Cuestionario Enzimología

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA SALESIANA
CARRERA DE BIOTECNOLOGÍA
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
DOCENTE: Carina Hidalgo
CUESTIONARIO
Resuelva las siguientes preguntas
1. ¿Cuáles son los aspectos característicos de las reacciones enzimáticas?

 Los catalizadores rebajan la energía de activación de las reacciones
 Influyen sólo en la velocidad de reacción sin alterar el estado de equilibrio.
 Actúan en pequeñas cantidades.
 Forman un complejo reversible con el sustrato.
 No se consumen en la reacción, pudiendo actuar una y otra vez.
 Muestran especificidad por el sustrato.
2. ¿Es cierto que todas las enzimas conocidas son de naturaleza proteica? Justifique.
Comúnmente todas las enzimas son de naturaleza proteica, sin

embargo, existen también catalizadores a nivel del ARN
conocidos como ribozimas que ayudan a acelerar reacciones de
forma específica.
3. ¿Qué propiedades presentan las enzimas que las diferencian de otros catalizadores?
 Mayor velocidad de reacción: La velocidad de una reacción catalizada por enzimas
es 106 a 1012 veces mayor que la de una no catalizada
 Condiciones de reacción: Las reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren a
temperaturas bajo los 100ºC, presión atmosférica y pH cercano a la neutralidad. En
contraste, las catalizadas químicamente requieren temperatura y presión elevadas
y pH extremos.
 Las enzimas tienen una mucho mayor especificidad que las reacciones catalizadas
químicamente respecto de los sustratos y sus productos.
 Capacidad de regulación: La actividad catalítica de muchas enzimas varía en
respuesta a sustancias diferentes del sustrato.
4. ¿Qué tipo de interacciones se ejercen entre la enzima y el sustrato para formar el
complejo ES?
El sustrato se une a la enzima a través de numerosas interacciones débiles como ser:

puentes de hidrógeno, electrostáticas, hidrófobas, etc, en un lugar específico llamado
el centro activo.
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
5. ¿A qué es igual la constante de Michaelis, de qué depende?
Indica la concentración de sustrato a la cuál la velocidad de reacción es la mitad de la

velocidad máxima. Este parámetro es independiente de la concentración de enzima, y
es característico de cada enzima según el sustrato utilizado.
6. ¿En cuánto tiempo se alcanza la Vmax?
Se obtiene cuando la velocidad de reacción se hace independiente de la concentración

de sustrato, cuando esto ocurre la velocidad alcanza un valor máximo. Este valor
depende de la cantidad de enzima que tengamos.
7. ¿Cómo varía la velocidad inicial para [S]<<K M y para [S]>> KM? ¿Qué utilidad tiene
trabajar en cada una de estas condiciones?
Una enzima con una Km baja en relación a la concentración fisiológica de sustrato

normalmente está saturada de sustrato y actuará a una velocidad más o menos
constante, independientemente de las variaciones en la concentración de sustrato
dentro del rango fisiológico.
Una enzima con una Km alta en relación con la concentración fisiológica de sustrato
normalmente no está saturada con sustrato y su actividad variará a medida que varía
la concentración de sustrato, por lo que la velocidad de formación del producto
dependerá de la disponibilidad. de sustrato.
8. ¿Cómo afectan los productos finales en la actividad enzimática?

La presencia de los productos finales puede hacer que la reacción sea más lenta, o
incluso invertir su sentido.
9. ¿Cómo afecta la concentración del sustrato en la actividad enzimática?
Si la concentración del sustrato es alta, puede saturar todas las moléculas de la

enzima. Entonces la velocidad de la reacción alcanza su máximo y la adición de más
sustrato no aumenta más la velocidad de la reacción.
10. Comente la diferencia entre sitio de unión y sitio catalítico.

