo 38 0,066 570 37,683 38,31 0,00 0,31 329,

sulfóxi xacino 66666 33333 66666 6666 0896
do 5 µg 7 7 67 53

extract extracto 0,9333 0,066 14 0,6166 1,25 0,00 0,31 8,08

o al 40 al 60% 33333 66666 66667 6666 2903
% 7 67 77

extract extracto 1,8666 0,066 28 1,55 2,1833 0,00 0,31 16,1

o al 40 al 80% 66667 66666 33333 6666 6580
% 7 67 75

extract extracto 4,8 0,0666 72 4,4833 5,1166 0,00 0,31 41,5

o al 40 al 100% 66667 33333 66667 6666 6921
% 67 94

extract ciproflo 30,633 0,0666 459 30,316 30,95 0,00 0,3 265
o al 40 xacino 33333 66667 ,5 66667 166 ,29
% 5 µg 666 244
7 9

extract extracto 0,9333 0,0666 14 0,6166 1,25 0,00 0,31 8,08

o al al 80% 33333 66667 66667 6666 2903
60% 67 77

extract extracto 3,8666 0,0666 58 3,55 4,1833 0,00 0,3 33,

o al al 100% 66667 66667 33333 166 486
60% 666 315
7 6

extract ciproflo 29,7 0,0666 445, 29,383 30,016 0,00 0,31 257,
o al xacino 66667 5 33333 66667 6666 2095
60% 5 µg 67 45

extract extracto 2,9333 0,0666 44 2,616 3,25 0,00 0,31 25,4

18
o al al 100% 33333 66667 66666 6666 0341
80% 7 67 18

extract ciproflo 28,766 0,0666 431 28,45 29,083 0,00 0,31 249,
o al xacino 66667 66667 ,5 33333 6666 1266
80% 5 µg 67 41

extract ciproflo 25,83 0,066 387 25,51 26,15 0,00 0,31 223,
o al xacino 33333 66666 ,5 66666 6666 7232
100% 5 µg 3 7 7 67 29

Fuente: Programa estadístico Excel 2019

En la tabla 5 se observa el análisis de comparaciones múltiples entre los

diferentes grupos de estudio mediante la prueba de HSD Tukey. La cual
determinó diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos de
comparación p< 0,05

19
Tabla 6. Análisis de varianza para Escherichia coli ATCC 25922

Origen de Suma de Grados Promedio de F Probabilidad Valor crítico

las cuadrados de los cuadrados para F
variaciones libertad

Entre grupos 6019,6 5 1203.92 722352 0,00 3,105875239

Dentro de 0,02 12 0,001666667

los grupos

Total 6019,62 17

Fuente: Programa estadístico Excel 2019

En la tabla 6 el análisis de varianza (ANOVA), realizado entre todos los grupos de

estudio, muestra un p< 0,05 esto indica que existe diferencia significativa mínima
entre las medias de al menos un grupo.

20
Tabla 7. Prueba de HSD Tukey para Escherichia coli ATCC 25922

TUKEY HSD/KRAMER alpha 0,05

group mean n ss df q-crit

Dimetilsulfó 0,00 3 0
xido

extracto al 0,00 3 0
40 %

extracto al 0,00 3 0
60%

extracto al 0,00 3 0
80%

extracto al 7,20 3 0,02

100%

ciprofloxaci 50,00 3 0
no 5 µg

18 0,02 12 4,75

Q TEST

group 1 group 2 mea std err q-stat lower upper p- mean- Cohen
n value crit d

Dimetilsulfó extracto 0 0,02357 0 - 0,11195 1,00 0,11195 0

xido al 40 % 0226 0,111958 857 857
574

Dimetilsulfó extracto 0 0,02357 0 - 0,11195 1,00 0,11195 0

xido al 60% 0226 0,111958 857 857
574

Dimetilsulfó extracto 0 0,02357 0 - 0,11195 1,00 0,11195 0

xido al 80% 0226 0,111958 857 857
574

21
Dimetilsulfó extracto 7,2 0,02357 305,4 7,088041 7,31195 0,00 0,11195 176,363
xido al 100% 0226 701 426 857 857 261

Dimetilsulfó ciproflox 50 0,02357 2121, 49,88804 50,1119 0,00 0,11195 1224,74

xido acino 5 0226 32 143 586 857 487
µg

extracto al extracto 0 0,02357 0 - 0,11195 1,00 0,11195 0

40 % al 60% 0226 0,111958 857 857
574

extracto al extracto 0 0,02357 0 - 0,11195 1,00 0,11195 0

40 % al 80% 0226 0,111958 857 857
574

extracto al extracto 7,2 0,02357 305,4 7,088041 7,31195 0,00 0,11195 176,363
40 % al 100% 0226 701 426 857 857 261

