UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

LABORATORIO N°06
DOCTORA:

Reyes Beltran, María

ALUMNOS:

- Obando Alvarez, Piero Renato

- Pérez Polonio, Moisés Aaron
- Romero Castillo, Elton Esnayder
- Salazar Espino, Alisson Isamar
- Sevillano Seguier, Valeria Celeste
- Torrel Tafur, María Fernanda
- Vasquez Leiva, Carlos Eduardo
- Yance Rodas, Isabella

CURSO:

Bioquímica y Nutrición
 SEMANA N° 6
LABORATORIO N°6

CUANTIFICACIÓN DE HEMOGLOBINA

INTRODUCCIÓN
La hemoglobina es la molécula que transporta el oxígeno de los pulmones a los tejidos
y se encuentra en los hematíes, formados en la médula ósea. Está formada por cuatro
subunidades, en el adulto dos alfa y dos beta. Cada subunidad está formada por una
cadena de globina que tiene un núcleo heme con Fe ++. La disminución de
hemoglobina constituye la anemia. La OMS ha establecido como criterio de anemia
<13 g/dl en varones, <12 g/dl en mujeres, <11 g/dl en gestantes. En niños está en
función de la edad. La anemia tiene diversas causas: menor formación por razones
nutricionales (deficiencia de hierro, de vitamina B12, de ácido fólico) o deficiencia de la
médula ósea (aplasia), hemólisis por problemas del glóbulo rojo (hemoglobinopatías,
esferocitosis, etc.) o por presencia de anticuerpos (anemia hemolítica autoinmune,
eritroblastosis fetal, etc.) o por hemorragia.

MUESTRA:
Sangre total. Volumen de la muestra de solo 8 o 10 μl.

REACTIVOS.
A.-MATERIALES
● Micro cubeta compatible con el hemoglobinómetro.
● Torundas de algodón.
● Guantes no estériles.
● Alcohol

B.-EQUIPO:
● Hemoglobinómetro

PROCEDIMIENTO:
● Una vez que se retire la lanceta retráctil de la zona de punción, esperar que fluya o
se forme espontáneamente la primera gota, sin presionar el dedo.
● Si la gota no se forma espontáneamente, estirar ligeramente la piel del dedo hacia
ambos lados de la punción, evitar la presión ya que puede ocasionar “ordeño”
involuntario y puede ocasionar hemólisis por lo tanto error en los resultados.
● Limpiar las dos primeras gotas de sangre con una torunda de algodón limpia y seca.
Estas gotas de sangre contienen líquido intersticial y pueden dar resultados falsos.
● Sostener la micro cubeta de la zona distal opuesta a la zona de reacción. En este
paso y en relación a la microcubeta se debe tener en cuenta lo siguiente:
● Observar la integridad de la micro cubeta, coloración y homogeneidad del reactivo.
Descartar si esta tiene coloración anaranjada o presenta grumos dentro de la zona de
reacción.
● Mantener la tapa del contenedor cerrada, para evitar la exposición innecesaria de las
microcubetas al aire, a la humedad y al calor, especialmente en climas húmedos, de
esta manera se evita la oxidación de los reactivos.
● Descartar la microcubeta que haya estado expuesta por más de 15 minutos fuera de
su envase original.

VALORES DE REFERENCIA:
VARONES: 14 a 16 g/dl
MUJERES: 12 a 14 g/dl a nivel del mar. Niños en función de la edad.

RESULTADOS

(MUJER)
(VARÓN)

DISCUSIÓN
Los valores de una mujer y un varón de 18 años de edad fueron de 13,8g/dL y de
14.9g/dL, respectivamente, lo que indica que está en sus rangos normales.

CUESTIONARIO I
1. Haga un esquema de la síntesis de la hemoglobina
2. ¿Cómo se clasifican las anemias?
Por la etiología:
- Anemias por deficiencia de hierro: causadas por una ingesta
insuficiente o malabsorción de hierro.
- Anemias por enfermedades crónicas: asociadas con
enfermedades inflamatorias, infecciosas o neoplásicas.
- Anemias hemolíticas: donde hay una destrucción prematura de
los glóbulos rojos.
- Anemias por producción inadecuada de glóbulos rojos: debido a
trastornos de la médula ósea o deficiencias nutricionales.
- Anemias megaloblásticas: por deficiencia de vitamina B12 o ácido
fólico.
Por morfología:
- Microcíticas: glóbulos rojos más pequeños de lo normal,
típicamente en anemias por deficiencia de hierro.
- Normocíticas: glóbulos rojos de tamaño normal, pero en cantidad
insuficiente.
- Macrocíticas: glóbulos rojos más grandes de lo normal, común en
anemias megaloblásticas.