El centro activo comprende un sitio de unión formado por los aminoácidos que están
en contacto directo con el sustrato y un sitio catalítico, formado por los aminoácidos
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
directamente implicados en el mecanismo de la reacción. Una vez formados los

productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reacción.
11. Comente la diferencia entre apoenzima y holoenzima.
La apoenzima es el componente de la enzima catalíticamente inactiva, mientras que la

holoenzima es la forma catalíticamente activa de la enzima, que consiste en la
apoenzima y el cofactor
12. Comente la diferencia entre Zimógeno e Isoenzimas.
Un zimógeno es un precursor enzimático inactivo, es decir, no cataliza ninguna

reacción como hacen las enzimas. Para activarse, necesita de un cambio bioquímico en
su estructura que le lleve a conformar un centro activo donde pueda realizar la
catálisis.
Las isoenzimas se definen como enzimas que cumplen la misma función, pero difieren
ligeramente en su estructura primaria y, por lo tanto, en su carga eléctrica. El método
de separación de proteínas, que difieren ligeramente entre sí, es el electroforético.
Resuelva los siguientes problemas
Problema 1
Se evalúa la actividad de la enzima aspartato- β- descarboxilasa mediante la producción

de CO2:
L-aspartato  L-alanina +CO2
T° = 303 K°
pH = 5.0
Se obtienen los siguientes resultados después de desarrollar un experimento para evaluar

el efecto del Treo- β – hidroaspartato:
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
En base a esto, determine los parámetros cinéticos (V max y Km) con y sin inhibidor e indique el
tipo de inhibición que genera el Treo- β –aspartato.
 Según la ecuación de Michaellis-Menten, grafique las curvas en base a los valores

expresados (Velocidad de reacción Vs. Concentración de sustrato).
 Genere los valores de la recta para los datos con inhibidor y sin inhibidor y
determine el tipo de inhibición en base a los valores de V max en cada caso.
Gráfico 1 enzimología
0.07 Vmax: (52,6)
0.06
0.05
Km: 52.6/2 = 26.3
0.04
0.03
0.02
0.01
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 0.045
Gráfico 2 Vmax: (25)

30
25
20
15
Km: 25/2 = 12.5
10
0
0 50 100 150 200 250
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
Ambos gráficos
0.18
0.17
0.16
0.14
0.12 0.12
0.1
0.08
0.068
0.06 0.06
0.046
0.04 0.04 0.035
0.02 0.019 0.023
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 0.045
Tipo de inhibición: Inhibidor no competitivo.

 Determine el tipo de inhibición y genere un gráfico adicional de la K m y la Vmax
utilizando la ecuación de Lineweaver-Burk (inversa de valores dados).
1/concentración 1/sin inhibidor 1/con inhibidor

0,04 0,06
0,03 0,046 0,17
0,02 0,035 0,12
0,01 0,023 0,068
0,005 0,019 0,04
Inversa
0.18
f(x) = 5.1864406779661 x + 0.0152203389830509
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04 f(x) = 1.17317073170732 x + 0.0119634146341463
0.02
0
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 0.045
Series2 Linear (Series2)

Series4 Linear (Series4)
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
Tipo de inhibición: Inhibidor no competitivo.
Problema 2
En diez mezclas de reacción conteniendo la misma concentración de enzima y distintas

concentraciones de sustrato, se determinaron las velocidades iniciales:
Sustrato (M) Vo (umoles min-1)

1,0.10-3 65
5,0.10-4 63
1,0.10-4 51
5,0.10-5 42
3,0.10-5 33
2,0.10-5 27
1,0.10-5 17
5,0.10-6 9,5
1,0.10-6 2,2
5,0.10-7 1,1
Utilizando la ecuación de Lineweaver-Burk, determine gráficamente KM y Vmáx.
1/Sustrato (M) 1/Vo (umoles min-1)

1000 0,0153
2000 0.0158
10000 0.0196
20000 0.0238
33333,3 0.0303
50000 0.0370
100000 0.0588
200000 0.1052
1000000 0.45
2000000 0.90
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 500000 1000000 1500000 2000000 2500000
Tenga en cuenta que uno de los factores críticos en la seguridad de esta determinación es la
escala elegida para ordenada y abscisa.
¿Qué rango de concentración de sustrato es más útil para estas determinaciones?
El más elevado.
Problema 3
Se estudió la dependencia de la velocidad de una reacción enzimática con la concentración de

sustrato. Se midieron en un volumen de reacción de 10 ml, las velocidades iniciales a distintas
concentraciones de sustrato y concentración constante de enzima:
Sustrato (M) Vo (umoles min-1)

5,0.10-2 0,25
5,0.10-3 0,25
5,0.10-4 0,25
5,0.10-5 0,20
5,0.10-6 0,071
5,0.10-7 0,0096
ENZIMOLOGÍA
ESTUDIANTE:
PARALELO:
a) ¿Cómo determina los valores de Vo?
La velocidad incial se realiza antes de que se consuma el 10% total del sustrato.
b) ¿Cuáles son los valores de Vmáx y KM?.