extracto al ciproflox 50 0,02357 2121, 49,88804 50,1119 0,00 0,11195 1224,74

40 % acino 5 0226 32 143 586 857 487
µg

extracto al extracto 0 0,02357 0 - 0,11195 1,00 0,11195 0

60% al 80% 0226 0,111958 857 857
574

extracto al extracto 7,2 0,02357 305,4 7,088041 7,31195 0,00 0,11195 176,363
60% al 100% 0226 701 426 857 857 261

extracto al ciproflox 50 0,02357 2121, 49,88804 50,1119 0,00 0,11195 1224,74

60% acino 5 0226 32 143 586 857 487
µg

extracto al extracto 7,2 0,02357 305,4 7,088041 7,31195 0,00 0,11195 176,363
80% al 100% 0226 701 426 857 857 261

extracto al ciproflox 50 0,02357 2121, 49,88804 50,1119 0,00 0,11195 1224,74

80% acino 5 0226 32 143 586 857 487
µg

extracto al ciproflox 42,8 0,02357 1815, 42,68804 42,9119 0,00 0,11195 1048,38
100% acino 5 0226 85 143 586 857 161
µg

Fuente: Programa estadístico Excel 2019

22
En la tabla 7 se observa el análisis de comparaciones múltiples entre los
diferentes grupos de estudio mediante la prueba de HSD Tukey. La cual
determinó diferencia estadísticamente significativa entre 9 grupos de comparación
p< 0,05

Tabla 8. Escala de sensibilidad de Duraffourd de los extractos

hidroalcohólicos frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia
coli ATCC 25922

Escala Duraffourd de los extractos

hidroalcohólicos
GRUPOS Staphylococcus Escherichia coli ATCC
aureus ATCC 25923 25922

Dimetilsulfóxido - -
100 % + -
80 % + -
60 % + -
40 % - -
Ciprofloxacino 5 µg +++ +++

Fuente: Elaboración propia

Leyenda:

- (-) Nula: Diámetro (< 8 mm)

- (+) Sensible bajo: Diámetro (9 - 14 mm)
- (++) Muy sensible: Diámetro (15 - 19 mm)
- (+++) Sumamente sensible: Diámetro (> 20 mm)

En la tabla 8 se observa la escala de Duraffourd donde la cepa de

Staphylococcus aureus ATCC 25923 demostró sensibilidad baja en las
concentraciones de 100, 80 y 60 %, y ser nula al 40 %. Sin embargo, la cepa de
Escherichia coli ATCC 25922 presenta una escala nula con cada una de las
concentraciones. Por otro lado, ambas cepas demostraron ser sumamente
sensibles al control positivo (ciprofloxacino 5 µg).

23
Tabla 9. Porcentaje de la actividad inhibitoria de los extractos
hidroalcohólicos frente a Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Escherichia
coli ATCC 25922

Porcentaje de la actividad inhibitoria del

extracto hidroalcohólico
GRUPOS Staphylococcus
Escherichia coli ATCC
aureus ATCC
25922
25923

100 % 32 % 14,4 %
80 % 24,28 % 0%
60 % 21,84 % 0%
40 % 19,36 % 0%
Ciprofloxacino 5 µg 100 % 100 %

Fuente: Elaboración propia

% Inhibición = Diámetro de muestra x 100

Diámetro del control positivo
En la tabla 9 se observa que el extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio
canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila) a concentraciones de 100, 80, 60
y 40 % demostraron un porcentaje de inhibición de 32, 24,28, 21,84 y 19,36 %
respectivamente frente a la cepa de Staphylococcus aureus ATCC 25923. Sin
embargo, a concentraciones de 80, 60 y 40 % presentaron un porcentaje de
inhibición de 0 % y a una concentración de 100 % presentó un porcentaje de
inhibición de 14,4 % frente a la cepa de Escherichia coli ATCC 25922. A su vez, el
control positivo (ciprofloxacino 5 µg) demostró tener 100 % de inhibición en ambas
cepas.