3. ¿En una anemia por deficiencia de hierro cuáles son los exámenes
bioquímicos que se solicitan?
- Hemograma completo (CBC): Para medir el número y el volumen de los
glóbulos rojos.
- Niveles de hemoglobina: Para verificar la cantidad de hemoglobina en la
sangre.
- Niveles de hierro sérico: Para medir la cantidad de hierro disponible en
la sangre.
- Capacidad total de fijación del hierro (TIBC): Para evaluar la capacidad
máxima de la sangre para transportar hierro.
- Ferritina sérica: Para determinar las reservas de hierro en el cuerpo.
- Saturación de transferrina: Para calcular el porcentaje de transferrina
que está siendo utilizada para transportar hierro.
- Recuento de reticulocitos: Para evaluar la respuesta de la médula ósea
a la anemia

4. ¿Qué es una anemia megaloblástica y cuáles son sus causas?

La anemia megaloblástica es un tipo de anemia macrocítica que se caracteriza
por la presencia de megaloblastos en la médula ósea y glóbulos rojos grandes e
inmaduros en la sangre. Estos cambios se deben a una síntesis anormal del
ADN, lo que afecta la producción y maduración de los glóbulos rojos. Las causas
principales incluyen:
 - Deficiencia de vitamina B12 (cobalamina): Puede ser por déficit
alimenticio, ausencia del factor intrínseco de Castle (anemia perniciosa),
o malabsorción intestinal.
- Deficiencia de vitamina B9 (ácido fólico): Puede ser por déficit alimenticio,
alcoholismo, malabsorción intestinal, o interferencia de medicamentos.

5. ¿Cómo se corrige el efecto de la altura sobre la concentración de

hemoglobina?
Para corregir el efecto de la altura sobre la concentración de hemoglobina, se
utilizan factores de corrección porque la concentración de hemoglobina aumenta
con la altitud como respuesta a la menor presión de oxígeno.

6. ¿Cuáles son las hemoglobinas embrionarias y fetales?

- Embrionarias: Hb Gower-1, Hb Gower-2, Hb Portland-1, y Hb Portland-2.
Estas hemoglobinas están presentes durante el desarrollo embrionario y
las primeras semanas de gestación.
- Fetales: HbF, que es la principal hemoglobina durante la vida fetal y
puede persistir en bajos niveles después del nacimiento.

7. ¿Cuáles son las hemoglobinas del adulto y cómo se diferencian?

- Hemoglobina A (HbA): Es la forma predominante en los adultos y está
compuesta por dos cadenas alfa y dos cadenas beta.
- Hemoglobina A2 (HbA2): Es una forma minoritaria y está compuesta por
dos cadenas alfa y dos cadenas delta.
- Hemoglobina F (HbF): Aunque es la hemoglobina fetal, una pequeña
cantidad puede persistir en los adultos.
La principal diferencia entre estas hemoglobinas radica en la composición de
sus cadenas de globina, lo que afecta su afinidad por el oxígeno y su función en
el transporte de gases en el organismo. La HbF, por ejemplo, tiene una mayor
afinidad por el oxígeno que la HbA, lo que es crucial para la transferencia de
oxígeno de la madre al feto durante el embarazo.
 CUANTIFICACIÓN DE BILIRRUBINA
INTRODUCCIÓN
Producto del catabolismo de la hemoglobina (70 a 90%) y de otras hemoproteínas.

Puede ser:
a. BILIRRUBINA INDIRECTA: Es la recién formada. Requiere un solvente para unirse
al reactivo de van der Bergh. Se transporta unida a la albúmina, no se elimina por la
orina. Captada por el hepatocito a través de un sistema aún no dilucidado. En el citosol
se une a algunas de las glutatión-5-transferasas. y al conjugarse con dos ácidos
glucurónico se convierte en directa.
b. BILIRRUBINA DIRECTA O CONJUGADA: con una o dos moléculas de ácido
glucurónico por acción de la UDP-glucuronil transferasa formando respectivamente
mono o di glucurónidos de bilirrubina. Es excretada a través de la membrana
plasmática de los canalículos, pasando a los propios conductos biliares a través de un
transporte que requiere ATP donde participa MRP2 o proteína ligada a la resistencia
multidrogo-2. La bilirrubina directa es eliminada por la bilis hacia el intestino donde es
convertida en estercobilinógeno y luego a estercobilina dando el color a las heces. La
bilirrubina directa es soluble y si aumenta se elimina por la orina.
c. BILIRRUBINA TOTAL: suma de directa e indirecta.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado (reacción de
Ehrlich) produciendo un pigmento color rojo - violáceo (azobilirrubina) que se mide
fotocolorimétricamente a 530nm. Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona
directamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la
presencia de un desarrollador acuoso (Reactivo A) que posibilite su reacción. De forma
tal que, para que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en
la muestra, debe agregarse benzoato de cafeína al medio de reacción.

