1141 Es 4
1141 Es 4
1141 Es 4
1141
Medio selectivo y diferencial para la detección de Listeria spp, particularmente Listeria monocytogenes.
Información práctica
Aplicaciones Categorias
Aislamiento selectivo Listeria
Industria: Clínica / Alimentación
Regulaciones: ISO 11290
Principios y usos
La Base de Agar para Listeria Palcam, utilizada con suplementos, es un medio selectivo y diferencial para Listeria spp. Está recomendado por la norma
ISO 11290 para la detección y enumeración de Listeria monocytogenes en productos alimenticios y muestras clínicas, y también se puede utilizar para
muestras ambientales.
Se emplea después de una etapa de enriquecimiento primario y secundario, utilizando el Caldo de Enriquecimiento para Listeria (Cat.1120). Permite un
fácil diagnóstico diferencial de Listeria monocytogenes utilizando un indicador de doble sistema: Esculina/Hierro y Manitol/Rojo fenol. Todas las
especies de Listeria hidrolizan la esculina a esculetina, que reacciona con los iones hierro produciendo un ennegrecimiento del medio.
El cloruro de litio incluido en el medio, junto con la ceftazidima, el Sulfato de polimixina B y la acriflavina del suplemento, inhiben el crecimiento de las
bacterias acompañantes presentes en los alimentos y que pueden hidrolizar la esculina. Las peptonas y el almidón de maíz proporcionan una base rica
en nutrientes para el crecimiento. El extracto de levadura es fuente de vitaminas, particularmente del grupo B. La glucosa es el carbohidrato
fermentable. El citrato de amonio férrico mejora el crecimiento de L. monocytogenes.
El sistema de diferenciación Manitol/Rojo fenol se utiliza para diferenciar Listeria spp, que no fermentan manitol, de otras especies que ocasionalmente
crecen en el medio como enterococos o estafilococos. La diferenciación se logra mediante el aumento de la acidez del medio, lo que hace que el
indicador de rojo fenol cambie el color del medio de rojo a amarillo. La confirmación de Listeria se realiza mediante pruebas de identificación bioquímica
y serológica.
Fórmula en g/L
Glucosa 0,5 Agar bacteriológico 10
Esculina 0,8 Citrato de amonio férrico 0,5
Fécula de maíz 1 Manitol 10
Peptona 23 Rojo fenol 0,08
Cloruro sódico 5 Extracto de levadura 3
Cloruro de litio 15
Fórmula típica g / L * Ajustada y/o suplementada según sea necesario para cumplir con los criterios de rendimiento.
Preparación
Suspender 34,4 gramos del medio en 500 ml de agua destilada. Mezclar bien y disolver por calentamiento con agitación frecuente. Hervir durante un
minuto hasta su completa disolución. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-50 ºC y agregar asépticamente un vial de
Suplemento Selectivo para Listeria Palcam (Cat. 6004). Homogeneizar suavemente y dispensar en placas de Petri.
Instrucciones de uso
Para la detección y enumeración de Listeria monocytogenes y Listeria spp. según la ISO 11290:
Enriquecimiento primario:
- Pesar 25 g (o 25 ml) de la muestra y agregar 225 ml de Caldo Listeria 1/2 Fraser (Cat. 1120 + Cat. 6002). Homogeneizar e incubar a 30 ºC durante
25±1 h.
Enriquecimiento secundario:
- Inocular 0,1 ml de cultivo del Caldo Listeria 1/2 Fraser incubado (independientemente de su color) en 10 ml de Caldo Listeria Fraser (Cat. 1120 + Cat.
6001).
Incubar a 37 ºC durante 24±2 horas en condiciones aeróbicas.
Plaqueo e identificación:
- Del cultivo de enriquecimiento primario se inocula la superficie de Agar Listeria según Ottaviani y Agosti (Cat. 1345), para obtener colonias bien
separadas.
- A partir del cultivo de enriquecimiento secundario, se repite el procedimiento, inocular la superficie del Agar Listeria de acuerdo con Ottaviani y Agosti,
el Agar para Listeria Palcam (Cat. 1141) y otro medio como el Agar Oxford (Cat. 1133)
- Para Agar Listeria según Ottaviani y Agosti incubar durante un total de 48±2 h.
- Para Agar Lisetria Palcam incubar a 35±2 ºC durante 24-48 h.
- Para Agar Oxford incubar a 35±2 ºC durante 24-48 h.
Confirmación:
- Seleccione las colonias presuntivas y lleve a cabo las pruebas de confirmación para L. monocytogenes o Listeria spp.
Control de calidad
Solubilidad Apariencia Color del medio deshidratado Color del medio preparado Final pH (25ºC)
Sin restos Polvo fino Beige Rojo 7,2±0,2
Test microbiológico
Según la ISO 11133:
Condiciones de incubación: (35±2 ºC / 24-48 h).
Condiciones de inoculación: Productividad cuantitativa (100±20. Min. 50 CFU) / Selectividad (10^4-10^6 CFU) / Especificidad (10^3-10^4 CFU).
Almacenamiento
Temp. Min.:2 ºC
Temp. Max.:25 ºC
Bibliografía
ISO NORMATIVE 11290-2:Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection and enumeration of Listeria
monocytogenes -- Part 2: Enumeration method.
Van Netten, P., I. Perales A. Van de Moosalijk G.D.W. Curtis and DAA Mossel 1989 Liquid and solid selective differential media for the detection and
enumeration of L. monocytogenes and other Listeria spp. Int. J. of Food Microbiol 8: 299-317.
Farber JMDW Warburton and T. Babiuk, 1994 Isolation of Listeria monocytogenes from all food and environmental samples.