24
 IV. DISCUSIÓN

4.1 Discusión de resultados

De acuerdo con los ensayos de solubilidad realizados en la tabla 1, se

determinó que el extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens
Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila), demuestra ser muy soluble en agua
destilada y etanol a 96 %, soluble en ácido acético y acetona, poco soluble en
metanol e insoluble en N-hexano y cloroformo; Lock O. (2016)24 señala que
esto se debe a la presencia de metabolitos secundarios como alcaloides,
antocianinas, flavonoides y fenoles que se caracterizan por ser moléculas
constituidas por grupos atómicos que contienen nitrógeno, carbono, hidrógeno
y oxígeno, formando enlaces químicos con los solventes polares.

En la tabla 2, se observó la presencia considerable de alcaloides, fenoles y

taninos; seguido por flavonoides, lactonas y antocianinas. Todos estos
fitoconstituyentes químicos representan el inicio de los principales efectos
farmacológicos que el extracto hidroalcohólico presenta, estos resultados son
similares a los obtenidos por Chilquillo H. y Cervantes R. (2017)36, en su
estudio sobre efecto antiinflamatorio como analgésico y antioxidante del
extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl.
Cuatrec. (vira vira), encontraron la presencia de alcaloides, flavonoides,
compuestos fenólicos y saponinas, de igual forma los resultados son similares
en lo descrito por Alonso G. (2021)37, efecto antiulceroso gástrico del extracto
etanólico de las hojas secas Senecio Canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec.
(Huila Huila) en ratas albinas cepa holtzman, hallaron compuestos en
abundante cantidad como alcaloides, flavonoides y compuestos fenólicos.

El estudio realizado por Anco L, et al (2019)14, sobre el efecto antibacteriano

in vitro de cuatro concentraciones del extracto etanólico de las hojas de
Senecio hyoseridifolius Wedd (Llancahuasha) frente a microorganismos Gram
positivos y Gram negativos Se observó que a concentraciones de 200 mg/ml,
100 mg/ml y 50 mg/ml presentan halos de inhibición promedio de 19 mm, 18
mm y 17.3 mm respectivamente frente a cepas de Staphylococcus aureus, sin
embargo frente a Escherichia coli no presentaron ningún tipo de inhibición,
demostrando así efecto antibacteriano solo frente a una sola cepa. Estos

25
resultados mostraron similitud a los obtenidos en la tabla 3 del ensayo
microbiológico, considerando que ambas especies vegetales pertenecen a la
misma familia. De igual forma Vinod K, et al (2019)16, evaluaron la
composición química y la actividad antibacteriana del aceite esencial de
Senecio graciliflorus frente a Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli,
Staphylococcus aureus y Salmonella typhi, dando como resultado que el
aceite esencial de Senecio graciliflorus presentó un halo de inhibición de 8,6,
6,0, 4,2, y 3,3 mm frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
Salmonella typhi y Pseudomonas aeruginosa demostrando así actividad
antibacteriana solo frente a una cepa.16

El análisis de varianza (ANOVA), nos permitió comparar las diferencias que

existe entre los promedios de los halos de inhibición entre todos los grupos de
ensayo, obteniendo un p<0,05 por lo tanto se confirma que son
estadísticamente diferentes en al menos un grupo como muestra la tabla 4 y
6, de acuerdo a estos resultados se procedió a realizar el análisis de HSD
Tukey mostrado en la Tabla 5 y 7 donde se encontró diferencia significativa
en varios grupos analizados, evidenciando que existe actividad antibacteriana
del extracto hidroalcohólico en todos los grupo frente a Staphylococcus
aureus ATCC 25923 y solamente un grupo frente a Escherichia coli ATCC
25922, pero ninguno se compara con la efectividad del ciprofloxacino 5 µg
(control positivo).