REACTIVOS
● Reactivo A: solución acuosa de benzoato de cafeína 0,13 mol/l, tamponada y
estabilizada.
● Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 29 mmol/l y ácido clorhídrico 0,17 mol/l.
Reactivo C: solución de nitrito de sodio 0,07 mol.
● Diazorreactivo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar (1 parte de Reactivo C
con 21 partes de Reactivo B. Rotular y fechar.)

PROCEDIMIENTO:
Preparar el siguiente sistema:
Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de 5 minutos, leer en
espectrofotómetro a 530 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (520-550 nm),
llevando el aparato a cero con agua destilada.
Las lecturas pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos, excepto para la bilirrubina directa
que debe leerse a los 5 minutos exactos. Si se lee antes, habrá subvaloración de los
resultados por reacción incompleta.
Si se lee después, habrá sobrevaloración porque comienza a reaccionar la bilirrubina
libre

Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de 5 minutos, leer en

espectrofotómetro a 530 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (520-550 nm),
llevando el aparato a cero con agua destilada. Las lecturas pueden efectuarse entre 4 y
15 minutos, excepto para la bilirrubina directa que debe leerse a los 5 minutos exactos.
Si se lee antes, habrá subvaloración de los resultados por reacción incompleta. Si se
lee después, habrá sobrevaloración porque comienza a reaccionar la bilirrubina libre.

VALORES DE REFERENCIA
Bilirrubina en suero o plasma
- Adultos:
DIRECTA: hasta 0.2 mg/dl
TOTAL: hasta 1 mg/dl
RECIÉN NACIDOS:
CUESTIONARIO II:

1. Haga un esquema de la síntesis y metabolismo de la bilirrubina

2. ¿Por qué se llama bilirrubina directa?

La bilirrubina directa se llama así porque se refiere a la forma de bilirrubina que

está directamente conjugada con la glucuronida en el hígado. Esta forma es
soluble en agua y puede ser excretada en la bilis directamente.

3. ¿Por qué se llama bilirrubina indirecta?

La bilirrubina indirecta se llama así porque se refiere a la forma de bilirrubina que

aún no ha sido conjugada en el hígado. Esta forma es insoluble en agua y
necesita ser procesada en el hígado para convertirse en bilirrubina directa antes
de poder ser excretada en la bilis.

4. ¿Cuál es el rol del reactivo A?

El reactivo A se utiliza en pruebas bioquímicas para medir la concentración de

bilirrubina total en suero o plasma. Este reactivo ayuda a convertir la bilirrubina
 indirecta en bilirrubina directa, que luego puede ser medida mediante métodos
colorimétricos para determinar la concentración total de bilirrubina.

5. ¿Con qué reactivo se une la bilirrubina para dar color?

La bilirrubina se une con el reactivo diazo en las pruebas bioquímicas para dar
color. Este proceso se utiliza en métodos colorimétricos para medir la
concentración de bilirrubina en muestras biológicas.

6. Haga un cuadro de clasificación de la hiperbilirrubinemia con ejemplos de

los tipos

Clasificación Causas Ejemplos

Hiperbilirrubinemia Hemólisis, como la Enfermedad de gilbert

indirecta anemia hemolítica
Hemólisis
Enfermedades como la
de Gilbert Anemia hemolítica

Hiperbilirrubinemia Se produce cuando hay Colecistitis

directa una obstrucción en las
vías biliares o una Colestasis intrahepática
disfunción hepática

Hiperbilirrubinemia mixta Combinación de los dos Hepatitis viral

tipos anteriores
Aumento de bilirrubina

Obstrucción de vías
biliares

7. ¿Qué es la ictericia?
Es una condición médica conocida por dar esa coloración amarillenta de la piel y
las mucosas, causada por el aumento en la concentración de bilirrubina en la
sangre, la cual se forma cuando se descomponen los glóbulos rojos viejos.

CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO

INTRODUCCIÓN
El ácido úrico es el producto del catabolismo de las purinas, bases de los ácidos
nucleicos. Se sintetiza en el hígado y en el intestino delgado por acción de la xantino
oxidasa. Su producción varía en función del contenido de purinas del alimento y de las
síntesis de Novo, de recuperación y degradación de las purinas. Es eliminado por los
riñones 66 a 75% El incremento de ácido úrico en sangre o hiperuricemia, conforme
incrementa su valor se asocia a artritis gotosa o urolitiasias (gota), de hecho la principal
complicación de la hiperuricemia es la artritis gotosa, cuando el ácido úrico es >9 mg/dl
la frecuencia de gota es de 4.9% La gota es una enfermedad metabólica que afecta
más a varones adultos en la etapa media de la vida o de edad avanzada y a mujeres
postmenopáusicas; se caracteriza por episodios de artritis aguda o crónica por depósito
de cristales de urato monosódico en la articulaciones y por todos en el tejido conjuntivo,
litiasis urinaria, nefropatía por urato e insuficiencia renal.