0.25 μmol
 El valor de V max = ya que por encima de [ S ] de 5 ×10−4 no
min
aumenta.
−5
 El valor de K m =1.25× 10 moles /l conociendo los valores de la Vmax y
utilizando las velocidades 0.20, 0.70, 0.0096 y sus correspondientes [ S ] .
c) ¿Cuáles son las velocidades iniciales a [S] = 1,0.10 -6 M y 1,0.10-1 M?.

[ S ] =1 ×10−6 =V =0.018 μmol / min
[ S ] =1 ×10−1 =V =0.25 μmol/min
d) Calcule la cantidad total de producto producido durante los primeros 5 minutos a [S]
2,0.10-3 M. en 5 min 0.25 ×5=1.25 μmol
[ 2 ×10−3 ] laV =V max =0.25 μmol / min
1.25 μmol/10−2 l=1.25 ×102 μmol / l

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Resuelva las siguientes preguntas

1. ¿Cuáles son los aspectos característicos de las reacciones enzimáticas?

Comúnmente todas las enzimas son de naturaleza proteica, sin

El sustrato se une a la enzima a través de numerosas interacciones débiles como ser:

5. ¿A qué es igual la constante de Michaelis, de qué depende?

Indica la concentración de sustrato a la cuál la velocidad de reacción es la mitad de la

6. ¿En cuánto tiempo se alcanza la Vmax?

Se obtiene cuando la velocidad de reacción se hace independiente de la concentración

Una enzima con una Km baja en relación a la concentración fisiológica de sustrato

8. ¿Cómo afectan los productos finales en la actividad enzimática?

9. ¿Cómo afecta la concentración del sustrato en la actividad enzimática?

Si la concentración del sustrato es alta, puede saturar todas las moléculas de la

10. Comente la diferencia entre sitio de unión y sitio catalítico.

directamente implicados en el mecanismo de la reacción. Una vez formados los

11. Comente la diferencia entre apoenzima y holoenzima.

La apoenzima es el componente de la enzima catalíticamente inactiva, mientras que la

12. Comente la diferencia entre Zimógeno e Isoenzimas.

Un zimógeno es un precursor enzimático inactivo, es decir, no cataliza ninguna

Resuelva los siguientes problemas

Se evalúa la actividad de la enzima aspartato- β- descarboxilasa mediante la producción

L-aspartato  L-alanina +CO2

Se obtienen los siguientes resultados después de desarrollar un experimento para evaluar

 Según la ecuación de Michaellis-Menten, grafique las curvas en base a los valores

Gráfico 2 Vmax: (25)

Tipo de inhibición: Inhibidor no competitivo.

1/concentración 1/sin inhibidor 1/con inhibidor

Series2 Linear (Series2)

Tipo de inhibición: Inhibidor no competitivo.

En diez mezclas de reacción conteniendo la misma concentración de enzima y distintas

Sustrato (M) Vo (umoles min-1)

Utilizando la ecuación de Lineweaver-Burk, determine gráficamente KM y Vmáx.

1/Sustrato (M) 1/Vo (umoles min-1)

¿Qué rango de concentración de sustrato es más útil para estas determinaciones?

Se estudió la dependencia de la velocidad de una reacción enzimática con la concentración de

Sustrato (M) Vo (umoles min-1)

a) ¿Cómo determina los valores de Vo?

b) ¿Cuáles son los valores de Vmáx y KM?.

c) ¿Cuáles son las velocidades iniciales a [S] = 1,0.10 -6 M y 1,0.10-1 M?.

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