Por otro lado, en la tabla 8 nos muestra la escala de Duraffourd donde la

cepa de Escherichia coli ATCC 25922 presentó una escala nula con las
diferentes concentraciones del extracto, en cambio la cepa de Staphylococcus
aureus ATCC 25923 demostró sensibilidad baja en las concentraciones de
100, 80 y 60 %, y ser nula al 40 %, dando un porcentaje inhibitorio como se
detalla en la tabla 9, de 14,4 % frente a Escherichia coli ATCC 25922, con
una concentración al 100% del extracto hidroalcohólico y 32, 24,28, 21,84 y
19,36 % para Staphylococcus aureus ATCC 25923 con una concentración al
100, 80, 60 y 40 % del extracto hidroalcohólico.

26
4.2 Conclusiones

Los estudios realizados en el presente trabajo nos permiten llegar a las

siguientes conclusiones:

- El extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. &

Bonpl. Cuatrec. (wila wila) presentó actividad antibacteriana in vitro frente a
las cepas tipificadas de Staphylococcus aureus y Escherichia coli.

- En el extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. &

Bonpl. Cuatrec. (wila wila) se determinó metabolitos secundarios con
actividad antibacteriana tales como alcaloides, taninos y fenoles.

- El extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. &

Bonpl. Cuatrec. (wila wila) presentó actividad antibacteriana in vitro frente a
la cepa de Staphylococcus aureus ATCC 25923 a las concentraciones de
100, 80, 60 y 40 % y frente a la cepa de Escherichia coli ATCC 25922 solo
al 100 %.

- Se comprobó que el ciprofloxacino de 5 µg presentó actividad

antibacteriana in vitro significativamente mayor que el extracto
hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl.
Cuatrec. (wila wila) frente a las cepas tipificadas Staphylococcus aureus y
Escherichia coli.

27
4.3 Recomendaciones

- Se recomienda emplear estudios comparativos sobre la actividad

antibacteriana de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec.
(wila wila) recolectadas de diferentes zonas del país.

- Así mismo, se recomienda realizar estudios de sinergismo con otros

recursos vegetales para un posible efecto antibacteriano más alto.

- Del mismo modo se recomienda continuar con las investigaciones a fin de

obtener mejores resultados frente a diferentes cepas que puedan causar
daño al ser humano.

28
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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hidroalcohólico de las hojas de Senecio Canescens Humb. & Bonpl.
Cuatrec. (vira vira). [Tesis para optar el título Profesional de Químico
Farmacéutico]. Huancayo: Universidad Roosevelt; 2021.

34
ANEXOS

35
 Anexo A. Operacionalización de las variables

VARIABL Tipo de DEFINICIÓN DEFINICIÓN DIMENSION INDICADOR N° VALOR CRITER

variable
ES CONCEPTU OPERACIO ES ES DE FINAL IOS
AL NAL ITEM
S
La Tamizaje Identificació Rango
VARIABL Solución
maceración fitoquímico n de Abunda de
E líquida que
INDEPEN contiene los permite la metabolitos nte presenc
DIENTE metabolitos
extracción de secundarios ia o
Extracto secundarios.
hidroalcoh los 5 Modera ausenci
ólico de
Cualitati metabolitos do a
las hojas
de vo secundarios
Senecio
por medio de Leve
canescen
s Humb. disolventes.
& Bonpl.
Ecaso
Cuatrec.
(wila wila)
Ausente
Diluciones Concentraci 100 % Concen
del extracto ones 80 % tración
hidroalcohól específicas 4 60 % final
ico 40 % despué
s de la
dilución

Evidenc
VARIABL Capacidad La actividad Medición del Crecimi ia de
E
de inhibir el antibacterian Inhibición diámetro del 2 ento inhibici
DEPENDI
ENTE Cuantita desarrollo a se mide del Halo de ón de
inhibición
tivo bacteriano. mediante la crecimiento crecimi
Actividad (mm)
antibacteri susceptibilida bacteriano Sin ento
ana frente
d In Vitro de crecimie
a cepas
de los nto
Staphyloc
microorganis
occus
aureus mos
ATCC
patógenos
25923 y
Escherichi seleccionado
a coli
s.
ATCC
25922