MUESTRA: Suero 3.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO

REACTIVOS
S.Standard: solución de ácido úrico 10 mg/dl.
A.Reactivo A: viales conteniendo uricasa (UOD), peroxidasa (POD), 4- aminofenazona
(4-AF) y ferrocianuro de potasio.
B.Reactivo B: solución de diclorohidroxibenceno sulfónico (DHS) en buffer fosfatos pH
7,4.

PROCEDIMIENTO
TÉCNICA CON REACTIVOS SEPARADOS
En tres tubos o cubetas espectrofotométricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D
(Desconocido), colocar: B
Mezclar suavemente e incubar 5 minutos en baño de agua a 37o C o 20 minutos a
temperatura ambiente (18-25o C). Retirar, enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm
o en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm), llevando el aparato a cero con el
Blanco.

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINAL

El color de reacción final es estable 30 minutos, por lo que la absorbancia debe ser
leída dentro de ese lapso.

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

ÁCIDO ÚRICO (mg/dl) = D x f

VALORES DE REFERENCIA: En adultos normales, con ingesta normal de proteínas,

se observan los siguientes rangos de valores:
Hombres: 2,5-6,0 mg/dl
Mujeres: 2,0-5,0 mg/dl

CUESTIONARIO III
1. ¿Cuáles son las características de los cristales de ácido úrico en la orina?

Los cristales de ácido úrico en la orina suelen ser de forma redonda o con forma de
diamante. Tienen un color amarillo pálido a marrón y son generalmente pequeños.
Además, pueden estar asociados con la presencia de precipitados de sales de amonio.

2. ¿Qué es la gota?
Es una forma de artritis que se caracteriza por ataques repentinos y severos de dolor,
enrojecimiento e hinchazón en las articulaciones, mayormente en el dedo gordo del pie.
Esto se produce debido a la acumulación de cristales de ácido úrico (producto de
desecho que se forma cuando el cuerpo descompone las purinas) en las articulaciones,
causando inflamación y dolor.

3. ¿Qué dieta debe seguir un paciente con hiperuricemia?

Un paciente con hiperuricemia debe tener una dieta controlada y específica para poder
controlar los niveles de ácido úrico en su organismo, por lo que se aconseja no
consumir alimentos ricos en este compuesto orgánico, como lo son las carnes rojas,
vísceras, mariscos, bebidas alcohólicas que son fermentadas, vino, cerveza, la sidra,
entre otros. También es muy importante que controle la ingesta calórica.

4. ¿Cuál es la base genética de la hiperuricemia?

La hiperuricemia puede tener una base genética multifactorial, implicando la interacción

de múltiples genes y factores ambientales. Sin embargo, se han identificado varios
genes que pueden contribuir a la predisposición genética a la hiperuricemia, incluyendo
genes asociados con el metabolismo de las purinas y el transporte de ácido úrico en
los riñones.

5. ¿Cuáles son las causas de la hiperuricemia?

La hiperuricemia puede ser causada por una producción excesiva de ácido úrico
debido a factores como una dieta rica en purinas, el consumo excesivo de alcohol,
enfermedades como la leucemia y ciertos medicamentos, así como una eliminación
inadecuada del ácido úrico por los riñones debido a condiciones como enfermedades
renales, diabetes, hipertensión arterial y ciertos medicamentos como los diuréticos.
Además, una combinación de factores genéticos y ambientales puede aumentar el
riesgo de hiperuricemia, lo que potencialmente conduce a complicaciones como la gota
y cálculos renales si no se controla adecuadamente.

6. ¿Qué es la gota primaria y la gota secundaria?

La gota primaria se refiere a la condición en la que la hiperuricemia y los ataques

agudos de gota ocurren sin una causa subyacente identificable, y generalmente está
relacionada con factores genéticos y estilo de vida, como la dieta y el consumo de
alcohol. Por otro lado, la gota secundaria se desarrolla como resultado de otra
condición médica subyacente que contribuye a la hiperuricemia, como enfermedades
renales, hipertensión arterial, diabetes, ciertos medicamentos y trastornos del
metabolismo. La gota secundaria puede requerir un enfoque diferente en el
tratamiento, abordando la causa subyacente además del control del ácido úrico en la
sangre.