36
 Anexo B. Instrumentos de recolección de datos

Solubilidades del extracto hidroalcohólico desecado

SOLVENTES RESULTADOS
N-hexano
Cloroformo
Etanol 96%
Metanol
Ácido acético
Acetona
Agua destilada

Fuente: Elaboración propia

Donde: (-) Insoluble (+) Poco soluble (++) Soluble (+++) Mu soluble

37
 MARCHA FITOQUÍMICA DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO

CONSTITUYENTES QUÍMICOS ENSAYO REACCIÓN

Antocianinas Prueba cualitativa
Reacción de Dragendorff
Alcaloides Reacción de Mayer
Reacción de Wagner
Lactonas Reacción de Baljet
Flavonoides Reacción de Shinoda
Cardenólidos Reacción de Kedde
Reacción de Liebermann
Esteroides
Burchard
Saponinas Reacción de espuma
Taninos Reacción de cloruro férrico
Reacción de Liebermann
Triterpenos
Burchard
Fenoles Reacción de cloruro férrico

Fuente: Elaboración propia

Donde: (+++) Reacción muy evidente (++) Reacción evidente (+) Reacción
poco evidente (-) No hubo reacción

38
DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO

Staphylococcus Escherichia coli ATCC

CEPAS
aureus ATCC 25923 25922
Concentración del Halos de inhibición (mm)
extracto hidroalcohólico n x n x
(%) 1 2 3 1 2 3
Dimetilsulfóxido(DMSO)
100 %
80 %
60 %
40 %
ciprofloxacino 5 µg

Fuente: Elaboración propia

n= N° de ensayos
x= Promedio de halos

39
Anexo C. Certificado de clasificación taxonómica

40
Anexo D. Informe del análisis fitoquímico

41
Anexo E. Informe de medición de pH

42
Anexo F. Certificado de calidad de Staphylococcus aureus ATCC 25923

43
Anexo G. Certificado de calidad de Escherichia coli ATCC 25922

44
 Anexo H. Constancia de evaluación de la actividad antibacteriana del
extracto hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl.
Cuatrec. (wila wila)

45
46
47
 Anexo I. Evidencias del trabajo de campo

Figura 2. Lugar de recolección: Localidad de Lima provincia de Yauyos, distrito de

Laraos entre los 3500 y 4000 m.s.n.m.

Figura 3. Recolección de la especie vegetal: Senecio canescens Humb. & Bonpl.

Cuatrec. (wila wila)

48
Figura 4. Peso de la muestra recolectada

Figura 5. Limpieza y selección de la muestra (hojas)

49
Figura 6. Preparación del extracto hidroalcohólico de las hojas Senecio
canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)

50
Figura 7. Prueba de solubilidad del extracto hidroalcohólico de las hojas Senecio
canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)

Prueba con NaOH Reacción de Dragendorff Reacción Mayer

51
 Reacción de Wagner Reacción de Baljet Reacción de Shinoda

Reacción de Ninhidrina Reacción de Kedde Reacción de Liebermann

Reacción de Cloruro Férrico Reacción de Lieberman Reacción de Fehling

52
 Reacción de Cloruro Férrico

Figura 8. Marcha fitoquímica del extracto hidroalcohólico de las hojas Senecio

canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila wila)

Figura 9. Activación de las cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923 y

Escherichia coli ATCC 25922.

53
Figura 10. Preparación de las diluciones al 100, 80, 60 y 40 % del extracto
hidroalcohólico de las hojas de Senecio canescens Humb. & Bonpl. Cuatrec. (wila
wila)

Figura 11. Control positivo (ciprofloxacino 5 µg) frente a cepas Staphylococcus

aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC 25922.

54
Figura 12 Control negativo (dimetilsulfóxido) frente a cepas de Staphylococcus
aureus ATCC 25923 y Escherichia coli ATCC 25922.

Figura 13. Actividad antibacteriana del extracto hidroalcohólico al 100, 80, 60, y
40 % frente a cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923

55
Figura 14. Actividad antibacteriana del extracto hidroalcohólico al 100, 80, 60 y
40 % frente a cepas de Escherichia coli ATCC 25922.

56